脑脊液流式细胞术检测在急性白血病并发中枢神经系统白血病中的预测诊断价值

熊晓珊 黎承平

摘要：目的：本文的研究成果旨在深入探讨脑脊液 （cerebrospinalfluid，CSF）流式细胞术（flow cytometry，FCM）对中枢神经系统白血病（centralnervoussystem leukemia，CNSL）的预测诊断价值。方法：本课题研究工作人员采用多色流式细胞术CD45/SSC设门法，对294例急性白血病患者CSF细胞免疫表型检测情况数据进行了统计分析，同时进行脑脊液细胞形态学（Cytomorphology of cerebrospinal fluid，CC）检测，比较两种检测方法的临床应用优势。结果：所统计294例患者中，116例为急性淋巴细胞白血病 （acutelymphomaleukemia，ALL）患者 ，FCM 检测有22例发现异常表型细胞，阳性率为18.97%，而CC检测，仅1例发现异常细胞，阳性率为0.86% ，差异具有统计学意义（P<0.01）;178例为急性非淋巴细胞白血病（acute nonlymphocyticleukemia，ANLL）患者，FCM检测有13例发现异常表型细胞，阳性率为7.30%，而CC检测，仅1例发现异常细胞，阳性率为0.56%，差异也具有统计学意义（P<0.01）。结论：脑脊液FCM检测的敏感性明显优于脑脊液CC检测，急性白血病患者行FCM分析更有助于CNSL的预测诊断。

关键词：脑脊液流式细胞术;细胞形态学;中枢神经系统白血病

【中图分类号】R322.8 【文献标识码】A 【文章编号】2026-5328（2021）05-018-03

中枢神经系统白血病（CNSL）是急性白血病的一种严重临床并发症，为更好地预防及治疗CNSL，早期诊断也就显得尤为关键。目前评价中枢神经系统受累的金标准是腰椎穿刺后脑脊液中白血病细胞的检测，即脑脊液CC检测，但是该方法敏感性有限，而FCM敏感性高，而且可以很好地达到危险分层的目的，FCM已经初步在临床上开展应用，但尚未纳入常规检查，仍需要大数据的分析支持[1]。Maria Ilaria Del Principe等回顾性地评估了240名新诊断为急性淋巴细胞白血病的成人患者隐匿性中枢神经系统疾病的发生率及其对预后的影响，证明流式细胞术可以检测隐匿性中枢神经系统疾病的灵敏度较高[2]。本研究对昆明医科大学第一附属医院收治的294例白血病患者行脑脊液FCM检测和脑脊液CC检测的阳性率做了分析比较，从而对FCM在CNSL中的预测诊断价值进行评估，现报道如下。

1.资料与方法

1.1研究对象

选取昆明医科大学第一附属医院血液科2019年4月至2020年6月住院的294例急性白血病患者，116例为ALL，患者资料见表1;178例为ANLL，患者资料见表2。所选患者诊断均符合标准，诊断标准参照《血液病诊断及疗效标准》[3] 严格执行。

1.2 CNSL诊断标准

参照文献[3]标准，①有中枢神经系统的症状和体征，CNSL患者多数可能会出现颅内压过高的表现，比如：头痛、呕吐、抽搐等，部分患者可出现视网膜出血、眼睑下垂、视物模糊、视乳头水肿以及口角歪斜等;②实验室检查显示颅内压增高（>0.02kPa）、脑脊液白细胞计数>5×106/L、脑脊液细胞学涂片可见确切白血病细胞;蛋白质>450mg/L或潘氏试验阳等;③排除了由于颅内大量出血或颅内占位等其他原因所造成的中枢神经系统症状和体征及所引起的脑脊液相似改变。

1.3方法

1.3.1 脑脊液常规及生化检查

观察脑脊液的颜色和形态，然后将其滴在计数池内，并进行细胞测定，分别进行脑脊液内白细胞和红细胞计数。然后使用全自动生化分析仪对患者脑脊液中含糖、蛋白质、氯离子等指标进行分析。

1.3.2 脑脊液CC检查

取新鲜脑脊液标本0.1ml，吹打均匀后滴入离心管内，将其与滤纸、拨片一起紧密固定在离心涂片机中制作脑脊液细胞涂片，干燥后开始行瑞-吉姆萨染色，然后使用显微镜仔细观察细胞涂片中细胞的形态。若明确发现幼稚原始的白血病细胞，则为阳性结果;反之，则为阴性结果。

1.3.3 脑脊液FCM检查

检验目的：通过流式细胞仪法对急性白血病/淋巴瘤患者脑脊液异常细胞群进行定性及定量分析。检验原理：脑脊液流式细胞学检测是基于白血病/淋巴瘤细胞免疫表型特点区分正常细胞及异常细胞，从而判断急性白血病/淋巴瘤是否有中枢侵犯。

检验方法：（1）制备样本：①准备流式专用管，标记姓名并编号;②将2ml脑脊液标本混匀，1000rp/m离心5分钟，弃上清;③向每个试管中分别加入提前准备的预混多色抗体约40ul;④放置于适合的室温（18-25°C），避光，孵育15-30分钟;⑤裂解红细胞：加入2ml 1X Lysing Solution，室温避光10分钟，1000rp/m离心5分钟，弃上清;加入3ml PBS（含0.5%BSA），混匀，1000rp/m离心5分钟，弃上清;加入500ul PBS悬浮细胞，待测。（2）上机检测。（3）结果分析：采用国际通用CD45/SSC设门法，分析目的细胞群的各个抗原表达情况，对白血病/淋巴瘤分型和亚型进行判定。（4）报告生成：使用CD45/SSC设门法，区分正常细胞群和异常细胞群;根据正常细胞群作为内对照，判定异常细胞表达抗原的阴阳性及强度变化;对异常细胞群进行免疫表型分析，最后得出结论。质量控制：取100ul IMMUNOTROL进行抗体标记，与常规样品相同步骤上机检测，参考正常值范围，判断质控结果[4，5，6]。FCM阳性：腰穿一次成功无明显组织损伤，脑脊液无混血，可检测到白血病细胞免疫表型;若脑脊液混血或是血性腦脊液，FCM白血病细胞免疫表型高于外周血幼稚细胞比例。FCM阴性：腰穿一次成功无损伤，脑脊液FCM未发现异常白血病细胞免疫表型;脑脊液混血但脑脊液FCM异常免疫表型低于外周血幼稚细胞比例。

1.4统计学分析

采用SPSS 24.0统计学软件进行数据分析，计数资料采用百分率表示，并采用χ2检验，以P<0.01为差异具有统计学意义。

2.结果

2.1 FCM以及CC共同检测116例ALL患者

FCM检测有22例发现异常表型细胞，阳性率为18.97%。经细胞形态学分析，仅1例发现异常细胞，其阳性率为0.86%，差异有统计学意义（χ2=10.642，P<0.01），见表3。

2.2 FCM以及CC共同检测178例ANLL患者

FCM检测有13例发现异常表型细胞，阳性率为7.30%。经细胞形态学分析，仅1例发现异常细胞，其阳性率为0.56%，差异有统计学意义（χ2=5.353，P<0.01），见表4。

3.讨论

中枢神经系统是白血病细胞的一个避护所，白血病潜藏其中可以逃避系统化疗药物，在引入有效预防性中枢神经系统治疗之前，高达60%的急性淋巴细胞白血病患者已经并发了首次中枢神经系统白血病。因此，准确检测和鉴定脑脊液中的白血病细胞对于深入了解白血病的发病机制和开发更好、更特异的中枢神经系统导向疗法至关重要[7]。而脑脊液流式细胞术的检测对于急性白血病合并中枢神经系统白血病的预防和诊断价值也逐渐得到凸显。

本研究结果和国内的一些进行回顾性研究和前瞻性研究都说明了FCM在CNSL中已经具有着重要的应用和临床意义，是脑脊液细胞学检查的一个重要补充方法[8，9，10，11]。FCM联合脑脊液常规、生化及CC检测可以提高CNSL诊断的阳性率[12]。脑脊液FCM检测阳性的患者建议按CNSL处理，并提出尽早进行异基因造血干细胞移植治疗[13]。

国外相关研究均显示脑脊液流式细胞术相比细胞形态学更具优势，可作为重要补充检测[14]。且FCM在发现早期无明显症状的中枢神经运动系统浸润中，具有着更强的早期临床诊断优越性。报告结果表明[15]，在高度怀疑或是考虑诊断早期中枢神经系统出现浸润的急性白血病患者中，与脑脊液CC检查相比，FCM的阳性检出率可以较其增高至少2-3倍。已有多项研究报告和临床证明[2]，在诊断成人急性淋巴细胞白血病患者中，流式细胞术可以高灵敏度地检测隐匿性中枢神经系统疾病（FCM阳性和CC阴性的状态），并且隐匿性中枢神经系统疾病的阳性状态与不良结果相关。FCM可以在诊断时更精确地识别和量化中枢神经系统受累患者的数量，这对疾病的临床病程和预后有显著影响，从而进一步细化当前的诊断风险分层过程。这种精细的中枢神经系统评估应该成为所有患者就诊时检查的常规工具。

综上所述，流式细胞术是一种对恶性血液系统疾病研究高度敏感的技术，脑脊液FCM在急性白血病并发CNSL中具备重要的临床预测诊断价值。

参考文献：

[1]Del Principe Maria Ilaria， Maurillo Luca， Buccisano Francesco， et al. Central nervous system involvement in adult acute lymphoblastic leukemia： diagnostic tools， prophylaxis， and therapy.2014， 6（1）：e2014075

[2]Del Principe Maria Ilaria， Buzzatti Elisa， Piciocchi Alfonso， et al. Clinical significance of occult central nervous system disease in adult acute lymphoblastic leukemia. A multicenter report from the campus all network. 2019.

[3]ZHANG ZN，SHEN D. Criteria for diagnostic and therapeutic effect of hematological diseases.[M]3re ed.Beijing：Science Press，2007：131-134.

[4]张之南等. 血液病学. 人民卫生出版社.2011， 719-748

[5]刘艳荣等. 实用流式细胞术-血液病篇. 北京大学医学出版社.

[6]王建中等.临床流式细胞分析. 上海：上海科学技术出版社，2005.8

[7]Alexander Popov， Guenter Henze， Tatiana Verzhbitskaya， et al. Absolute count of leukemic blasts in cerebrospinal fluid as detected by flow cytometry is a relevant prognostic factor in children with acute lymphoblastic leukemia. 2019， 145（5）：1331-1339.

[8]王永斌，张俊，苏勇，等.脑脊液流式细胞学检测在急性淋巴细胞白血病并发中枢神经系统白血病中的诊断价值[J].现代肿瘤医学，2020，28（10）：1723-1725.

[9]刘占云，张赟翔，郝杰，等. 流式细胞学在成人急性髓系白血病缓解后中枢神经系统白血病检测的临床应用及价值[J]. 临床血液学杂志，2020，247（02）：37-41.

[10]陈晶， 张会峰， 贺政新. 脑脊液流式细胞术诊断儿童中枢神经系统白血病的效能[J]. 医疗装备， 2019， v.32;No.395（22）：61-62.

[11]张岚，谷云风，郑媛君，张淑青，张伟华.脑脊液流式细胞检测在中枢神经系统白血病诊断中的价值[J].山西医药杂志，2016，45（7）：103-105.

[12]林祥伟， 张苏伟. 流式细胞术检测脑脊液白血病细胞在白血病诊断中的价值[J]. 中国基层医药， 2016， 23（014）：2138-2140.

[13]刘占云，张赟翔，郝杰，等. 流式细胞学在成人急性髓系白血病缓解后中樞神经系统白血病检测的临床应用及价值[J]. 临床血液学杂志，2020，v.33;No.247（02）：37-41.

[14]J. C. Jaime‐Pérez， M. F. Borrego‐López， R. A. Jiménez‐Castillo， et al. Comparison of conventional cytomorphology， flow cytometry immunophenotyping， and automated cell counting of CSF for detection of CNS involvement in acute lymphoblastic leukemia. 2018， 40（2）：169-174.

[15]J. C. Jaime‐Pérez et al. Comparison of conventional cytomorphology， flow cytometry immunophenotyping， and automated cell counting of CSF for detection of CNS involvement in acute lymphoblastic leukemia[J]. International Journal of Laboratory Hematology， 2018， 40（2） ： 169-174

昆明医科大学，云南 昆明 650500

昆明医科大学第一附属医院，云南 昆明 650032