酶联免疫吸附分析及其在食品安全检测中的应用

□ 马杰华 平南县公共检验检测中心

酶联免疫吸附测定法（ELISA）是以酶标记抗体技术为基础，在实际应用中，可通过酶标抗体及待测标本的未标记抗原进行检验，并分离游离的已经结合的标记抗原进行酶活性测定与分析，从而得到待测抗原的含量。ELISA具有选择性好、灵敏度高、检测结果比较准确、实用性强等优点，被广泛应用于临床医学、生物学及化学分析等领域中。基于此，研究及分析ELISA在食品安全检测中的应用，对进一步实现食品安全检验水平提升有积极作用[1]。

1 酶联免疫吸附的基本原理

ELISA是将抗原或抗体以不损坏免疫活性的条件，结合到固相载体的表面。在进行测定的过程中，可根据检验标准对抗原、抗体的反应过程、复合物等进行检测分析。在反应过程中，固相载体上酶标抗原或抗体被结合量等进行统计与分析，洗涤处理后，去除反应液中的其他物质，在加入酶反应底物后，底物可通过酶催化转变为有色产物，最后，采用定性或定量分析的方式，对有色产物量进行检验与分析[2]。ELISA在实际应用中，其基本应用原理如图1所示。

图1 操作步骤

ELISA在实际应用中，其可以采用直接法、间接法两种方式进行检验分析。其中，直接法则是酶标记抗体与待检测样本中固相抗原直接产生作用，并在加入底物后，出现颜色变化。间接法则是以已知抗原为基础，吸附在固相载体上，与待检测样本中的抗体作用为主，加入酶标记抗同种动物抗体的免疫球蛋白，并加入酶底物，显色。ELISA在实际应用中，可通过直接、间接的方式进行检验与分析，并结合最终的显色，从而判定最终的检验结果。

2 ELISA操作的影响因素分析

ELISA的实际应用中，需对ELISA测定结果的影响因素进行分析。①抗原包液的质量对ELISA的测定结果会产生直接的影响。将抗原固定在聚苯乙烯微量反应板中，其效果对抗原-抗体反应等会产生直接的影响。②非特异性反应的干扰。在设置稀释液空白、阳性及阴性参比血清的基础上，需采用包埋、封闭等方式进行预处理。如在抗原包液中加入牛血清白蛋白、明胶和吐温-20等，从而达到减少非特异性反应的目的。③高选择性的单克隆抗体可代替多克隆抗体，这对提高ELISA特异性方面有积极作用。④在实际操作中，选择表面积相对较大的固相载体，可提高ELISA的敏感性以及操作性。⑤酶合交联剂对ELISA的操作会产生直接的影响。在利用免疫法或化学法的过程中，HRP与抗体的交联可采用高碘酸钠氧化法进行处理，从而达到检验与操作的目的。酶底物本身要求无色，在反应后可出现颜色变化。大多HRP是以邻苯二胺为酶底物，AKP则是以硝基苯磷酸盐为ELISA检验的酶底物[3]。

3 酶联免疫吸附在食品安全检测中的应用分析

3.1 细菌检测

沙门氏菌是食品安全检测中的关键指标，可采用制备单克隆抗体的ELISA方法对沙门氏菌进行检测，最低检测量可达到500 cfu/g，时间为22 h，可实现全自动检测。在利用BADot-ELISA对食品中的李氏杆菌进行检验的过程中，其检验的敏感性可达到104个/mL，而且节省时间。以苏丹红1号为研究对象，在对其抗原序列进行分析时，通过抗原可实现溶解剂的制备。在对食品中的病原微生物进行检验时，强化ELISA检测程序，可提高吸附的灵敏性。单核细胞的检验，可采用细菌分离的方式，但检验周期较长，所以，可建立重组单细胞ELISA检测方法，提升单细胞细菌的检验 效果[4]。

3.2 生物毒素检验

真菌毒素对人体健康产生直接的影响，毒性相对较强，有致癌作用，如黄曲霉毒素的毒性较强，对人体的伤害性较大，具有一定的免疫抑制性，较低的含量就会导致各类疾病。可利用ELISA对真菌毒素进行检验与分析，如在利用ELISA检验黄曲霉毒素B+G标准品的过程中，检验的最低浓度为0.13 ng/mL，最低的检出量为 50 μg/kg，利用校正曲线分析，线性范围为0.25～20 ng/mL。可通过ELISA检验，对生物毒素含量及吸附敏感性等方面进行检验与分析，从而满足食品安全检验的实际需求。ELISA对真菌毒素的检验与分析，包括黄曲霉素、抗原体及特异性抗体等方面，ELISA的应用稳定性较高，测量结果较准确。

3.3 药物材料检测

利用ELISA可对食品中的药物残留进行检测与分析，如有害残留成分、禁用兽用残留成分等。以肉制品为研究对象，利用ELISA可对生鲜肉的血清蛋白和熟食肉制品的肌肉抗原进行检测。在检测瘦肉精时，可对食品的可食用性、安全性等进行检验与分析，如果食用的肉制品瘦肉精含量超标，易导致人们出现头疼、四肢麻木等症状。而且，ELISA可对动物脂肪中的孕激素残留量进行检验，如果残留量超标，则说明食品质量不达标[5]。

3.4 转基因食品监测

在对转基因食品的研发、食用等方面进行综合分析时，可通过ELISA技术对基因序列、目的蛋白质等进行检验与分析，通过双夹心ELISA法的应用，可对转基因成分进行评估与分析，有助于提高食品安全质量。以转基因大豆为例，通过ELISA的应用，可对抗草甘膦转基因大豆中的CP4EPSPS蛋白进行检验，而且，在检验的过程中，可检测出不同转基因大豆中的蛋白含量，这对提高转基因食品安全检验水平有积极作用。

4 结语

综上所述，探究酶联免疫吸附分析法的实际应用，对酶联免疫吸附在转基因食品、药物材料、生物毒素等检测中的应用进行研究，酶联免疫吸附的应用方式不同，食品检验与分析效果方面也存在一定的差异。但是，在酶联免疫吸附的实际应用中，强化自动检测仪器的开发与应用对提高酶联免疫吸附分析法在食品安全检测中的实际应用效果有积极作用。