250 g/L氟咯草酮乳油高效液相色谱分析方法

汪雪娟，高 翀，庞怀林

(1.上海泰禾化工有限公司,上海 201615；2.南通泰禾化工股份有限公司，南通 226407)

氟咯草酮(fluorochloridone)是原美国施多福公司(Staufer Chemical Co.) 20世纪70年代末开发、80年代中期投产的吡咯烷酮类旱田除草剂，其主要通过抑制植物体内类胡萝卜素的生物合成而发挥除草效果[1-3]，主要登记用于小麦、冬黑麦、马铃薯、向日葵等作物田防除各种阔叶杂草[4-6]。目前有关于氟咯草酮原药的分析方法[7]和氟咯草酮乳油制剂的GC-MS方法的报道[8]，但是氟咯草酮乳油制剂HPLC分析方法尚未见公开报道。氟咯草酮乳油是农业生产实际中使用最多最常见的一种剂型。为了确保该产品生产质量及其防治效果，建立一种稳定、准确、可靠、快速的250 g/L氟咯草酮乳油HPLC分析方法尤为重要。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

LC-20AD高效液相色谱仪配可调波长紫外检测器：岛津SPD-M20A二极管阵列检测器及色谱工作站Labsolution (日本岛津)；ML204型电子天平(瑞士梅特勒托利多集团)；2200T型超声波清洗仪(上海安谱科学仪器有限公司)；0.45 µm有机相滤膜(上海安谱实验科技股份有限公司)。

甲醇：色谱纯(上海安谱实验科技股份有限公司)；新蒸二次蒸馏水；氟咯草酮标样，质量分数99.0% (沈阳化工研究院)；250 g/L氟咯草酮乳油(南通泰禾化工股份有限公司)。

1.2 色谱条件

色谱柱为ZORBAX Eclipse XDB-C18柱 (250 mm×4.6 mm，内装5 μm填充物)；流动相为甲醇-水(体积比64∶36)，经滤膜过滤，脱气；流速为1.0 mL/min；检测波长为250 nm；柱温为(30±2) ℃；进样体积为10 µL。在上述色谱操作条件下，保留时间：顺式氟咯草酮约15.3 min，反式氟咯草酮约16.3 min。氟咯草酮标样和试样的高效液相色谱图见图1和图2。

图1 氟咯草酮标样的高效液相色谱图

图2 250 g/L氟咯草酮乳油的高效液相色谱图

1.3 溶液的配制

1.3.1 标样溶液的配制

称取约0.1 g (精确至0.000 1 g)氟咯草酮标样于50 mL容量瓶中，加入约 30 mL甲醇，超声振荡10 min，冷却至室温，用甲醇定容至刻度，摇匀；用移液管移取上述溶液5 mL于50 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。

1.3.2 试样溶液的制备

称取含0.1 g (精确至0.000 1 g) 250g/L氟咯草酮乳油试样于50 mL容量瓶中，加入约30 mL甲醇，超声振荡10 min，冷却至室温，用甲醇定容至刻度，摇匀；用移液管移取上述溶液5 mL于50 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。

1.4 测定

在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，待相邻2针氟咯草酮的峰面积相对变化小于1.0%，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

1.5 计算

试样中氟咯草酮的质量分数按式⑴计算，氟咯草酮的质量浓度按式⑵计算：

式中：X1为试样中氟咯草酮的质量分数(%)；X2为试样中氟咯草酮的质量浓度(g/L)；m1为氟咯草酮标样的质量(g)；A2为试样溶液中顺式与反式氟咯草酮峰面积总和的平均值；P为氟咯草酮标样的纯度(%)；m2为试样质量(g)；为试样前后2针标样溶液中顺式与反式氟咯草酮峰面积总和的平均值；ρ为20 ℃时250 g/L氟咯草酮乳油的密度值(g/mL)。

2 结果和分析

2.1 分析方法特异性

本试验采用 HPLC-DAD峰纯度分析法来鉴别氟咯草酮。氟咯草酮标样、250 g/L氟咯草酮乳油中的氟咯草酮 HPLC-DAD峰纯度中均显示未检测到不纯物，最小峰纯度指数均为正数，说明有效成分处无其他物质干扰，符合定量分析要求。峰纯度如图3、图4所示。

图3 氟咯草酮标样中目标峰纯度

图4 250 g/L氟咯草酮试样中目标峰纯度

2.2 分析方法的线性相关性测定

称取约0.1 g (精确至0.000 1 g)氟咯草酮标样于50 mL容量瓶中，加入约 30 mL甲醇，超声振荡10 min，冷却至室温，用甲醇定容至刻度，摇匀，此为标样储备液。

用移液管分别移取3、4、5、6、7、8 mL的标样储备液至6个50 mL中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，备用。按照本方法所确定的操作条件，待仪器稳定后，按照质量浓度递增顺序测定每个溶液中氟咯草酮的峰面积，取2次测定的平均结果，结果见表 1。以氟咯草酮质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，见图 5。由图 5可见，氟咯草酮质量浓度(x)与其对应的峰面积相应值(y)之间呈现出良好的线性相关，其线性回归方程为y=19 122.809 9x+5 660.828 6，相关系数R2=1.000 0。

表1 氟咯草酮线性范围的测定

图5 氟咯草酮峰面积与质量浓度之间的线性关系图

2.3 分析方法的精密度试验

在上述色谱操作条件下进行分析，对同一250 g/L氟咯草酮乳油试样平行测定6次，结果见表2。可见，氟咯草酮的标准偏差和变异系数分别为0.02和0.09%。

表2 250 g/L氟咯草酮乳油的精密度试验结果

2.4 分析方法的准确度试验

称取约0.1 g (精确至0.000 1 g) 氟咯草酮标样至50 mL容量瓶中，加入约30 mL甲醇，超声振荡10 min，冷却至室温，用甲醇定容至刻度，摇匀，此为标样储备液。

按250 g/L氟咯草酮乳油配方比例要求，将除原药以外的所有助剂混匀作制剂空白，称取6份0.03 g(精确至0.000 01g)制剂空白于 50 mL容量瓶中，加入约30 mL甲醇，再移取5 mL上述标样储备液至称有制剂空白的容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，备用。在上述操作条件下分别进行分析测定，结果见表 3。可见，氟咯草酮的平均回收率为99.80%。

表3 250 g/L氟咯草酮乳油的准确度试验结果

3 结 论

本文采用高效液相色谱技术建立了一种快速测定250 g/L氟咯草酮乳油中有效成分氟咯草酮的分析方法。采用 C18不锈钢色谱柱(250 mm×4.6 mm i.d.×5 µm)和紫外检测器，以甲醇-水(体积比 64∶36)为流动相，测得有效成分的精密度和准确度高、线性关系良好。该方法具有操作简便、检测过程稳定、结果准确、分离效果好等特点，可用于250 g/L氟咯草酮乳油生产过程中产品的检测。