福建地区血清HER-2/neu蛋白参考值的建立及分析

余 鸿 吴贻晨 叶曦蔓 陈勇戎 杨 婧 徐 翔

（1 福建省立金山医院司法鉴定所，福建 福州 350001；2 福建医科大学基础医学院，福建 福州 350122；3 福建省心血管重点实验室，福建 福州 350001；4 福建中医药大学，福建 福州 350122；5 福建医科大学，福建 福州 350122）

乳腺癌是全世界女性恶性肿瘤发病率最高的疾病，2018年全年因为乳腺癌而死亡的人数就已经超过了60万[1]。男性乳腺癌（male breast cancer，MBC）比较少见，在全球所有男性癌症及乳腺癌患者中占比均不到1%[2-3]。但是随着近年来全世界乳腺癌发病率整体的提高，男性乳腺癌也呈现了上升的趋势，并且患病人群呈年轻化，40%左右的患者出现了肿瘤复发，而且将近一半以上的患者出现远处转移的现象。临床上通常应用人表皮生长因子受体-2（human epidermal growth factor receptor 2，HER2）、雌激素受体（estrogen receptor，ER）、孕激素受体（progesterone，PR）、及Ki67将乳腺癌划分为HER2过表达、Luminal A、Luminal B、三阴性4个亚型来指导临床治疗[4]。本研究采用西门子公司的HER-2/neu蛋白测定试剂盒（化学发光法），当今国内使用的并不广泛，主要原因为缺乏国内临床应用数据和试剂的成本高。而且，国内目前没有针对男性乳腺癌的管理指南，大部分的诊疗是借鉴女性乳腺癌（female breast cancer，FBC），但在临床病理特征和预后方面，男性与女性患者都存在一定的差异。因此，本研究将同时收集男性及女性血清标本，探讨血清HER-2/neu蛋白在不同性别及年龄段的差异性，建立全面的血清HER-2/neu蛋白正常参考值，进一步为临床应用提供更有意义的指导。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2019年12月至2021年6月来我院体检的成人323名，其中男122名，女201名，年龄18～81岁，平均年龄43岁。所有试验对象均不存在心、肝、肾病以及高血压和糖尿病等。此次研究经过医院伦理委员会审核同意，试验对象均知情同意。

1.2 方法 抽取空腹静脉血5 mL于一次性真空促凝管，3 000 r/min离心10 min，分离血清待测。采用全自动化学发光免疫分析仪（ADVIA Centaur CP，Siemens，德国）以化学发光法检测HER-2/neu蛋白，仪器和操作步骤都严格按照说明书进行，其说明书参考值上限（第95分位点）为15.2 ng/mL。

1.3 统计学方法 采用软件SPSS 26.0进行数据的整合及分析。Kolmogorov-Smimov 进行数据的正态性检验。对于正态分布的数据，采用均数±标准差表示；对于非正态分布的数据，采用中位数和百分位数表示；Mann-Whitney检验不同性别的血清HER-2/neu 蛋白水平之间的差异性，并且用Kruskal-Wallis检验分析不同年龄段与血清HER-2/neu 蛋白的相关性，P＜0.05表示差异有统计学意义。根据 CLSI C28-A3标准文件制定医学参考值范围。

2 结果

2.1 HER-2/neu蛋白频率分布比较 共检测323名正常成人，Kolmogorov-Smirnov检验显示血清HER-2/neu蛋白数据呈偏态分布（P=0.008＜0.05），因此采用中位数和百分位数表示，运用百分位数法确定单侧上限95%的医学参考值。见图1。

图1 HER-2/neu蛋白频率分布直方图

2.2 不同性别成人血清HER-2/neu 蛋白比较 323名正常成人中，男性122名，平均值为10.4 ng/mL，中位数为10.0 ng/mL，95%医学参考值为＜14.9 ng/mL；女性201名，平均值为10.2 ng/mL，中位数为10.0 ng/mL，男性与女性成人血清HER-2/neu蛋白差异无统计学意义（P=0.408＞0.05）。95%医学参考值为＜15.3 ng/mL。见表1。

表1 血清HER-2/neu蛋白结果统计（ng/mL）

2.3 不同年龄段成人血清HER-2/neu蛋白比较 323名正常成人共分为30岁以下、31～40岁、41～50岁、51～60岁和60岁以上共5个年龄段，各年龄段的中位数和单侧上限95%参考值见表2。年龄段的血清HER-2/neu蛋白相关性用Kruskal-Wallis检验秩方差分析，P＜0.05表示差异有统计学意义。30岁以下、31～40岁、41～50岁与51～60岁比较，差异有高度显著性。见表3。

表2 不同性别年龄段血清HER-2/neu 蛋白中位数和参考值上限比较（ng/mL）

表3 年龄段的血清HER-2/neu蛋白成对比较

3 讨 论

乳腺癌是临床上比较常见的恶性肿瘤，患者的生活和生存受到了威胁。尤其是术后出现的复发和转移严重影响了患者的生存率，因此需要具有较高敏感性和准确性的指标对病程进行监测[5-8]。目前，HER-2是乳腺癌较为明确的治疗靶点。

人类表皮生长因子受体-2（HER-2/neu），是一个具有酪氨酸激酶活性的跨膜受体蛋白。HER-2/neu具有胞内区、跨膜区和胞外区三个部分。其中，胞外区即ECD（Extracellular Domain）为细胞外配体结合区，它可以由肿瘤细胞自体分泌或脱落进入血液循环并被检测到，称为HER-2 ECD。在基质金属蛋白酶的作用下，Her2-neu ECD可从乳腺癌细胞表面裂解并游离至血液循环中，因此HER-2/neu表达量可以通过血清学方法检测。检测血清HER-2/neu的浓度成为可兼具易于被患者接受与组织HER-2/neu水平有较强关联性和可连续检测，受主观影响小等优点的新乳腺癌评估方法。但由于发展时间较短和临床数据不足，血清HER-2/neu尚未成为主要诊断依据。HER-2目前既是乳腺癌患者重要的预后指标，也是抗HER-2药物治疗的主要监测指标[5]。虽然国内外主要以原位杂交（ISH）或免疫组织化学（ICH）作为检测HER-2蛋白或基因的方法[6]，但是对于HER-2阳性乳腺癌的患者进行动态监测、辅助判断疾病进程或治疗效果上，能够研发出更经济、便捷、实时的血清检测HER-2方法是至关重要的。大量的研究发现乳腺癌患者血清中HER-2的水平与组织中HER-2的表达有一定的相关性[7-8]。而且，近代以来各项临床检测和治疗方法都逐渐向低创，微创甚至无创的方向发展，如果血清检查即能为组织检查提供关联性证据，那无疑将减轻患者的痛苦，提高患者的生活质量。这符合目前的研究趋势，也有望在临床进行运用。

HER-2/neu基因主要在人体的胚胎发育时期表达，参与了多种组织器官的生长和发育。成人正常的组织中，HER-2/neu基因通常是以单拷贝存在，表达水平较低，主要表达在在呼吸道、胃肠道、乳腺和泌尿生殖道上皮。但在肿瘤患者中，HER-2/neu基因被异常激活，拷贝数明显增加，细胞表面的HER-2/neu蛋白过度表达。这将促使细胞恶性增殖并表现出抗凋亡、诱导新生血管形成的特性。近年来，研究发现被确诊的乳腺癌患者中有20%～30%存在HER-2/neu基因扩增或蛋白过表达情况，在晚期乳腺癌中 HER-2/neu 基因高表达更加常见[9-10]。

检测外血清中HER-2/neu胞外端的浓度能够反映乳腺癌患者 HER-2/neu蛋白水平的实时状态，利于监测术后乳腺癌患者HER-2/neu的表达变化，也对早期发现乳腺癌的复发和转移有一定帮助。因此，作为内分泌治疗、化疗及分子靶向治疗的疗效观察指标，是具有潜在价值的乳腺癌标志物。

检验参考值的设定根据研究目的与数据类型有不同的方法，对于呈正态分布的数据，95%参考值可以用均数±1.96（双侧）或1.64（单侧）标准差的方法设定，非正态分布数据可以用百分位数法及曲线拟合法等。本文数据为非正态分布，因而采用了百分位数法。

本研究结果显示，按性别及年龄分组进行参考值比较，男性与女性成人血清HER-2/neu 蛋白差异无统计学意义；年龄段30岁以下、31～40岁、41～50岁与51～60岁比较，差异有高度显著性（P=0.000＜0.05）。总人数的单侧上限95%参考值为＜15.0 ng/mL，51～60岁年龄组的单侧上限95%参考值为＜15.8 ng/mL，参考值结果相近，没有必要单独设定参考值。

综上所述，将福建地区正常成人血清HER-2/neu蛋白参考值设定为＜15 ng/mL较为合适。