贵州省民族药飞龙掌血根质量标准的研究

陈 凤 程 韬 王影超 邹转转 舒 柯

贵州省食品药品检验所，贵州 贵阳 550004

本品为芸香科植物飞龙掌血属Toddaliaasiatica(L.)Lam.的飞龙掌血根，全株用作草药，多用其根，具有活血散瘀、祛风除湿、消肿止痛之功效，治疗感冒风寒、胃痛、肋间神经痛、风湿骨痛、跌打损伤、咯血等[1]。目前已知飞龙掌血中化学成分包括呋喃香豆素类、毗喃香豆素类、生物碱类等及其他化学成分[2]。其中白屈菜红碱具有具有抗菌、抑菌，清热解毒、抗菌消炎的作用[3-4]与飞龙掌血根的临床疗效具有相关性。目前贵州省收载于2003年版《贵州省中药材、民族药材质量标准》中[5]，仅用其根皮。但是若仅仅使用根皮而不使用根，不仅是对中药资源的一种巨大浪费，也不利于中药材的可持续发展。因此采用高效液相色谱对飞龙掌血根中白屈菜红碱进行含量测定，以达到完善质量标准及用药安全有效，质量可控稳定，为生产、使用、流通等提供科学合理数据参考。飞龙掌血根生境及性状如图1所示。

图1 飞龙掌血生境图(A)、飞龙掌血根性状图(B)

1 材料与仪器

1.1 仪器 Waters 2695-2998高效液相色谱仪(美国)，KQ-500DA超声清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)，MS204TS型(万分之一)电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)、XP26型(百万分之一)电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)。

1.2 试剂与试药 乙腈为色谱纯，分析甲醇、分析三乙胺、分析磷酸，水为超纯水。飞龙掌血根12批样品；白屈菜红碱(批号：111718-201402，质量分数：80.5%)中国食品药品检定研究院提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈—1%三乙胺(磷酸调 pH 值至 3)(28∶72)；检测波长为269 nm；柱温：30℃；流速：1.0 mL/min；进样量10 μL。

2.2 对照品溶液的制备 取白屈菜红碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含30 μg的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备 取飞龙掌血根药材，粉碎，过三号筛，混匀，取粉末约1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20 mL，称定重量，加热回流30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补充减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 系统适应性试验 精密吸取对照品溶液、供试品溶液，照“色谱条件”项下进样，记录色谱图，结果供试品与对照品在相应的位置出现色谱峰，色谱图如图2所示。

图2 对照品(A)、供试品(B)的HPLC色谱图

2.5 线性关系考察 精密吸取“2.2”项下对照品溶液2 μL、5 μL、8 μL、10 μL、15 μL、20 μL注入高效液相色谱仪器，测定峰面积。计算回归方程：y=248,901.4450x- 5,802.7829，r=1.0000(n=6),表明白屈菜红碱在0.059828～0.598276 μg的进样量与峰面积呈良好的线性关系。

2.6 精密度试验 取“2.2”项下的对照品溶液，连续进样6次，进样量10 μL，测定白屈菜红碱的峰面积，计算其RSD%为0.66%，结果表明，仪器精密度好。

2.7 耐用性试验 取同一样品，按“2.3”项下方法制备1份供试品溶液，分别于0、2 h、6 h、10 h、14 h、18 h、24 h各进样10 μL，测定白屈菜红碱的峰面积，计算RSD为0.49%，结果表明，供试品在24 h内稳定。

2.8 重复性试验 取同一批样品，按“2.3”项下方法制备6份供试品溶液，进样量10μL，测定白屈菜红碱的峰面积，平均含量0.7987 mg/g，计算RSD为0.18%，表明该方法重复性好。

2.9 准确度试验 取已测定含量的飞龙掌血根药材样品(平均含量0.7987 mg/g)约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入白屈菜红碱对照品(0.016261 mg，具体见表1)20 mL，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，并计算白屈菜红碱的平均回收率99.42%，RSD为1.63%。见表1。

表1 回收率试验结果

2.10 不同色谱柱的考察 取同一样品，按“2.3”项下方法制备1份供试品溶液，分别以不同品牌C18色谱柱(Waters Xbridge 、Thermo Fisher、Agilent XDB)各进样10 μL，测定白屈菜红碱的峰面积，计算含量，RSD%为0.88%，结果表明不同品牌十八烷基硅胶胶合硅胶为填充剂的色谱柱对含量测定无显著差异。

2.11 样品含量测定 按上述色谱条件，取不同产地飞龙掌血根“2.3”项下方法制备供试品溶液，测定白屈菜红碱的含量，结果见表2。12批飞龙掌血根药材中白屈菜红碱含量测定结果为0.3274～1.5771 mg/g。

表2 样品测定结果

3 讨论

通过实验结果可以看出，不同产地的飞龙掌血根中白屈菜红碱的含量存在着明显的差异，其次即使是同一产地不同采收季节的含量之间也存在着较大的差异。本实验建立的方法可以进一步对飞龙掌血根药材的研究开发及临床合理使用，提供一定的实验依据。因此在药用的时候，应该根据其产地及采收季节来确定其剂量，以免因其量过多或者过少而影响治疗效果。

本次实验还对飞龙掌血根茎药材和飞龙掌血根皮药材进行定位对比，结果发现它们都含有白屈菜红碱、血根碱、氯化两面针碱、茵芋碱和茴芹香豆素、异茴芹香豆素，从实验来看飞龙掌血根和根皮之间的成分差异并不大，但是由于实验材料采集局限性，无法更加全面系统的对二者进行完整的对比。在本次实验基础上，下一步将研究飞龙掌血根茎及根皮中有效成分的含量。

本次实验考察白屈菜红碱吸收波长，取白屈菜红碱对照溶液在200～400 nm波长范围内进行紫外扫描，经试验摸索，以269 nm作为检测波长时以获得较高的灵敏度和良好的选择。故确定白屈菜红碱的检测波长为269 nm。研究比较不同流动相的洗脱效果，用乙腈-1%三乙胺(磷酸调pH值至3)(28∶72)[6]作为流动相。对不同浓度的甲醇进行超声及回流提取对比研究，结果表明，本法选择甲醇回流加热30 min效果最好。本实验对飞龙掌血根中白屈菜红碱的含量测定的研究，方法准确可靠、简便易行，可用于飞龙掌血根质量控制。