PARK7、miR-331-5p及抗氧化酶水平与帕金森痴呆精神行为症状的相关性

姜黎梅 王英 郭小锋

(宝鸡市人民医院神经内科，陕西 宝鸡 721000)

帕金森病(Parkinson’s disease，PD)一种发病率较高的与年龄、环境、遗传等因素相关的进展缓慢的神经退行性疾病，患者主要临床表现为震颤、运动迟缓、僵硬等。帕金森病末期容易进展为帕金森痴呆(parkinson’s disease dementia，PDD)，严重影响患者的正常生活[1]。由于PD早期症状相对隐匿，疾病进展缓慢，疾病不易在早期确诊，多数患者就诊时已处于病理损害的中晚期阶段。PDD被认为是皮质性痴呆及皮质下痴呆的典型代表，若能在早期对PD患者病情及时诊断和评估，对于控制患者病情，减少PDD疾病的发生和进展具有积极意义。重组人帕金森病蛋白7(recombinant human parkinson disease protein 7，PARK7)具有抗氧化应激反应、蛋白水解酶功能与PD患者氧化应激反应存在密切关系[2]。血浆外泌体miRNA被证实与机体多种疾病存在密切关系，研究[3]表明，在PD患者中存在miR-331-5p普遍高表达的情况。抗氧化酶是机体防止氧化应激、清除活性自由基的一类酶，PDD患者较PD早期多巴胺神经元抗氧化能力和氧化应激失衡更严重，导致抗氧化酶水平明显异常。本文主要探讨PARK7、miR-331-5p及抗氧化酶水平与PDD患者精神行为症状的相关性。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取我院2018年10月至2020年9月收治的80例PDD患者，纳入患者均经临床检查确诊，符合原发性PD及PDD的诊断标准[4]；患者及家属知情同意，自愿签署知情同意书；临床资料完整，能够完成相关量表评价。已排除肝肾功能异常者；合并脑部创伤史、脑血管疾病、免疫性疾病、急慢性感染、血液系统疾病及恶性肿瘤患者；合并其他神经退行性疾病；文盲、精神系统异常及其他无法配合研究者。将所有患者依照临床痴呆评分量表(CDR)[5]分为轻度组(CDR评分0.5或1分，n=50)和中重度组(CDR评分2或3分，n=30)，其中轻度组男29例，女21例，年龄47～79岁，平均(67.2±3.8)，病程0.5～10年，平均(5.1±1.3)年，中重度组男18例，女12例，年龄49～80岁，平均(68.1±4.1)岁，病程0.5～9年，平均(4.9±1.4)年。另选取50名同期于我院接受体检的健康志愿者作为对照组，其中男30例，女20例，年龄45～85岁，平均(68.3±4.4)岁。三组一般比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究取得我院伦理委员会批准。

1.2方法 有研究对象采用神经精神调查问卷(NPI)评估精神行为症状，分数越高，症状越严重。采用统一PD评定量表运动检查(UPDRS)评估运动功能，评分越低，运动功能越好。采用蒙特利尔认知评估量表(MoCA)及简易精神状态检查表(MMSE)评估认知功能，MoCA量总分30分，分数越高认知功能越好；MMSE量表总分30分，分数越高，认识功能越高。并采用生活活动能力量表(ADL)评估日常生活活动能力，分数越高，能力越好。所有研究对象(包括对照组)均于入院当日清晨抽取5 mL静脉血，3 000 r/min离心分离血清，采用酶联免疫吸附法(Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay ,ELISA)测定炎症因子C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、抗氧化酶指标谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)及PARK7水平，试剂盒均购自日立高科技贸易(上海)有限公司，严格执行说明书各项操作。采用RT-qPCR法测定血清外泌体miR-331-5p水平，取离心获得的血清3 000 r/min离心15 min清除细胞碎片，TRI试剂分离血浆RNA。采用反转录试剂盒(购自北京诺博莱德科技有限公司)反向转录合成cDNA，采用美国Applied Biosystems7900实时聚合酶链反应机检测血浆外泌体miR-331-5p表达，引物序列：miR-331-5p，上游：5’-AUACCUA-3’，下游：5’-CGCAACA-3’；GADPH，上游：5’-GTCAACGGATTG-GTCTGTATT-3’，下游：5’-AGTCTTCTGG-GTGGCAGTAT-3’，试剂盒购自丹麦Denmark公司，反应条件：95℃ 10 min，95℃ 15s，40个循环，60℃延伸1 min。采用2-△△Ct检测miR-331-5p表达。

2 结 果

2.1问卷调查评分的比较 中重度组患者NPI、UPDRS评分显著高于轻度组和对照组，MoCA、MMSE、ADL评分均显著低于轻度组和对照组(P均<0.05)。见表1。

表1 各组问卷调查评分结果的比较分,n=50]

2.2血清炎症因子水平的比较 中重度组的各项血清炎症因子水平显著高于轻度组(P<0.05)；轻度组、中重度组的各项血清炎症因子水平均显著高于对照组(P<0.05)。见表2。

表2 各组血清炎症因子水平的比较

2.3血清PARK7、miR-331-5p及抗氧化酶水平比较 中重度组患者血清PARK7、miR-331-5p表达水平显著高于轻度组，GSH-PX、SOD、CAT水平显著低于轻度组(P<0.05)。轻度组和中重度组患者血清PARK7、miR-331-5p表达水平显著高于对照组，GSH-PX、SOD、CAT水平显著低于对照组(P<0.05)。见表3。

表3 各组血清PARK7、miR-331-5p及抗氧化酶水平的比较

2.4PARK7、miR-331-5p及抗氧化酶水平与各血清炎症因子的相关性 PARK7、miR-331-5p表达与血清炎症因子CRP、TNF-α、MCP-1存在明显正相关性(P<0.05)；GSH-PX、SOD、CAT水平与血清炎症因子CRP、TNF-α、MCP-1存在明显负相关性(P<0.05)。见表4。

表4 PARK7、miR-331-5p及抗氧化酶水平与各血清炎症因子的相关性

2.5PARK7、miR-331-5p及抗氧化酶水平与各问卷量表评分的相关性 PARK7、miR-331-5p与NPI、UPDRS评分存在明显正相关性，与MoCA、MMSE、ADL存在明显负相关性(P<0.05)；GSH-PX、SOD、CAT与NPI、UPDRS评分存在明显负相关性，与MoCA、MMSE、ADL存在明显正相关性(P<0.05)。见表5。

表5 PARK7、miR-331-5p及抗氧化酶水平与各问卷量表评分的相关性

3 讨 论

研究[6]指出，PD患者由于多巴胺分泌不足，从而影响患者的计划能力、工作记忆、注意力等执行能力。多巴胺与神经末梢的促性腺激素释放激素存在轴突联系，多巴胺能抑制其分泌而影响人的情绪。本研究结果显示，帕金森伴中重度痴呆患者NPI、UPDRS评分显著高于帕金森伴轻度痴呆患者，MoCA、MMSE、ADL评分均显著低于轻度痴呆患者。提示帕金森伴痴呆患者存在明显的认知功能、运动功能障碍及精神行为症状异常，严重降低了患者的日常生活活动能力。

PD患者多巴胺分泌不足还会导致机体抗氧化物过量消耗，使生物膜受到氧化自由基的破坏，进而引发机体氧化应激和炎症反应，影响神经元代谢异常，导致PD患者痴呆的发生并进一步影响其精神行为症状[7]。本研究中，中重度PDD患者机体CRP、TNF-α及MCP-1水平较轻度PDD患者及健康对照人群均明显升高。研究[8]表明，炎症反应与PD发病机制密切相关，促炎性细胞因子对于多巴胺能神经元具有毒性作用，导致神经元细胞损伤凋亡。CRP为非特异性炎症反应生物学标志物，CRP升高可导致脑内神经细胞损伤。PD患者脑内小胶质细胞激活，促使CRP等炎性细胞因子大量释放和聚集。TNF-α可促进小胶质细胞合成集落刺激因子参与炎症反应，TNF-α还能影响细胞钙离子水平，造成细胞损伤。MCP-1参与了机体炎症反应的多个环节，研究认为MCP-1与PD患者抑郁程度、认知功能障碍等存在明显相关性。因此，炎症水平与PDD患者疾病发生、发展及精神行为症状存在密切关系。

氧化应激是导致PDD发生的重要因素，PARK7为PD发病早期常染色体隐性基因，可有效发挥蛋白水解酶及抗氧化应激作用[9]。PARK7可作为机体氧化应激感应器，保护神经元不受氧化应激损害[10-11]。本研究中，PDD患者中PARK7水平明显升高，GSH-PX、SOD、CAT明显降低，且随着病情进展各指标变化更显著。提示随着PDD疾病进展，机体氧自由基大量产生，而抗氧化酶水平降低，导致氧化应激反应增强，进而损伤黑质多巴胺神经元，导致PDD神经行为特征等病情发展。miR-331-5p与PD疾病严重程度存在密切关系。另有研究[12]证实，miR-331-5p与PD患者机体氧化应激的发展存在一定的关联。本研究中，PDD患者同样存在miR-331-5p表达明显升高的情况。相关性分析结果显示，PARK7、miR-331-5p及抗氧化酶水平与炎症因子及各量表评分存在明显相关性。PARK7、miR-331-5p及抗氧化酶水平与PDD更严重机体抗氧化应激能力密切相关，反映了PDD患者病情变化，影响了患者的精神行为症状的进展。

综上所述，PARK7、miR-331-5p及抗氧化酶水平与帕金森痴呆患者炎症水平及精神行为症状有关，检测其水平有助于PDD患者的临床诊断和治疗。但是对于药物治疗后轻度组和中重度组PARK7、miR-331-5p及抗氧化酶水平变化情况，及其与帕金森病患者精神行为症状是否存在一致性变化仍有待进一步研究。