KI-罗丹明6G荧光猝灭法测定火腿中的亚硝酸盐

庞海霞，强瑾，姜敏，熊海涛，史娟

(陕西理工大学 化学与环境科学学院，陕西省催化基础与应用重点实验室，陕西 汉中，723001)

亚硝酸盐广泛存在于土壤、水域及植物中[1]，是一种常用的食品添加剂，乳制品、泡菜、腌腊肉等食物中含量较高[2]。这类添加剂能赋予食品良好的外观色泽和独特风味，延缓其氧化酸败，延长货架期，抑制腐败菌的生长繁殖，阻止致病菌导致的食物中毒[3]。但是若从食物中摄取过量的亚硝酸盐，会严重威胁人类健康。首先在亚硝酸盐作用下，人体亚铁血红蛋白会丧失携带氧的能力，严重时会危及生命[4-5]，其次亚硝酸盐在胃内酸性环境中，会与人体内的伯胺及酰胺类物质发生亚硝化反应生成N-亚硝胺；亚硝胺类化合物是一种强致癌物质，会引起食管癌，胃癌，咽喉癌，肝癌和大肠癌等[6]。此外，亚硝酸盐还可能引发人类先天畸形，其是中枢神经系统先天畸形高发的重要原因之一[7-8]。因此，分析检测食品中亚硝酸盐的含量，无论是对食品企业的生产监督还是对消费者的饮食安全都具有极为重要的意义。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 仪器与设备

BSA124S型电子天平，北京赛多利斯仪器系统有限公司；UV-2600型紫外-可见分光光度，日本理学公司；Cary Eclipse荧光光度计，安捷伦科技有限公司；JXL-2S-2A数显恒温水浴锅，江苏省金坛市金祥龙电子有限公司；DHG-9070A电热恒温鼓风干燥箱，上海齐欣科学仪器有限公司。

1.1.2 试剂与材料

材料：火腿肠(2种品牌)，采购自超市。

1.2 实验方法

1.3 样品处理

准确称取捣碎且混匀的火腿肠样品10.00 g于烧杯中，加入6 mL饱和硼砂溶液，搅拌均匀，再加入60 mL 80 ℃热水。置沸水浴中加热15 min取出，边搅拌边加入5 mL 50 g/L的硫酸锌溶液，以沉淀蛋白质。冷却至室温，转入1 L容量瓶中，用水定容，摇匀。静置15 min，弃去上层脂肪，清液用滤纸过滤，弃去初滤液10 mL，收集其余滤液存于试剂瓶中作为分析试液，进行样品分析[13-14]。

2 结果与分析

图1 不同浓度的存在时KI -罗丹明6G的荧光强度Fig.1 Fluorescence spectra of KI-rhodamine 6G with different concentration of

2.2 实验条件的优化

2.2.1 H2SO4用量对测定结果的影响

按1.2中的实验方法，保证其他条件不变，改变0.1 mol/L H2SO4的加入量分别为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL，测定罗丹明6G的荧光猝灭情况，结果如图2-a所示。当H2SO4加入量为2.0 mL时，体系荧光猝灭值ΔF最大；随着硫酸加入量的增大，荧光猝灭值ΔF有所减小。故实验选择0.1 mol/L H2SO4加入量为2.0 mL。

2.2.2 KI用量对体系测定结果的影响

固定其他条件及0.1 mol/L H2SO4用量2.0 mL不变，改变0.1 mol/L KI溶液的加入量分别为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL，按1.2实验方法测定试液荧光猝灭值，结果如图2-b所示。当KI加入量为2.0 mL时，体系荧光猝灭值ΔF最大，反应最灵敏，故实验选择0.1 mol/L KI加入量为2.0 mL。

2.2.3 吐温-80用量对体系测定结果的影响

由于离子缔合物具有疏水性，为使其稳定地存在于水溶液中，通常加入表面活性剂，吐温-80可用于罗丹明光度分析的研究[15]。固定其他条件不变，硫酸、碘化钾用量为上述讨论的最佳用量，改变1.0 g/L吐温-80加入量分别为0、0.5、1.0、1.5、2.0 mL，体系荧光猝灭值ΔF如图2-c所示。吐温-80加入量为0.5 mL时，体系的荧光猝灭值ΔF最大。故实验选择1.0 g/L吐温-80加入量为0.5 mL。

2.2.4 罗丹明6G用量对体系测定结果的影响

在上述实验确定的硫酸、碘化钾、吐温-80最佳用量的基础上，分别考察了5×10-5mol/L罗丹明6G加入量为1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL时，体系荧光猝灭值ΔF的变化，结果如图2-d所示。当罗丹明6G加入量为2.0 mL时，体系的荧光猝灭值ΔF最大，故实验选择5×10-5mol/L罗丹明6G加入量为2.0 mL。

2.2.5 反应时间对体系测定结果的影响

a-0.1 mol/L H2SO4用量对体系荧光猝灭值的影响；b-0.1 mol/ L KI溶液用量对体系荧光猝灭值的影响；c-0.1 g/L吐温-80用量对体系荧光猝灭值的影响；d-5×10-5 mol/L罗丹明6G用量对体系荧光猝灭值的影响；e-反应时间对体系荧光猝灭值的影响图2 实验条件优化Fig.2 Optimization of experimental conditions

2.3 工作曲线与精密度

图3 标准曲线Fig.3 Calibration curves

2.4 共存离子的影响

2.5 样品的测定及加标回收率试验

按照1.3方法将2种火腿肠样品各处理3份，移取处理好的火腿肠样品溶液参照1.2实验方法测定其荧光猝灭值ΔF，确定样品中亚硝酸盐的含量。为了检验该方法的准确度，同时也采用国标比色法进行对比测定，并做加标回收率试验，结果如表1所示。采用该方法测定2种火腿肠样品中亚硝酸盐含量分别为11.18、18.72 mg/kg，测定值与比色法检测结果基本一致，所测回收率为95.5%～105.3%，表明该方法具有较高的准确度与精密度，可用于实际样品分析。

表1 火腿肠中亚硝酸盐分析结果(n=3)Table 1 Analytical results of nitrite in ham sausage (n=3)

3 结语