猪繁殖与呼吸综合征与副猪嗜血杆菌病混合感染的诊断

关昕睿，李璐璐，穆英丽，王子璇，郭晓玉，解 佳，王学静,2★，陈立功★

（河北农业大学动物医学院 071001；2.河北省畜牧兽医研究所 071000）

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)俗称“猪蓝耳病”，以怀孕母猪的繁殖障碍(流产、产死胎、产木乃伊胎、产弱仔)和仔猪的呼吸困难为主要临床特征。目前我国流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)以美洲型为主，欧洲型毒株检出较少；猪病临床上形成了经典毒株、高致病性毒株、类NADC30毒株及欧洲型毒株等并存的局面。PRRSV已成为对我国养猪业危害较大的病原之一。副猪嗜血杆菌病是由副猪嗜血杆菌引起的以发热、呼吸困难、运动障碍等为特征的传染病，是猪场中较为常见的、危害日渐严重的疾病。2020年11月，河北某养殖场保育猪发病，主要表现为发热、皮肤发绀、咳嗽、腹式呼吸、消瘦、零星死亡等。为了精准防控猪病，对病猪进行了临诊症状观察、剖检病理变化观察、病毒分子生物学诊断及细菌学诊断，初步判定该场的保育猪发生了PRRSV与副猪嗜血杆菌的混合感染，现将诊断情况总结如下。

1 发病情况

据猪场管理人员介绍，发病猪为该场保育仔猪，于2020年11月底开始表现发烧、咳嗽、皮肤发紫；发病后使用氟苯尼考等药物治疗，但病猪病情未见明显改善。发病后1周时发病率达到35%，死亡率为5%。

2 临床症状

初期病猪精神沉郁，采食量下降，部分病猪耳部、臀部皮肤发紫，伴有咳嗽症状；病猪体温达40.1℃～41.5℃左右。发病1周后部分病猪可见前肢或后肢关节不同程度肿胀，起立困难，并开始出现腹式呼吸、被毛粗乱、体重下降，偶见神经症状，有的病猪开始死亡。

3 剖检病变

对3头发病、死亡仔猪进行常规病理剖检，病变总结如下：仔猪消瘦（1/3）；耳部或臀部皮肤发紫（2/3）。浅表淋巴结肿大，切面为灰白色（1/3），或浅表淋巴结见出血（2/3）。心包腔轻度积液（1/3），心外膜与心包之间见灰白色、丝状纤维素样分泌物（1/3）；肺脏局部见灰白色膜状纤维素样分泌物（1/3），或尖叶和心叶颜色呈紫红色、质地坚实（2/3），局部有灶状肺气肿（1/3）。腹膜下、肝脏、脾脏表面见絮状黄白色纤维素样分泌物（1/3）。肝脏局部呈土黄色（1/3）。肾脏呈土黄色，散在针尖大出血点（1/3）。左后肢肿胀关节腔打开后流出黏稠分泌物（1/3）。其他器官未见肉眼可见病变。

4 病毒分子生物学诊断

取剖检猪肺脏、脾脏等组织，及时送实验室；按常规方法进行病料的研磨与离心。按病毒RNA/DNA抽提试剂盒说明书提取离心后上清液中病毒RNA和DNA。提取RNA经反转录得到cDNA。取cDNA和DNA分别进行PRRSV和猪圆环病毒2型（Porcine circovirustype 2，PCV 2）的PCR扩增。PCR产物经 2%琼脂糖凝胶电泳，结果表明本次采集的猪病料呈PRRSV阳性（图1），呈PCV 2阴性（电泳图略）。

图1 PRRSV PCR产物电泳结果

5 细菌学检测

取病猪心包液、关节腔分泌物等分别接种于TSA平板、麦康凯琼脂平板和十六烷三甲基溴化铵琼脂平板，37℃培养48h，麦康凯平板和十六烷三甲基溴化铵琼脂平板均未见细菌生长；TSA平板厌氧培养后可见边缘整齐、稍突起、表面光滑湿润、针尖大小、圆形菌落。代表性纯化单菌落经革兰氏染色、镜检，结果可见分离菌为革兰氏阴性、无芽孢、具有多形性（单个球杆状、长的及丝状）菌体。根据细菌培养和染色镜检结果，可初步判断该细菌为副猪嗜血杆菌。用纸片扩散（K-B）法检测该副猪嗜血杆菌对阿莫西林、氟苯尼考、林可霉素、庆大霉素、新霉素、恩诺沙星、多西环素和红霉素等8种抗菌药物的敏感性。药敏试验结果表明，副猪嗜血杆菌对庆大霉素、新霉素和多西环素均高敏；对氟苯尼考低敏；对其余4种药物均耐药。

6 讨论与分析

据了解，该猪场发病保育猪群接种过猪瘟疫苗和伪狂犬疫苗。根据以上临床诊断和实验室诊断结果，初步判定该猪场保育发生了PRRSV与副猪嗜血杆菌的混合感染。

6.1 防控PRRS的主要措施

目前对PRRS没有特效药物可以治疗。因此，在控制PRRS方面，应做好以下工作：

及时清除传染源，切断传播途径。严格执行引种前检疫和新引进的PRRSV阴性种猪的隔离制度；建议彻底实行全进全出，至少要做到产房和保育两个阶段的全进全出。淘汰发病猪；隔离饲养感染PRRSV后康复仔猪；育肥出栏后圈舍及用具及时彻底消毒再使用。应做好冬季的通风与保温工作，经常消毒，防止PRRSV的空气传播。加强PRRS血清学和病原学方面监测，及时做好PRRS预警。有条件情况下，在对PRRSV序列进行分析的基础上，决定是否接种PRRS疫苗。在疫苗毒株与流行毒株序列高度匹配的情况下，可以考虑接种疫苗来预防PRRS，否则不予考虑接种PRRS疫苗。

6.2 防控副猪嗜血杆菌病的主要措施

平时猪场应重视消毒与猪舍卫生工作。加强仔猪饲养管理，冬季寒冷季节要注意增强猪只得抵抗力，减少应激反应。因副猪嗜血杆菌血清型较多，目前尚无一种灭活疫苗同时对猪所有的致病菌株产生交叉免疫力。常发病猪场可以考虑使用副猪嗜血杆菌多价灭活苗，或用自家苗接种健康仔猪。为控制本病的发生发展和耐药菌株出现，应进行药敏试验，科学使用抗菌药物，以免贻误治疗该病的时机。