类风湿性关节炎患者血清MBL MASP-2和DKK-1水平变化与患者预后相关性

臧雪莲，鞠延玲，赵 旭

(辽宁省锦州市中心医院风湿免疫科，辽宁 锦州 121000)

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是因免疫功能异常引起的慢性炎症性病变，常见于45～55岁人群，文献报道全球发病率约0.2%～1.0%，其中我国为0.28%～0.45%[1,2]。研究表明RA以外周小关节软骨对称性破坏为主要表现，同时可伴不同程度骨质增生，随病程进展可引起关节肿胀、畸形及功能障碍等症状体征，严重损害患者身心健康和生活质量[3]。补体系统是免疫功能重要组成部分，其激活途径包括经典途径(classic pathway，CP)、旁路途径(altemative pathway，AP)及甘露糖结合凝集素(mannose-binding lectin，MBL)途径3种，其中MBL作用通路无需抗体参与，激活MBL相关的丝氨酸蛋白酶(mannan-binding lectin associated serine proteases，MASP)即可活化补体。补体活化可诱导炎症反应和组织损伤，同时对凝血和纤溶系统造成不利影响，从而导致自身免疫性疾病发生，陈思等[4]研究认为MBL和MASP-2与RA患者病情严重程度具有明显相关性，可能炎症反应和病理损伤中发挥重要作用。此外有文献报道Dickkopf-1蛋白(DKK-1)与RA密切相关，对RA诊断具有良好参考价值[5]。目前关于RA患者病情监测和预后判断尚缺少灵敏指标，本文主要研究RA患者血清MBL、MASP-2和DKK-1表达水平及其与预后的相关性，现将结果详述如下。

1 资料与方法

1.1一般资料：选取2017年8月至2020年8月我院194例RA患者为研究组进行横断面研究，其中男性36例，女性158例，年龄24～79岁，平均(53.82±9.47)岁，病程2～15年，平均(5.64±1.83)年，28个关节疾病活动评分(DAS28)为2.8～7.6分，平均(3.84±0.92)分。纳入标准：①符合《类风湿关节炎诊断及治疗指南》相关标准[6]，即存在1个或以上关节肿痛，影像学检查显示滑膜炎并伴骨破坏，同时排除其它原因所致关节疾病；②年龄18～80岁；③患者以及家属均知晓并同意本研究。排除标准：①伴急性创伤或其它影响骨代谢的疾病；②伴明显精神异常或认知障碍；③合并风湿性疾病或其它自身免疫性病变；④伴MRI检查禁忌症；⑤伴四肢关节手术创伤史或存在发育畸形。另选取我院同期健康体检者102例为对照组，其中男性28例，女性74例，年龄(54.31±8.92)岁，两组年龄和性别比较差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2研究方法:患者入院第1天采集晨起空腹肘静脉血5mL，室温下自然静置，凝固后以3000r/min离心5min，取上清-20℃保存，采用ELISA法(试剂盒由加拿大ELIXIR公司生产)检测血清MBL、MASP-2和DKK-1表达水平，所有操作严格按照说明书要求完成，采用日本Bio-Rad公司550型微孔酶标仪分别于450nm、630nm和450nm条件下读取吸光度值。根据DAS28评分将患者分为3组，其中≤3.2分为轻度(83例)、3.2～5.1分为中度(62例)，≥5.1分为重度(49例)，所有患者均按照《中国类风湿关节炎诊疗指南》[7]采用症状缓解性抗风湿药(disease-modifying antirheumatic drugs，DMARDs)、非甾体抗炎药(NSAIDs)或糖皮质激素等药物进行达标治疗，疗程3个月，以DAS28评分≤2.6分为达到临床缓解，根据治疗结果将患者分为达标组(129例)和未达标组(65例)，比较各组血清MBL、MASP-2和DKK-1水平变化，分析其与DAS28评分的关系及其对RA治疗效果的评估价值。

2 结 果

2.1研究组和对照组血清MBL、MASP-2和DKK-1水平比较：研究组血清MBL和MASP-2水平低于对照组，血清DKK-1水平高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 研究组和对照组血清MBL MASP-2和DKK-1水平比较

2.2不同活动度RA患者血清MBL、MASP-2和DKK-1水平比较：轻度组、中度组和重度组血清MBL和MASP-2逐渐降低，血清DKK-1水平和DAS28评分逐渐升高，各组差异均有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 不同活动度类风湿关节炎患者血清MBL MASP-2和DKK-1水平比较

2.3不同疗效RA患者血清MBL、MASP-2和DKK-1水平比较：达标组血清MBL和MASP-2水平高于未达标组，血清DKK-1水平低于未达标组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表3 不同疗效类风湿关节炎患者血清MBL MASP-2和DKK-1水平比较

2.4RA患者DAS28评分的线性回归分析：多元线性回归分析显示，血清MBL和MASP-2水平为影响DAS28评分的重要因素(P<0.05)。见表4。

表4 类风湿关节炎患者DAS28评分的线性回归分析

2.5RA治疗效果的Logistics回归分析:血清MBL和MASP-2水平与RA治疗效果存在密切联系，RA治疗未达标的Logistics回归模型为Y=12.573-0.722×血清MBL-0.090×血清MASP-2+0.792×血清DKK-1。见表5。

表5 类风湿关节炎治疗效果的Logistics回归分析

2.6MBL、MASP-2和DKK-1对RA治疗效果的预测价值分析：血清MBL、MASP-2和DKK-1预测RA疗效的AUC分别为0.896、0.825和0.693，以血清MBL>13.66ng/mL、MASP-2>82.41ng/mL和DKK-1<5.67ng/mL为截断值时敏感度分别为72.09%、67.44%和80.62%，特异度分别为90.77%、81.54%和52.31%。以RA治疗效果为因变量，血清MBL、MASP-2和DKK-1水平为自变量建立Logistics回归模型分析三者联合检测对RA疗效的预测价值，结果显示AUC为0.958，敏感度为88.37%，特异度为90.77%。见表6。

表6 MBL MASP-2和DKK-1对类风湿关节炎治疗效果的预测价值分析

图1 MBL、MASP-2和DKK-1及联合检测预测RA治疗效果的ROC曲线

3 讨 论

目前RA还缺乏特异性根治方法，随着病程进展和延长，患者发生残疾和死亡的风险逐渐增加，故准确监测病情变化对临床治疗和改善预后有重要意义[7]。随着影像学设备和技术快速发展，近年来CT、MRI和超声等检查手段在RA诊断和治疗中的应用逐渐增多，但对预后判断的敏感性仍然较低，而实验室生化指标变化通常发生于患者病理生理改变之前，用于预后判断在敏感性和时效性方面较影像学检查优势显著，如何选择敏感指标是临床研究热点[8]。

MBL是肝细胞合成的急性时相蛋白，在免疫功能调节和抗感染过程中占有重要地位，文献报道MBL可导致细菌或病毒感染风险明显增加，同时还与SLE、RA或乙肝等多种免疫性疾病存在密切联系[9]。MASP-2为人体固有免疫系统重要组成部分，其分子结构为单肽链，通常以酶原的形式分布于血液中，在MBL补体激活途径中发挥关键作用，并参与调解感染、肿瘤及自身免疫性疾病发生和进展。本研究结果显示RA患者血清MBL和MASP-2水平明显低于对照组，且随着疾病活动度评分增加呈明显下降趋势，同时多元线性回归分析结果显示血清MBL和MASP-2水平为影响DAS28评分的重要因素，与陈思等[4]报道结果大致相近，表明缺乏MBL或MASP-2可能是引起RA的重要原因。目前关于RA患者发病机制尚未完全明确，既往研究认为补体系统在其中发挥重要作用，且可能通过MBL途径激活，导致MBL和MASP-2大量消耗，且随着疾病炎症活动度增加，消耗量呈明显上升趋势，因此检测血清MBL和MASP-2为评估RA活动度提供有效参考信息。同时本研究结果显示治疗达标的RA患者血清MBL和MASP-2水平明显高于未达标者，提示MBL和MASP-2水平较高的患者可能获得更好的治疗效果，对评估疗效和预后具有重要参考价值。

DKK-1为Wnt通路可溶性拮抗剂，在骨代谢调节中发挥重要作用，可抑制骨形成并促进骨质破坏，从而造成骨吸收增加和骨质破坏[10]。RA患者常伴有骨质破坏和密度改变，随着病程进展可引起关节畸形和功能障碍，且与DKK-1作用有关，文献报道RA活动期可大量释放肿瘤坏死因子α(TNF-α)等炎症因子并促进DKK-1表达水平升高，从而造成成骨和破骨平衡障碍，导致骨关节畸形和功能障碍[11]。本研究中RA患者血清DKK-1水平明显高于对照组并随着疾病活动度评分增加明显升高，但多元线性回归分析显示未对DAS28评分造成明显影响，可能与多数轻中度患者DKK-1未见明显异常有关。同时本研究显示治疗达标组RA患者血清DKK-1水平低于未达标组，提示DKK-1表达水平降低可能有利于提升治疗效果，这对改善患者预后具有重要意义。

目前关于RA患者预后还缺少准确可靠的监测和随访指标，本研究分析血清MBL、MASP-2、DKK-1对RA治疗效果的诊断价值，结果显示AUC分别为0.896、0.825和0.693，敏感度分别为72.09%、67.44%和80.62%，特异度分别为90.77%、81.54%和52.31%，表明MBL、MASP-2和DKK-1对判断RA疗效均具有一定参考价值，其中MBL敏感度较高而DKK-1特异度较高，这与两者在疾病发生和进展中的作用相一致，其中MBL/MASP-2途径补体系统激活是RA发病和进展的重要原因，表达水平随着疾病活动度增加而降低，因此可较为敏感的反映不同患者治疗效果差异，DKK-1表达水平异常的RA患者通常伴骨质破坏，因此用于评估轻中度患者治疗达标的敏感性较差。Logistics回归分析显示血清MBL和MASP-2水平与RA治疗效果存在密切联系，回归方程为Y=12.573-0.722×血清MBL-0.090×血清MASP-2+0.792×血清DKK-1，采用该模型将血清MBL、MASP-2和DKK-1联合检测进行分析显示AUC为0.929，敏感度为89.15%，特异度为81.54%，诊断价值较三者单独应用明显升高。

综上所述，RA患者血清MBL和MASP-2水平明显降低，血清DKK-1水平明显升高，且与病情变化密切相关，可为评估疗效和预后提供参考信息。