反相高效液相色谱法测定食品中防腐剂和甜味剂探析

2021-09-24王棋棋

食品安全导刊 2021年25期

王棋棋

（中纺检测（福建）有限公司，福建泉州 362200）

食品中防腐剂和甜味剂的存在，对食品品质、口味有直接的影响，也是食品安全管理至关重要的内容。测定食品中防腐剂和甜味剂的含量及类型，是食品安全管理的依据。反相高效液相色谱法测定食品中防腐剂和甜味剂，该方法具有准确性好、样品前处理简单、精密度高的优良特点。根据食品中防腐剂和甜味剂的测定要求，探究反相高效液相色谱法的应用非常必要。

1 材料与方法

1.1 试剂与设备

在测定前，准备食品添加剂标准品，主要为糖精钠、阿斯巴甜、山梨酸、安赛蜜等。同时准备92 g/L亚铁氰化钾溶液、183 g/L乙酸锌溶液、0.02 mol/L的乙酸铵溶液[1]。

日本岛津带He脱气装置的高效液相色谱仪；国产电动离心沉淀剂；带二极管阵列的检测器；感量为0.001 g的电子分析天平；转速大于8 000 r/min的离心机；涡旋振荡器；超声波清洗仪[2]。

1.2 实验方法

1.2.1 测定条件

流动相溶剂A为0.02 mol乙酸铵溶液，由超声后二水乙酸220 g与500 mL水加入30.0 mL冰乙酸后定容至1 000 mL配制；流动相溶剂B为甲醇，色谱纯[3]。梯度洗脱程序为：5.0%甲醇，1.0～0.8 mL/min，0～5 min；设定初始浓度为5.0%溶剂B和95.0%溶剂B，糖精钠、脱氢乙酸出峰时间相同，色谱峰单独积分计算难度大，可以调整为10%溶剂B+90%溶剂A，流速为0.8～1.0 mL/min，洗脱时间为5～20 min。由于阿斯巴甜在5.0%溶剂B和95.0%溶剂B洗脱时，出峰时间延后，影响了分析效率，在20.0 min后，可以调整流动相比例为38%溶剂B+62%溶剂A，流动速度为1.0 mL/min，洗脱时间为20～40 min。山梨酸在洗脱比例为5.0%溶剂B和95.0%溶剂B，且流动速度为1.0 mL/min时，与样品中其他干扰杂峰分离，可以在洗脱时调整洗脱时间范围为40～48 min。

设定在230 nm波长下进行安赛蜜、山梨酸测定，在210nm波长下进行阿斯巴甜、糖精钠测定，在293 nm波长下进行脱氢乙酸测定。同时设定检测器柱温为37.0～39.0 ℃，进样量为10 μL，灵敏度为 0.08 aufs[4]。

1.2.2 样品处理

对于酱油等液体样品，直接取样并加水稀释20倍，以50%氨水调节酸碱值至中性偏弱碱性。调节酸碱值后进行超速离心，取上清液备用。

含二氧化碳、酒精的软饮料，需要取10.00 g加热后去除二氧化碳、酒精，放入50 mL比色管内用水定容并经滤膜过滤，滤膜孔径为0.45 μm。

对于酱菜、果脯等固体样品，切碎后混合均匀加入8.0 mL水，超声30 min时后用水定容到10.0 mL，定容后经0.45 μm滤膜过滤处理。饼干等基质成分复杂的样品，需要在利用石油醚脱脂处理的基础上，粉碎并均匀混合，加入等量的2份水以及1份200 g/L硫酸锌溶液和20.0 g/L氢氧化钠溶液，超声0.5 h后，用水定容到25.0 mL经0.45 μm滤膜过滤待测定[5]。

酸奶等固液混合样，需将其混合均匀后加入100 g/L硫酸铵溶液以及等量的两份水，超声30 min后，用水定容到10.0 mL经0.45 μm滤膜过滤处理备用。

2 结果与分析

2.1 定量测定结果

依据前述测定条件，对前期处理完毕的样品进行测定，得出结果为：可乐含安赛蜜12.5 mg/kg；酸奶中糖精钠含量为155.2 mg/kg，山梨酸含量为112.3 mg/kg，阿斯巴甜含量为936.5 mg/kg、安赛蜜含量为35.1 mg/kg；饼干含阿斯巴甜61.3 mg/kg；酱菜含安赛蜜32.6 mg/kg；果脯含阿斯巴甜32.6 mg/kg，安赛蜜含量为469.5 mg/kg；酱油含脱氢乙酸123.5 mg/kg。重复测定6次后，得出测定结果的相对标准偏差在3.5%～8.5%，准确度较高。

2.2 线性范围与相关系数

对反相高效液相色谱法进行方法学考察验证，其中山梨酸标准线性范围在2.0～20.0 μg/mL时达到最佳线性关系，相关系数为0.999 85，糖精钠标准线性范围为0.0～100.0 μg/mL，相关系数为0.999 98，脱氢乙酸在1.0～100.0 μg/mL时达到最佳线性关系，相关系数为0.999 97，阿斯巴甜的标准线性范围在0.0～100.0 μg/mL，相关系数为0.999 78；安赛蜜的标准线性范围在2.0～50.0 μg/mL，相关系数为0.999 45。

2.3 加标回收率

利用电子天平称取5.0 g酱菜、果脯、酸奶、饼干（油炸）、可乐、酱油各6分，添加糖精钠、脱氢乙酸、山梨酸、安赛蜜、阿斯巴甜标准物，添加量分别为 50.0 μ g、150.0 μg、200.0 μg、500 μg，得到的最大回收率以及对应的添加量、变异系数如表1所示。利用该方法对食品中山梨酸、脱氢乙酸等防腐剂以及糖精钠、安赛蜜、阿斯巴甜等甜味剂进行检测，可以获得准确性较好的结果，满足大批量食品防腐剂、甜味剂检测要求。