广西容县霞烟鸡的鸡传染性法氏囊病血清抗体检测与分析

覃 婷，卢成淑*，吕其壮,2*，李佩伦，覃新云，龚紫凤，农可懿

(1.玉林师范学院生物与制药学院，广西玉林 537000；2.广西农产资源化学与生物技术重点实验室，广西玉林 537000；3.玉林市动物疫病预防控制中心，广西玉林 537000)

鸡传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)引起的一种急性、高度接触性和免疫抑制性疾病[1]。该病临床主要表现为病鸡精神委靡、羽毛蓬松、食欲减退、排白色水样稀粪等，病理剖检主要表现为腿肌和胸肌出血，法氏囊出血、发炎、水肿、萎缩、坏死等[2]，具有发病突然、病程短、病死率高等特点，是危害养鸡业的一种主要传染病[3-5]。现阶段针对IBD综合防控和疫苗研究的报道很多[6-9]，但是以地方品种鸡为主要研究对象的调查报告却是寥寥无几。霞烟鸡是原产于广西容县石寨镇下烟村的优质肉用鸡，是优良地方品种之一，1985年被载入《广西家畜家禽品种志》，2010年被列为国家地理标志保护产品，该鸡具有个体大、耐粗饲、抗病力强、骨软肉嫩、肌肉弹性好、味香等特点，深受规模化养殖场和养殖户的青睐。然而，由于受该品种鸡饲养周期长、价格较其他品种鸡偏高等因素的影响，近年来霞烟鸡的养殖规模不断缩减，目前容县境内只有广西容县周义养殖有限公司等极少数企业在集约化养殖霞烟鸡，且多以保种为目的，相比之下，农村散养就成了霞烟鸡的主要养殖模式，但由于农村散养户多是自繁自养，没有正规的饲养标准，又经常不按防疫要求注射疫苗，所以农村散养鸡群中就很容易引发各种传染性疾病，给养殖户带来了重大的经济损失。因此，为探究IBD在农村散养霞烟鸡鸡群中的发病情况和流行趋势，在调查清楚霞烟鸡主要分布区域的基础上从上述区域内的霞烟鸡养殖户中采集霞烟鸡病鸡血清样品，并对其进行IBDV抗体的检测和分析，以期为霞烟鸡鸡群的IBD防控提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 血清样品 2018年3月至2019年4月，分别从目前霞烟鸡的主要分布区域内的农村散养户的病鸡(临床表现是生长发育不良、精神不振、缩头垂翅、食欲减退、发病前均未免疫过IBD疫苗)中用一次性无添加剂真空采血管采集血液样品245份，其中容州镇27份、杨梅镇18份、石寨镇113份、灵山镇12份、黎村镇22份、六王镇14份、十里乡11份、县底镇2份、松山镇9份、自良镇4份、容西乡9份、浪水乡4份样品。每份1 mL～3 mL，分离血清后，置于-20℃冰箱备用。被检病鸡的日龄在10日龄～289日龄。以3月～5月份为春季、6月～8月份为夏季、9月～11月份为秋季、12月到次年2月份为冬季划分季节。

1.1.2 主要试剂和仪器 IBDV抗体ELISA试剂盒，美国爱德士(IDEXX)公司产品；Varioskan LUX多功能微孔板读数仪，赛默飞世尔科技(中国)有限公司产品；高精度移液枪，德国艾本德(Eppendorf)股份公司产品。

1.2 方法

1.2.1 抗体检测 在96孔板的每个孔中分别加入分离的血清样品10 μL，按照传染性法氏囊病病毒抗体检测试剂盒说明书对所采集的血清采用酶联免疫吸附试验方法(ELISA)进行IBDV抗体的检测。

1.2.2 结果判定 根据酶标仪上OD450 nm值判断试验有效性(阳性对照孔OD值平均值≥1.00；阴性对照孔OD值平均值≤0.15)并计算出临界值(临界值=阴性对照孔平均值+0.15),如果样品OD值<临界值，则样品为阴性；如果样品OD值>临界值，则样品为阳性。

1.2.3 数据统计分析 利用Excel软件对上述IBDV的抗体阳性率以及该病在各季节、各区域和各个生长阶段的霞烟鸡鸡群中的发病情况进行统计分析。

2 结果

2.1 不同日龄霞烟鸡IBDV的抗体检测情况

各个采样点中不同日龄霞烟鸡的IBDV抗体阳性率检测情况见表1。由表1可知，不同日龄的霞烟鸡样品中均能检测出IBDV抗体阳性，其中在县底镇和松山镇采集的40日龄以下病鸡中检测IBDV抗体阳性率均达100%，但在自良镇和浪水乡的病鸡中并未检测到IBDV抗体阳性。总体而言，IBDV的抗体阳性率在40日龄以下和40日龄～140日龄这两个日龄段较高，分别达到61.19%(41/67)和44.44%(68/153)，提示IBDV主要感染40日龄以下和40日龄～140日龄的霞烟鸡。

表1 不同日龄霞烟鸡IBDV的抗体检测结果

2.2 不同季节霞烟鸡IBDV的抗体检测情况

各个采样点中不同季节霞烟鸡的IBDV抗体阳性率检测情况见表2。由表2可知，各个季节的霞烟鸡样品中均能检测出IBDV抗体阳性，其中在县底镇春季采集的病鸡样品中检测IBDV抗体阳性率达100%，但在自良镇和浪水乡的病鸡中并未检测到IBDV抗体阳性。总体而言，IBDV在春、冬季节的霞烟鸡中的抗体阳性率相对较高，分别达到50.00%(41/82)和 56.58%(43/76)，而夏、秋季的阳性率相对较低，表明IBDV在霞烟鸡鸡群中的流行具有季节性。

表2 不同季节霞烟鸡IBDV的抗体检测结果

2.3 不同地区霞烟鸡IBDV的抗体检测情况

不同地区霞烟鸡的IBDV抗体阳性率检测情况见表3。由表3可知，IBDV抗体在容县境内的不同乡镇的阳性率有所不同，其中县底镇的阳性率最高，达到100%，石寨镇、容州镇、灵山镇、松山镇等区域的阳性率也均在50%以上，但自良镇、浪水乡却都没有检测出IBDV阳性。

表3 不同地区霞烟鸡IBDV的抗体检测结果

3 讨论

霞烟鸡素有“席上佳肴”之美称，誉满海内外，主要分布在广西容县境内。本试验着重对该区域内疑似被IBDV感染的霞烟鸡进行检测，结果显示，被检病鸡中IBDV抗体的总体阳性率达到46.12%(113/245)，明显高于曾婷婷等[9]应用多重GeXP-PCR方法对广西境内送检的300羽病死鸡IBDV的检测结果8.33%(25/300)和李桂喜等[10]对来自苏鲁豫皖四省的23个县市区的6 986 例蛋鸡病例IBDV的检测结果0.79%(55/6 986)，由于上述两项结果大多来自于对蛋鸡的调查结果，而霞烟鸡属于肉鸡，因此推测霞烟鸡可能比其他品种鸡更容易感染IBDV，且这种推测与之前的文献报道指出肉鸡较蛋鸡敏感相一致，但却不能体现霞烟鸡抗病力强的特点，所以有关霞烟鸡抗病能力的研究还需要进一步深入。此外，根据霞烟鸡鸡群IBDV的抗体检测结果推测IBDV感染状况主要还受到日龄、季节、地区等因素的影响。其中受到生长阶段的影响因素较大，小于40日龄的雏鸡感染IBDV的抗体阳性率为61.19%，是4个生长阶段中阳性率最高的，与杨宵玥等[11]研究中提到IBDV主要感染3周龄～6周龄鸡群的观点相一致。随着鸡群年龄的增长，其免疫器官发育较为完善，免疫力不断增强，IBDV的感染率呈逐步下降的趋势，尤其是在成年鸡群中通常呈隐性感染[12]。因此，养殖户难以在第一时间发现，容易造成大面积的传染，给养殖户造成重大的经济损失，这提示养殖户在鸡群生长发育过程中应做好IBD的预防工作，增强鸡群的免疫水平。在自然环境下IBDV较为稳定、具有较强的耐热性以及可以通过多种禽鸟类携带传播等特点，本次试验结果中春、冬季IBDV的感染率均高于50%，与李桂喜等[10]得出的IBDV多发生于春、冬季的调查结果大致相同，说明IBDV的发生具有明显的季节性，提示养殖户应在冬、春季节改善鸡舍卫生的管理，多通风除湿，从而加强IBDV的防控力度。从地理环境的分布来看，IBDV在容县县底镇的阳性率最高，达到100%，但在霞烟鸡养殖最为集中的石寨镇、容州镇、黎村镇等IBDV的阳性率却只有50%左右，可能是跟县底镇的霞烟鸡主要是农村散养，没有免疫接种等有关，且与吉涛等[13]指出的IBDV容易形成小范围的区域流行的推论一致，提示当地农村养殖户在养殖前应做好养殖规划和免疫接种工作，科学养殖。另外，张誉文[14]的研究发现，2017年在广西流行的IBDV全部都是基因重排株，其中与我国新型vvIBDV毒株亲缘关系较近的毒株占优势，说明广西地区IBDV毒株的基因及抗原正在发生变异，提示未来霞烟鸡群中IBDV的防控除了应充分考虑日龄、季节、地区的影响之外，还应该实时了解和掌握IBDV毒株本身结构的变化，以做好霞烟鸡群IBDV的防控工作。