肺心病患者肺部感染的病原菌分布特征及IL-6基因-572C/G多态性的研究

肖月梅 董锦华 于波

(1.榆林市第二医院呼吸内科，陕西 榆林 719000；2.宝鸡市陈仓医院内科，陕西 宝鸡 721300)

慢性肺源性心脏病简称肺心病，患者由于病程长，导致肺脏结构和生理功能退行性改变，呼吸道免疫防御功能及机体抵抗力下降，易并发肺部感染[1]。近年来，由于抗生素的大范围应用，耐药菌株逐年增多，增加肺部感染的治疗难度。研究[2]发现，IL-6基因多态性影响血清IL-6水平，与慢性阻塞性肺疾病、肺结核等肺部感染性疾病以及全身炎性反应综合征的发生发展有关。其中临床上研究最多的是IL-6基因-572C/G多态性，但其在肺心病合并肺部感染患者中的研究鲜有发表。本研究主要探讨肺心病患者肺部感染的病原菌分布特征，分析IL-6基因-572C/G多态性与肺部感染的相关性。

1 资料与方法

1.1一般资料 2018年1月至2019年4月我院收治的肺心病住院患者80例作为研究对象。根据是否合并肺部感染，将患者分为肺部感染组31例和非感染组49例。其中肺部感染组男20例、女11例，年龄42～83岁，平均(58.3±3.5)岁，病程7～24年，平均(10.6±3.4)年。非感染组男31例、女18例，年龄44～82岁，平均(58.1±3.7)岁，病程8～23年，平均(10.4±3.2)年。纳入患者病情均符合中华医学会呼吸病学分会(2011年)制定的肺心病诊断标准[3]，肺部感染诊断参照美国胸科学会与感染病学会2005年制定的《医院获得性肺炎治疗指南》[4]。已排除患有肿瘤、呼吸道以外部位感染、合并其他严重内科疾病的患者。两组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。患者及家属均知情同意。

1.2方法 两组均抽取5 mL空腹外周静脉血，置于含EDTA 的抗凝管中，置于-80℃保存待检。患者晨起使用加入3%双氧水的生理盐水漱口后，用力咳痰，取痰液样本置于无菌容器保存。取部分痰液样本，行细菌接种及分离培养，操作按照《全国临床检验操作规程》(第3版)进行，采用Phoenix TM全自动微生物鉴定系统(BD公司)进行细菌鉴定，采用纸片扩散法(K-B法)行药敏试验，参照美国临床试验标准研究所(2016版)判定标准。取部分血液样本，离心取上清，采用Elisa法检测血清IL-6水平，试剂盒购自美国RD工程有限公司。取部分血液样本，使用人全血DNA 提取试剂盒提取全血基因组，试剂盒购自无锡百泰克生物技术有限公司。IL-6基因-572C/G多态性采用PCR-RFLP检测。取5μL PCR扩增产物，过柱纯化，37℃MbiI内切酶消化4 h，反应结束后行2%琼脂糖凝胶电泳，根据电泳结果判断基因型。PCR扩增条件见表1。

表1 PCR扩增条件

1.3统计学方法 采用SPSS 22.0统计学软件进行数据分析，采用WH0NET5.6软件行细菌耐药分析，正态计量数据用(Mean±SD)表示，行t检验，计数资料采用n，%，行χ2检验，采用Hardy-Weinberg平衡检验基因多态性频率分布，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1肺部感染病原菌分布及构成比 31例肺心病合并肺部感染患者共检出病原菌46株，其中，革兰阴性菌32株(69.57%)，主要为铜绿假单胞菌；革兰阳性菌14株(30.43%)，主要为金黄色葡萄球菌。见表2。

表2 肺部感染病原菌分布及构成比[n(%)]

2.2主要病原菌对常用抗菌药物的耐药性分析铜绿假单胞菌对左氧氟沙星最耐药、对亚胺培南最敏感，金黄色葡萄球菌对青霉素G最耐药、对万古霉素最敏感。见表3。

表3 主要病原菌对常用抗菌药物的耐药性分析(n,%)

2.3血清IL-6水平比较 肺部感染组的血清IL-6水平(291.35±86.42)ng/L显著高于非感染组的(106.28±61.89)ng/L(t=11.152，P<0.05)。

2.4IL-6基因-572C/G位点基因型分布比较 经Hardy-Weinberg平衡检验，两组群体基因遗传平衡，样本资料具有群体代表性(P=0.734、0.691)。两组的CC、CG、GG基因型频率比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表4。

表4 IL-6基因-572C/G位点基因型分布比较[n(%)]

2.5IL-6基因-572C/G位点基因型频率分布比较 的C/G等位基因频率分别66.13%(41例)、33.87%(21例)，与非感染组的65.31%(64例)、34.69%(34例)比较差异无统计学意义(χ2=0.011，P>0.05)。

3 讨 论

肺心病患者由于病程持续时间长，呼吸道黏膜防御功能下降，导致全身系统发生退行性病变，机体抵抗力下降，易发生肺部感染[5]。本研究中，31例肺部感染组共检出病原菌46株，其中，革兰阴性菌32株(69.57%)，主要为铜绿假单胞菌；革兰阳性菌14株(30.43%)，主要为金黄色葡萄球菌；铜绿假单胞菌对左氧氟沙星最耐药、对亚胺培南最敏感，金黄色葡萄球菌对青霉素G最耐药、对万古霉素最敏感。细菌产生抗生素耐药性的主要机理为诱导产生修饰酶，改变抗生素靶位及胞浆膜通透性，传播耐药基因等。抗生素使用频率增加是细菌产生耐药性的主要原因[6]。肺心病患者由于自身抵抗力下降，易发反复感染，抗生素使用频繁，容易产生耐药菌。因此，肺心病患者并发肺部感染时，尽快进行病原学诊断，根据药敏结果选择敏感抗生素治疗，不仅能保证疗效，还有助于减少耐药菌的产生几率。

IL-6是由活化的单核细胞、成纤维细胞等分泌的一类细胞因子，具有刺激淋巴细胞增殖、巨核细胞分化，促进B细胞分泌免疫球蛋白的功能[7]。IL-6在炎症急性期作为非特异性炎症因子参与肺部炎症反应过程。细菌进入肺部后，其分泌的内毒素激活肺部上皮细胞、巨噬细胞及淋巴细胞，使IL-1β、IL-6、TNF-α分泌增加[8]。本研究中，肺部感染组的血清IL-6水平显著高于非感染组(P<0.05)，提示IL-6在肺炎感染的发生发展中发挥重要作用。

研究单个基因多态性对肺部感染的影响，易受外界环境、样本纳入方式及数量、基因突变频率低等外界因素影响[9]。此外，位于第7号染色体上的IL-6基因，全长5kb，具有5个外显子及4个内含子，IL-6基因多态性存在区域主要集中于启动子区，包括-174 G/C、-373 AnTn、-572 G/C、-597 G/A[10]。上述4个多态性位点都可能是基因结合序列，一旦发生基因突变，均会影响IL-6基因调控和表达，与多种疾病患者体内的IL-6水平特征性升高有关[11]。本研究中，肺部感染组的CC、CG、GG基因型频率和C/G等位基因频率与非感染组比较，差异无统计学意义(P>0.05)，提示IL-6水平上升可能与IL-6 基因启动子区其他位点，以及肺部感染加剧患者体内水平炎症反应，导致IL-6大量分泌有关。研究[12]发现，除了IL-6基因-572位点C/G多态性之外，-174位点多态性也与炎症性疾病易感性有关。因此，本研究具有一定局限性，下一步应增加样本量，联合相关基因同时分析，进一步验证研究。

综上所述，本院肺心病合并肺部感染以革兰阴性菌为主，对抗菌药物表现不同程度耐药性，应结合药敏试验结果选择抗菌药物治疗。IL-6基因启动子区-572C/G基因多态性可能与肺心病患者肺部感染易感性无关。