羊同期发情腹腔镜输精最佳时间的研究

赵 霞，马跃军，李玉荣，刘 斌，吴铁成，乌兰其其格，苏雅拉图，乌仁图雅

（1.内蒙古自治区农牧业科学院，内蒙古 呼和浩特010031；2.锡林郭勒职业学院，内蒙古 锡林浩特 026000；3.赤峰市巴林左旗乌兰达坝苏木动物防疫站， 内蒙古 巴林左旗 025463；4. 赤峰市巴林左旗畜牧工作站， 内蒙古 巴林左旗025450）

腹腔镜是用于腹腔内检查和治疗的内窥镜，实质上是一种纤维光源内窥镜， 结构包括腹腔镜镜头、 光源系统和光导纤维。 运用腹腔镜系统技术，可通过腹腔镜镜头观察腹腔内的情况，便于进行精确操作，具有手术时间短、创口小、并发症少、安全性高、创口恢复快等优点。通过腹腔镜输精将公羊精液直接注入母羊的子宫角， 与其他人工授精方法相比， 由于精液可以在离受精地点相当近的地方沉积， 所以腹腔镜人工授精技术在羊繁殖上具有显著的优势。近几年来，腹腔镜技术发展迅速，既可用于临床检查，也可用于治疗，是一种较为先进的微创技术， 在治疗外科疾病中发挥的作用已受到越来越多的关注。

实际生产中， 在实施腹腔镜人工输精前，必须对羊群进行同期发情处理，利用外源激素（孕酮、氯前列烯醇、孕马血清等）调节发情或排卵时间［1-2］，最大限度地提高妊娠率。 腹腔镜一次性输精对于授精时间有严格的要求。 精液进入子宫角过早或过晚都会影响受胎率。 国内外学者对腹腔镜输精技术进行了一系列研究， 但是由于输精时间各不相同使受胎率相差较大。为此，该研究对羊同期发情腹腔镜输精的最佳时间进行了探索，以期为同期发情腹腔镜人工输精技术在生产中的应用提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验动物

1.1.1 试验母羊 选择繁殖机能正常、体质健壮、营养状况良好、膘情中等以上的适龄母羊，预试期内完成驱虫和常规疫苗注射。

1.1.2 试验种公羊 选择中等以上膘情、 精液品质好的2～3 岁种公羊。 在配种前一个月开始按配种期的日粮标准进行饲喂，保证饲料中蛋白质、维生素及矿物质的合理供给， 同时补充干燥青草等粗饲料，并进行修蹄；排空公羊睾丸中积存的大量死亡精子， 在初期每5 d 采精1 次，2～3 d 后改为每3 d 采精1 次， 再经过2～3 d 改为每天采精1次。 对种公羊的性欲和精液品质进行检测。

1.2 药品

国产孕酮海绵栓； 注射用孕马血清促性腺激素（PMSG），规格：1 000 IU/支；青霉素；生理盐水。

1.3 器材

自制羊用胚胎移植手术架，子宫角输精器，腹腔镜，持针器，手术刀，手术用剪刀，缝合针及线，注射器。

1.4 同期发情处理

试验母羊阴道内放置孕酮海绵栓10～14 d，撤栓时肌肉注射PMSG 250～330 IU/只。

1.5 试情

撤栓后12～24 h 开始试情，早晚各1 次。 对发情母羊做标记，记录发情时间。利用腹腔镜输精的母羊输精前24 h 空腹处理。

1.6 分组

按撤栓后不同时间以及不同发情时间分4 组进行腹腔镜输精。 1 组为撤栓后46～50 h 输精（n=138），2 组为撤栓后50～54 h 输精（n=156），3 组为撤栓后54～58 h 输精 （n=275），4 组为羊发情后30～36 h 输精（n=226）。

1.7 腹腔镜输精

母羊输精前5～10 min 肌肉注射静松灵0.2 mL/只，完全麻醉后将羊仰卧，抬高后躯保定在自制的手术架上使母羊外阴与地面呈80°～90°，借助腹腔内窥镜，采用套管针穿刺方法，用专用的腹腔镜输精器将精液直接输入母羊的2 个子宫角。

1.8 妊娠检查

输精后第40～45 天进行B 超检查， 并计算受胎率。

2 结果与分析

由表1 可知， 发情后30～36 h 输精的母羊（4组）受胎率最高，为97.79%，其次为撤栓后50～54 h 输精的母羊（2 组），受胎率为97.44%，撤栓后46～50 h 输精的母羊（1 组）受胎率为91.30%；撤栓后54～58 h 输精的母羊 （3 组） 受胎率最低，为89.82%。 总体来看，在撤栓后46～58 h 采用腹腔镜输精技术对经同期发情处理的母羊进行人工授精，受胎率均较高，最佳输精时间为撤栓后50～54 h 以及母羊发情后30～36 h。

表1 不同输精时间输精后母羊受胎情况

3 讨论

目前， 羊的同期发情人工授精技术在生产中得到推广，但因人工输精工作计划、操作人员技术水平差异而导致母羊受胎率大不相同［3-4］。在受体母羊品种相同的基础上，冷冻精液质量、精子数量、母羊体况和受精部位（精子沉积部位）等因素会影响受胎效果，此外，输精时间也是影响腹腔镜输精后母羊受胎率的重要因素。因此，掌握最佳输精时间与排卵时间关系是决定母羊人工授精成功率的关键。

羊的自然交配发生在母羊发情初期或前期，而排卵则发生在发情期结束前后， 卵子保持受精能力的时间为5～6 h，而精子在母羊生殖道内维持活力的时间较长，一般为1～2 d［5］。 精子进入母羊生殖道后快速运行至受精部位， 到达时间要先于卵子，在此期间精子得以获能。 因此，人工授精应在排卵前进行，以便排卵时在受精部位（输卵管壶腹部）沉积大量精子［4］。 总的原则是输精应在卵子排出以前或排卵过程中进行，排卵后输精，受精的可能性逐渐降低，甚至不能受精；但也不能过早输精，否则精子衰老，活力降低，也很难使卵子受精［4-5］。 在常规输精情况下，每天2 次授精，上午发情的动物应在晚上（发情10 h 后）进行授精，晚上发情的动物应在次日上午（发情14 h 后）进行授精［4-5］。 然而，授精的时间需要根据使用的是新鲜或冷冻精液来调整。当使用新鲜精液输精时，精液在生殖道内沉积的时间最好不要超过24 h， 而对于冷冻精液输精而言， 因为冷冻精液的精子寿命短， 所以精液在母畜生殖道内沉积时间不得超过12 h。

在实际生产中， 常使用孕酮海绵栓对母羊进行同期发情处理， 该方法往往导致生殖系统发生不同程度的炎症，造成常规输精方法受胎率较低。腹腔镜输精技术中， 技术人员可利用内窥镜直接观察母羊子宫， 可以客观评估子宫状况以及输精难易程度， 避开生殖道内的炎症部位和宫颈皱褶等屏障，将精液直接注入母羊子宫角，是一种精准输精方法。当精液注入子宫角时，精液沉积在距受精地点相当近的地方， 从而有利于精子和卵子的结合， 与其他的人工输精方法相比具有明显的优势。 腹腔镜输精技术的应用使新鲜精液和冷冻精液输精后的受胎率得到了大幅度的提升， 为在当前供种不足的情况下使用新鲜精液、 冷冻精液进行输精提供了有力的技术保障。

当前利用腹腔镜在固定时间内进行子宫内授精已经成为一种较为成熟的输精技术， 但因操作者和输精计划的不同使受胎率存在较大差异。 该研究结果表明， 使用国产孕酮海绵栓+肌肉注射PMSG 是一种诱导母羊发情最经济、 最有效的方法， 而且撤栓后的46～58 h 内进行腹腔镜输精具有较高的受胎率。此外，在经同期发情处理的母羊撤栓后50～54 h 内输精时受胎率较其他2 个撤栓后输精时段高，证明腹腔镜单次输精可以保证良好的受胎率，降低人工输精的费用。 因此，技术人员如果合理安排同期发情母羊数量， 根据其输精能力分批次进行腹腔镜输精，可获得较高的受胎率。

当前， 发达国家的养羊业正在从自由放牧向集约化饲养方向发展，达到了很高的集约化程度。肉羊高效同期发情技术、腹腔镜输精技术，可使母羊定期集中配种、集中产羔、集中管理，实现了母羊二年三产、单产多胎的效果，缩短了母羊的繁殖周期，节约了公羊的饲养成本。通过调整配种和产羔时间，提高羔羊成活率，实现订单生产和错峰上市，提高了母羊的繁殖力。

4 结论

采用同期发情配合腹腔镜输精技术进行母羊人工授精， 最佳输精时间为撤栓后50～54 h 以及母羊发情后30～36 h。