海南省汉族人群2型糖尿病与甲状腺腺瘤相关基因THADA单核苷酸多态性的关联

孙军萍 黎宗保 韩耀光

(海南省三亚中心医院 海南省第三人民医院内分泌科，海南 三亚 572000)

我国2型糖尿病(T2DM)发病人数呈逐年上升的趋势〔1〕。目前发现与T2DM发病相关的多个基因位点〔2〕，越来越多的易感基因也逐渐被人们挖掘。在目前被发现的18个与T2DM相关的基因(区)中，甲状腺腺瘤相关基因(THADA)最早是被全基因组关联研究(GWAS)发现的与欧洲人T2DM相关的易感基因之一，长度约365 kb，具有38个外显子，位于人类染色体2p21〔3〕。海南为移民岛，生活习惯和工作均有其特殊性，与福建省等纬度接近的省份比，其T2DM发病率较高，海南四季天气严酷，长期室外劳作，体力消耗大和部分居民缺乏锻炼，T2DM早期诊断和控制效果均较差〔4〕。本研究利用HapMap数据库，并另外选择5个位点研究THADA单核苷酸多态性(SNP)与海南省汉族人群T2DM的关联。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2014年6月至2017年6月海南省三亚中心医院T2DM患者124例和糖耐量正常者(NGT组)120例。纳入标准〔5〕：①所有患者符合WTO1990中关于T2DM的诊断；②个体间无血缘关系。排除标准：①具有潜在特殊类型糖尿病者如1型糖尿病(T1DM)及成年型糖尿病(MODY)；②合并甲状腺疾病、肿瘤疾病、风湿、类风湿疾病及糖皮质激素治疗者。NGT者入选标准：①口服葡萄糖耐量试验(OGTT)、空腹血糖(FPG)和餐后2 h血糖(2 hPG)正常；②无T2DM家族史。两组男女比例及男性腰围无差异(P>0.05)，与NGT组比较，T2DM组年龄较高、男性和女性的糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹胰岛素(Fins)、FPG、2 hPG和腰臀比(WHR)较高，体重指数(BMI)较低(P<0.05，P<0.001)，见表1。

表1 两组临床特征比较

1.2方法 询问受试者病史及家族史，空腹10 h后测量体重、身高、腰围、计算BMI及测量右上臂血压。均行75 g OGTT，取OGTT 2 h胰岛素及血糖、Fins及FPG。胰岛素抵抗评价采用胰岛素抵抗指数(HOMA-IR，FPG×Fins/22.5)，胰岛细胞功能评价采用胰岛β细胞功能指数(HOMA-β，20×Fins/22.5)。采用葡萄糖氧化法测定血糖，化学发光免疫法测定胰岛素。基因分型：采用盐析法提取外周血白细胞DNA。在HapMap数据库基础上，增加THADA区域前后5 kb和10 kb的序列信息，条件：r2>0.8、MAF>0.1并选择tag单核苷酸多态性(SNP)。单碱基延伸的引物和聚合酶链式反应(PCR)多重反应采用Iplex Gold技术设计，基因分型采用质谱技术，各位点重复分型对10%的样本量进行检测，计算各位点基因分型结果符合率使分型质量得已验证。

1.3统计学方法 采用Plin1.06软件、SAS软件、Qvanto软件进行χ2检验、线性回归分析、效力检验。

2 结 果

2.1海南省汉族人群T2DM与THADA基因SNP的关联 120例NGT人群和124例T2DM患者成功分型了THADA基因区域的5个位点：rs13026309、rs6739828、rs4952986、rs13022691和rs13029250。分型成功率>94%，重复10%样本量的分型结果一致率>96%。NGT组中THADA基因区域的5个位点均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。HapMap中国汉族人群数据库的数据与次要等位基因频率数据相同。相加遗传模式中未发现T2DM与THADA基因区域的5个位点相关。经年龄、性别及BMI调整得P值。显性和隐性遗传模式中也未发现T2DM与5个位点相关。见表2。

表2 海南省汉族人群T2DM与THADA基因SNP的关联

2.2不同性别THADA基因rs4952986、rs6739828、rs13022691、rs13029250、rs13026309位点与T2DM的相关性 经调整BMI和年龄后多重检验发现女性组在相加遗传模式下的rs4952986位点与HOMA-β(P=0.008 9)、HOMA-IR(P=0.012 2)及Fins(P=0.009 5)相关。3种基因分型中的水平为CC

表3 不同性别THADA基因rs4952986位点与T2DM的相关性

表4 不同性别THADA基因rs6739828位点与T2DM的相关性

表5 不同性别THADA基因rs13022691位点与T2DM的相关性

续表5 不同性别THADA基因rs13022691位点与T2DM的相关性

表6 不同性别THADA基因rs13029250位点与T2DM的相关性

表7 不同性别THADA基因rs13026309位点与T2DM的相关性

3 讨 论

THADA是甲状腺腺瘤靶向基因，是最早发现与甲状腺腺瘤相关的基因之一。此后有学者指出在T2DM患者中THADA有异常表达〔6〕。研究显示〔7〕，德国莱比锡人群中T2DM被发现与THADA基因存在相关联的倾向，此外该基因还与0.5 Fins及FPG具有密切联系。在此基础上有国外研究报道〔8～10〕T2DM在丹麦锡克族、印度、芬兰、意大利人群中未见与THADA基因相关倾向。

本研究选取的人群及THADA基因位点与其他研究小组具有一定差别，报道显示〔11〕，THADA基因与T2DM表型相关的位点在欧洲人群HapMap数据库中基因频率为0.917∶0.083，但在中国汉族人群中该比例为1∶0。本研究结果显示，与T2DM表型相关的rs4952986位点在欧洲人群HapMap数据库中基因频率为1∶0，但是在中国汉族中基因频率为0.6∶0.4，因此在欧洲人群中该位点不存在多态性，研究显示〔12，13〕该位点是亚洲人群独特位点，因此研究该位点对了解中国T2DM患者中相关表型具有一定意义。本研究结果显示，在NGT人群中HOMA-IR、HOMA-β及Fins水平与rs4952986位点T等位基因表达水平呈现明显正相关。研究显示〔14，15〕在机体附带胰岛素抵抗状态下，NGT人群中携带该位点的患者，血液生化检测可见胰岛素水平增加，胰腺β细胞功能亢进，进而能够维持机体血糖水平处于正常水平。本研究在男性患者中未见HOMA-IR、HOMA-β及Fins水平与rs4952986位点T等位基因表达水平相关，但是在所有女性患者中存在明显上述关联。主要原因：①入组男性患者中按照国际糖尿病协会对中国向心性肥胖患者制定标准，在本研究中的男性患者腰围低于国际糖尿病协会制定的肥胖切点，而女性患者腰围满足上述标准；②本研究中入组男性患者样本量较少，而女性样本量较大，因此在男性患者中易出现假阴性，进而导致结果误差。此外本研究发现女性与男性胰岛素抵抗能力方面背景具有差异，本研究认为与HOMA-IR、HOMA-β及Fins水平与rs4952986位点未在本研究男性患者中观察到有关。rs4952986不编码蛋白，其位于THADA基因内含子区，研究显示，rs4952986位点上携带T等位基因数量与Fins水平及胰岛素抵抗能力、胰岛细胞分泌功能亢进呈正相关，本研究认为与rs4952986位点参与THADA基因表达调控相关。