火焰原子吸收光谱法同时测定养血软坚片中钙、锌、镁含量

李彦超，李宜鲜

（河南省食品药品检验所·国家药品监督管理局中药材及饮片质量控制重点实验室，河南 郑州 450018）

养血软坚胶囊是上海中医药大学附属曙光医院的医院制剂，具有养血活血、软坚通络功效，临床多用于治疗骨关节炎及骨关节疼痛等症[1－3]。养血软坚方中牡蛎为牡蛎科动物长牡蛎Ostrea gigasThunberg的贝壳，经去肉、洗净、干燥、碾碎而得，具有重镇安神、潜阳补阴、软坚散结功效，多用于惊悸失眠、眩晕耳鸣、瘰癖痰核、瘕痞块等证的治疗[4]，其主要成分为碳酸钙、无机盐、微量元素等[5]。本研究中采用火焰原子吸收光谱法同时测定养血软坚片中钙（Ca）、镁（Mg）和锌（Zn）的含量，为牡蛎在其复方中的提取纯化工艺的选择提供参考。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

AAS－ZEEnit700型原子吸收分光光度计（德国Analytik Jena AG公司）；XR205SM－DR型分析天平（瑞士Precisa公司）；AS－1型Ca，Zn，Mg空心阴极灯（北京有色金属研究院）；ETHOSA微波消解系统（意大利Milestone公司）；ED16型智能样品处理器（北京莱伯泰科仪器有限公司）；Milli－Q型超纯水处理系统（美国Millipore公司）。

1.2 试药

钙标准溶液（批号为12053032），锌标准溶液（批号为11010672），均购自国家钢铁材料测试中心钢铁研究总院，质量浓度均为1 000 mg/L；镁标准溶液（国家有色金属及电子材料分析测试中心，批号为13622－2，质量浓度为1 000 mg/L）；65%硝酸（优级纯，美国Merck公司）；35%过氧化氢水溶液（优级纯，美国Alfa Aesar公司）；氧化镧（优级纯，天津市光复精细化工研究所）；盐酸（优级纯，北京化工厂分厂）；水为超纯水。白芍、秦艽、甘草、牡蛎等药材均购自禹州金地中药饮片有限公司，经河南省食品药品检验所李振国主任药师鉴定为正品。

2 方法与结果

2.1 试验条件[6-8]

采用火焰原子吸收光谱法测定Ca，Zn，Mg含量，主要光源为空心阴极灯和无极放电灯，输入波长、电流及狭缝宽度见表1。

表1 各元素原子吸收分光光度计工作条件Tab.1 Working conditions of atomic absorption spectrophotometer for each element

2.2 样品及溶液制备

样品溶液：取白芍、秦艽、甘草、牡蛎等药材各适量，以8倍量水浸泡30 min后，煎煮1 h，滤过；药渣加6倍量水煎煮45 min，滤过；合并滤液，将滤液浓缩至相对密度为1.10～1.15[（60±3）℃]，放冷至室温，得60 mL药液（相当于牡蛎0.333 3 g/mL）[9－10]；取30 mL药液作复方水煎液（样品1）；另取30 mL药液加乙醇至药液含醇量达50%，静置36 h，滤过，回收乙醇，浓缩至30 mL，即得水提醇沉液（样品2）。取牡蛎30 g，同上述药液制备方法制备牡蛎单煎液（相当于牡蛎0.333 3 g/mL），即得对照样品。

供试品溶液：精密量取上述样品溶液各5 mL，置消解罐中，蒸至近干，加入8 mL硝酸，90℃预消解至无明显棕色气体溢出，取出，放冷；加2 mL过氧化氢，补硝酸至10 mL。将消解罐置微波消解仪中，按微波消解程序（用10 min升温至140℃后，再用10 min升温至200℃、维持10 min）消解，放冷，取出消解罐，加热以除去多余的氮氧化物；放冷，用去离子水转入25 mL容量瓶中并定容，摇匀，备用。取适量，稀释，分别作为Mg和Zn的供试品溶液；精密吸取备用液适量，用20 g/L氧化镧溶液（称取23.45 g氧化镧，先用少量水湿润，再加75 mL盐酸于1 000 mL容量瓶中溶解，加去离子水定容）稀释，即得Ca供试品溶液。

空白对照溶液：按样品制备方法制备空白样品，再按供试品溶液制备方法制备缺相应物质的空白对照溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察：分别精密量取1.2项下标准溶液，以20 g/L氧化镧溶液制成Ca质量浓度分别为5，10，20，30，40μg/mL的系列标准溶液，以2%硝酸制成Zn质量浓度分别为0.1，0.3，0.5，0.7，1.0μg/mL，Mg质量浓度分别为0.2，0.4，0.6，0.8，1.0μg/mL的系列标准溶液。取上述溶液适量，按2.1项下试验条件进样检测，记录吸光度。以标准品质量浓度（X）为横坐标、吸光度（Y）为纵坐标进行线性回归，得Ca，Zn，Mg回归方程分 别 为Y1=0.024 7X1+0.029 5（r=0.999 8）、Y2=0.284 9X2+0.011 0（r=0.999 3）、Y3=0.702 6X3+0.030 8（r=0.999 1）。结果表明，Ca，Zn，Mg质量浓度分别在5～40μg/mL、0.1～1.0μg/mL、0.2～1.0μg/mL范围内与吸光度线性关系良好。

检测限与定量限考察：取2.2项下空白对照溶液适量，按2.1项下试验条件重复进样测定11次，记录吸光度，并计算其标准偏差，以3倍、11倍标准偏差对应的各待测元素质量浓度作为检测限及定量限[11－14]。结果Ca，Zn，Mg的检测限分别为0.8，0.3，0.4 mg/L，定量限分别为2.6，1.0，1.3 mg/L。

精密度试验：取20 mg/L的Ca、0.5 mg/L的Zn、0.6 mg/L的Mg标准溶液各适量，按2.1项下试验条件连续进样测定6次，记录吸光度。结果Ca，Zn，Mg吸光度的RSD分别为0.32%，1.35%，0.49%（n=6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取2.2项下供试品溶液适量，分别于室温下放置0，2，4，6，8，10，12 h时按2.1项下试验条件进样测定，记录吸光度。结果Ca，Zn，Mg吸光度的RSD分别为1.65%，1.81%，2.01%（n=7），表明供试品溶液在室温放置12 h内基本稳定。

重复性试验：精密量取2.2项下单煎液适量，各6份，按2.2项下方法制备供试品溶液，再按2.1项下试验条件进样测定，记录吸光度。结果Ca，Zn，Mg吸光度的RSD分别为0.93%，1.78%，1.13%（n=6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：取已知含量的对照样品适量，每份2.5 mL，共9份，分别加入低、中、高质量浓度的标准溶液，按2.2项下方法制备供试品溶液，再按2.1项下色谱条件进样测定，记录吸光度，并计算回收率。结果见表2。

表2 加样回收试验结果（n=9）Tab.2 Results of the recovery test（n=9）

2.4 样品含量测定

取3种样品各适量，分别按2.2项下方法制备供试品溶液，再按2.1项下试验条件进样测定，平行测定3次，记录吸光度，并计算样品含量，结果见表3。结果显示，复方水提液、水提醇沉液中Ca和Zn的含量明显高于单煎液，Mg在3种溶液中的含量差异不大。

表3 样品含量测定结果（mg/L，n=2）Tab.3 Content determination of calcium，zinc and magnesium in the samples（mg/L，n=2）

3 讨论

中药常规提取纯化方法主要有水提醇沉法、乙醇回流法、提取后柱纯化法等，养血软坚片优选工艺为水提醇沉法；方中牡蛎采用水提取后醇沉，牡蛎主要成分为碳酸钙、无机盐、微量元素等，复方水提醇沉法似有不妥。经验证，复方水煎液、水提醇沉液中Ca和Zn的含量明显高于单煎液，由于牡蛎中Ca在单煎液中溶解度小，而在复方水煎液及水提醇沉液中存在如皂苷、树胶、蛋白质等能降低表面活性物质的混合物，上述混合物浓度较高时，就会在溶液中聚合成“胶团”，原来在水中不溶解或部分溶解的物质分子可钻进胶团的内部，分布在胶团的中心或夹缝中，显著升高溶解度[15]。另一方面，中药煎剂属胶体溶液，由许多难溶物质以分子形式组成微粒混悬于介质中成为溶胶或粗分散体系，也是使物质在溶液中含量增加的一个重要因素[15]。目前，对于含矿物质及贝壳类药材的中药复方制剂，仍选用合煎为主。

供试品均为水溶液，尝试用2%硝酸稀释（Ca供试品溶液用2 g/L氧化镧溶液稀释）后经微孔滤膜滤过进样，但重复性差，谱图有肩峰或峰分裂，原因为样品未消解，有机或无机杂质干扰所致，因此样品仍需消解后再检测。

综上所述，该方法操作简便、准确，稳定性、重复性好，可用于同时测定养血软坚片中Ca，Zn，Mg的含量。