荧光定量聚合酶链式反应检测乙型肝炎病毒的临床价值

李秀萍，何彩云，黄泽棋，魏海清

（1.佛山市人民政府机关门诊部检验科；2.佛山市人民政府机关门诊部内科； 3.佛山市第二人民医院检验科，广东佛山 528099）

乙型肝炎是指乙型肝炎病毒（HBV）感染，病程在半年以上或发病日期不明，伴有慢性肝炎表现的患者，属于临床常见的传染性疾病，其具有较高的患病率和感染率，随着病情进展，严重者可出现肝硬化、原发性肝癌等病变。因此，临床及时诊断乙型肝炎并准确判定病情严重程度具有重要的意义。实施酶联免疫吸附法（ELISA）进行检测具有操作简单、检测快速等优点，但该方法只能反映患者对HBV病毒的免疫应答状态，而不能准确反映机体HBV感染复制情况和传染危险性[1]。荧光定量聚合酶链式反应（PCR）技术对HBV患者基因的检测具有重要的应用价值，其可直接、动态地反映HBV病毒的复制状态及传染危险性，从而判断患者的疾病状况[2]。本研究旨在探讨荧光定量PCR技术检测慢性HBV的临床价值，以期为患者临床治疗提供参考价值，现将研究结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析2019年3月至2020年12月在佛山市第二人民医院治疗的192例乙型肝炎患者的临床资料，其中男性121例，女性71例；年龄25~67岁，平 均（44.61±4.82）岁；体 质 量45~72 kg，平 均（66.63±3.18）kg。诊断标准：参照《乙型肝炎防治指南（2015年更新版）》[3]中的相关诊断标准。纳入标准：符合上述诊断标准者；无肾、心、肺等重要脏器功能障碍者；无精神系统疾病者。排除标准：凝血功能障碍者；患有恶性肿瘤疾病者；患有免疫系统和严重内科疾病者。本研究经佛山市第二人民医院医学伦理委员会批准后实施。

1.2 方法

1.2.1 HBV免疫学检测 患者首先采用ELISA法进行乙型肝炎病毒血清学标志物 -M（HBV-M）的定性检测。抽取患者清晨空腹静脉血5 mL，于4 ℃条件下放置2 h后，分离血清，检测乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎表面抗体（HbsAb）、乙型肝炎e抗原（HbeAg）、乙型肝炎e抗体（HbeAb）、乙型肝炎表面核心抗体（HbcAb），严格按照试剂说明书进行检验操作与结果评定。

1.2.2 HBV-DNA定量测定 采用PCR技术对HBV- 脱氧核糖核苷酸（DNA）水平进行检测，血样采集方法同1.2.1，置于真空惰性分离胶促凝管中，进行离心操作（3 000 r/min，10 min）制备血浆标本，采用荧光定量分析仪进行荧光定量PCR测定乙型肝炎病毒HBV-DNA 水平。所有操作均由同一位有经验的医进行。

1.3 观察指标 ①分析ELISA法检测HBV-M结果。②分析荧光定量PCR技术检测HBV-DNA结果。③比较不同病情程度患者HBV-DNA水平。

1.4 统计学分析 采用SPSS 23.0统计软件进行数据分析，计数资料用[ 例(%)]表示，行χ2检验；计量资料用（±s）表示，行t检验。以P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ELISA法检测HBV-M结果 本研究192例乙型肝炎患者血液标本中，HBV-M的定性检测有8种模式，其中HBsAg+HbeAg+HbcAb、HBsAg+HbsAb+HbcAb模式阳性检出率分别为25.52%、35.42%，均高于其他模式阳性检出率，差异均有统计学意义（均P<0.05），见表1。

表1 ELISA检测HBV-M结果

2.2 荧光定量PCR检测HBV-DNA结果 HBsAg+HbeAg+ HbcAb、HBsAg+HbsAb+HbcAb模式的HBV-DNA 阳性检出率高于其他模式的阳检出性率，HBsAg+ HbeAg+HbcAb、HBsAg+HbsAb+HbcAb模式的HBVDNA表达水平高于其他模式的HBV-DNA表达水平，差异均有统计学意义（均P<0.05），见表2。

表2 PCR检测HBV-DNA结果

2.3 不同病情程度患者HBV-DNA水平 重度乙型肝炎患者HBV-DNA水平高于轻、中度患者，差异均有统计学意义（均P<0.05），见表3。

表3 不同病情程度患者HBV-DNA水平比较 (±s,×104copies/mL)

表3 不同病情程度患者HBV-DNA水平比较 (±s,×104copies/mL)

注：与轻度组比，△P<0.05；与中度组比，▲P<0.05。 HBV-DNA：乙型肝炎病毒 - 脱氧核糖核苷酸。

病情 例数 HBV-DNA轻度 51 23.60±4.40中度 98 147.85±20.05△重度 43 254.80±27.01△▲F值 1 691.102 P值 <0.05

3 讨论

乙型肝炎属于临床常见的一种感染性疾病，其具有较强的传染力，当机体感染HBV后可引起免疫性病理损害，且肝细胞的受损程度与机体免疫应答密切相关。乙型肝炎患者早期症状较为隐匿，大部分患者被确诊时已处于中晚期，因此错过了最佳的治疗时机，随着疾病进展，可引发肝硬化、肝癌等，严重威胁患者的生命安全。因此，临床早期诊断并及时给予有效的治疗具有重要的意义。

目前临床主要采用的检测方法有ELISA法、荧光定量PCR技术等，ELISA法具有操作简单、价格低廉、灵敏度高等特点，但由于该检测方法只能通过反映患者对HBV感染免疫应答状态，从而间接地对HBV进行诊断，无法对HBV感染程度进行测定，故存在一定的局限性[4]。荧光定量PCR技术能够反映HBV的复制情况和传染性，能够对乙肝病毒DNA的转录进行检验，避免出现漏诊，该技术的应用提高了对HBV的检测准确性，从而为临床病情诊断提供重要依据[5-6]。

HBV-M主要包括HBsAg、HbsAb、HbeAg等，其中HBsAg+HbeAg+HbcAb又被称为“大三阳”，表明机体存在HBV感染且病毒处于活跃期，具有病毒数量多且传染性强的特点；HBsAg+HbsAb+HbcAb属于“小三阳”，HBsAg+HbeAg又被称为“大二阳”，表明机体存在HBV感染，但需根据肝功能损伤情况来进行相应的治疗[7-8]。本研究结果显示，ELISA法检测HBV-M结果中，HBsAg+HbeAg+HbcAb、HBsAg+HbsAb+ HbcAb模式阳性检出率较高，同时荧光定量PCR技术检测HBV-DNA结果中，HBsAg+HbeAg+HbcAb、HBsAg+HbsAb+HbcAb模式的HBV-DNA阳性检出率较高，表明ELISA法和PCR技术均可准确判断患者是否处于HBV感染期。同时本研究结果显示，HBsAg+ HbeAg模式的阳性率低于HBsAg+HbeAg+HbcAb，但HBV-DNA表达水平仍较高，表明该模式下患者仍存在HBV-DNA复制，因此临床不能仅依靠血清学来判定结果，仍需通过检测HBV-DNA对患者病情进行监测。相关研究显示，HBV-DNA水平越高，则其复制能力也随之增强，可加重对肝脏组织的损害，严重者甚至导致肝硬化、肝衰竭等，增加肝癌的发生风险[9]。本研究中，重度乙型肝炎患者HBV-DNA水平高于轻、中度患者，提示HBV-DNA水平与慢性乙肝患者的病情呈正相关。

综上，相较于ELISA法，荧光定量PCR技术可定量反映病毒感染、复制情况，为早期诊断乙型肝炎、监测病情归转提供重要依据。