血清HMGB1 miR-200c-3p及cTnⅠ水平对新生儿呼吸窘迫综合征预后的预测价值

霍惠仪，卢泳雪

(广东省佛山市第一人民医院新生儿科，广东 佛山 528000)

新生儿呼吸窘迫综合征(neonatal respiratory distress syndrome，NRDS)是指新生儿出生不久即出现的由于原发或继发的肺泡表面活性物质减少导致的进行性呼吸疾病，表现为呼吸困难、呼吸衰竭，呻吟发绀吸气三凹征[1,2]。具有病情严重、发展快速、死亡率高的特点，严重威胁新生儿生命，且经抢救存活的患儿肺功能与神经系统亦受损害，对未来生长发造成影响[3]。因此寻找简单有效的评估指标对NRDS进行病情与预后评估十分重要。研究表明：炎性介质与细胞因子在NRDS的病例发展中有重要作用[4]。基于此，本研究旨在探究血清HMGB1、miR-200c-3p及cTnⅠ水平对NRDS预后的预测价值，为预防和降低NRDS风险提供参考，现将研究成果报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料:选取2016年1月至2019年12月本院收治的NRDS患儿120例，根据患者病情分为轻度组(胸片结果为Ⅰ、Ⅱ级)、重度组(胸片结果为Ⅲ、Ⅳ级)，各72、48例。另选取同期本院产科出生正常新生儿40例为对照组。其中轻度组患儿男性35例、女性37例，胎龄32～40周，平均(35.28±2.57)周，出生体重1.5～5.1kg，平均(2.58±0.85)kg，自然分娩38例、剖宫产34例；重度组患儿男性22例、女性26例，胎龄31～40周，平均(34.69±2.23)周，出生体重1.5～5.2kg，平均(2.38±0.93)kg，自然分娩21例、剖宫产27例；对照组患儿男性19例、女性21例，胎龄33～39周，平均(35.87±1.01)周，出生体重2.5～4.5kg，平均(3.02±0.35)kg，自然分娩23例、剖宫产17例。

1.2纳入和排除标准:纳入标准：①经我院诊断确诊的NRDS患儿，符合《实用新生儿学》的标准；②出生不久出现呼吸进行性困难，呻吟吸气发绀三凹征；③X线胸片检查表现为双肺弥漫性阴影、毛玻璃颗粒状，透明度降低，无心房高压；④患者临床资料完整；⑤动脉气血分析提示血氧下降，二氧化碳分压上升。排除标准：①肺外严重感染患儿；②先天性脏病、代谢紊乱患儿；③肺怕表面原发性活物缺乏患儿；④先天畸形、肺和胸壁畸形患儿。本研究征得院医学伦理委员会批准。

1.3方 法

1.3.1临床资料：入院后收集患儿一般资料，包括年龄，入院胎龄、体重、分娩方式、及母亲相关资料等。

1.3.2样本采集：采集新生儿出生后6h内的外周静脉血5mL，置于凝管中静置30min，离心(3000rpm/min)10min后装于EP管中，于-80℃下保存备测。①使用用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)法检测血清HMGB1水平。②根据逆转试剂盒说明进行转录定量RNA，内参U6；反应体系(15 μL)：无菌三蒸水(4.16 μL)、U6及miRNA特异性茎环引物(3 μL)、10×反转录缓冲液(1.50 μL)、RNA模板(5μL)、50U/μL逆转录酶(1.00μL)、20U/μL RNase抑制剂(0.19μL)、100mmoL/L脱氧核糖核苷酸(0.15μL)。反映参数：分别于16℃、42℃、85℃中反应30min、30min、5min，于4℃恒温放置，每1个循环1反应。在荧光定量PCR仪上(ABI荧光定量仪Qubit4.0南京贝登电子商务有限公司)进行定量聚合酶链反应，反应体系(20μL)：TaqMan通用混合物溶液(10μL)、无核酸酶水(7.67μL)、引物及20×探针Mix(1μL)、反转录产物(1.33μL)；扩增条件：分别于95℃、95℃、60℃中进行预变性、变性、复性循环，次数为1个、45个、45个，每个循环分别进行10min、15s、60s。实验进行3次，miR-200c-3p水平表达相对值采用2-ΔΔCt法计算。③静脉血离心11min后取上清液，采用全自动生化分析仪(济南童鑫生物科技有限公司)检测cTnⅠ水平，参考值为0.02～0.13ng/mL。所有实验试剂盒均供自上海酶联生物科技有限公司。

1.4观察指标:NRDS影像分级[5]：Ⅰ级：双肺透亮度减低，可见均匀网状阴影与细小颗粒；Ⅱ级：病变至肺野中外带，且有支气管充气征；Ⅲ级：双肺透亮度明显降低，病变加深，出现膈面、心缘模糊；Ⅳ级：双肺呈白肺状，支气管充气征严重似秃叶树枝。

2 结 果

2.1三组血清HMGB1、miR-200c-3p及cTnⅠ水平比较:结果显示：三组在血清HMGB1、miR-200c-3p及cTnⅠ水平比较存在明显差异(P<0.05)，血清HMGB1、miR-200c-3p及cTnⅠ水平重度组>轻度组>对照组，见表1。

表1 三组患者血清HMGB1 miR-200c-3p及cTnⅠ水平比较

2.2两组NRDS患者临床资料比较:住院期间，120例NRDS患者共34例(28.33%)死亡，86例(71.67%)存活。其中死亡患者中，轻度组5例、重度组29例。两组患者的年龄、性别、出生体重、母亲年龄、剖宫产、出现呼吸困难时间、母亲糖尿病、母亲高血压、胎粪吸入、宫内窘迫、新生儿窒息、等相比较均无明显差异(P>0.05)，但两组在病情、HMGB1、miR-200c-3p、cTnⅠ水平的差异间具有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 两组患者临床资料比较

2.3NRDS患者预后影响因素的多因素Logistic回归分析：以“死亡组”为因变量(赋值：0=是，1=否)，以“病情、HMGB1、miR-200c-3p、cTnⅠ水平”为自变量，纳入Logistic回归分析。多因素Logistic回归分析显示病情、HMGB1、miR-200c-3p、cTnⅠ水平均为NRDS患者预后的相关影响因素(P<0.05)，见表3。

表3 NRDS患者预后影响因素的多因素Logistic回归分析

2.4HMGB1、miR-200c-3p、cTnⅠ水平与三项联合对NRDS患者预后的预测价值:ROC曲线分析显示，HMGB1、miR-200c-3p、cTnⅠ水平对NRDS患者的预测的AUC为0.933、0.892、0.766，具有较高准确性；以约登指数的最大切点作为最佳临界值，该点预测，HMGB1、miR-200c-3p、cTnⅠ水平敏感度、特异度：为91.2%82.4%/50.0%、91.9%/100.0%100.0%，预测具有较高价值。将HMGB1、miR-200c-3p、cTnⅠ水平纳入Logistic回归模型，通过三项指标的logistic回归模型得出三项联合的数值：计算公式为：三项联合=14.224+(-0.019)*HMGB1+(-1.011)*miR-200c-3p+(-12.049)*cTnⅠ，统计分析得出联合数据。进一步ROC曲线显示，三项联合预测AUC为0.937，敏感度、特异度为82.4%、98.8%，预测价值较高。见表4、5，图1。

表4 HMGB1 miR-200c-3p cTnⅠ水平与三项联合对NRDS患者预后的预测价值

表5 HMGB1 miR-200c-3p cTnⅠ水平与三项联合对NRDS患者预后的预测价值的效能分析

图1 HMGB1、miR-200c-3p、cTnⅠ水平与三项联合对NRDS患者预后的预测价值

3 讨 论

NRDS病发高危因素包括早产，肺表面活性物质缺乏、缺氧、炎症反应等，使多种因素共同参与的结果。通常情况下，新生儿肺功能成熟度较低，肺表面活性物质较少，NRDS病发时易病发肺炎，使病情加重，影响预后生存[6]。

血清HMGB1是炎性介质的一种，通过免疫细胞分泌释放入胞浆与胞外，参与肺损伤炎症反应，具有调节作用。微小核糖核酸(microRNA，miRNA)是新型基因调控因子，可通过调节靶基因表达参与炎症通路与免疫应答调控[7]。心肌肌钙蛋白Ⅰ(cardiac troponin Ⅰ,cTnⅠ)是评价心肌损伤与预后转归的生化常用指标。本研究通过将轻度NRDS患儿，重度NRDS患者与健康组对比，结果显示：血清HMGB1、miR-200c-3p及cTnⅠ水平重度组>轻度组>对照组。提示NRDS患儿病发体内血清HMGB1、miR-200c-3p及cTnⅠ水平呈现高表达，随病情加重，表达水平数值升高，可将HMGB1、miR-200c-3p及cTnⅠ水平作为NRDS诊断新靶点。分析原因为[8]：①NRDS病发时，肺功能发生障碍，出现缺氧症状，引发肺血管损伤，大量炎性因子释放，HMGB1升高；②miRNA在NRDS病发炎症反应中，参与表皮细胞病理过程，在细胞分化凋亡血管生成中发挥重要作用；③新生儿心肌细胞对缺氧敏感度高，NRDS患儿病发缺氧且伴随炎症反应，增加肺循环阻力，导致循环障碍与代谢异常，增加心肌细胞通透性，造成心肌缺氧损伤，cTnⅠ水平上升。且病情越严重，心肌缺氧损伤越重，cTnⅠ水平越高。

本研究预后情况：住院期间，120例NRDS患儿共34例(28.33%)死亡，86例(71.67%)存活，通过对比生存死亡组资料，结果显示，两组患者在血清HMGB1、miR-200c-3p及cTnⅠ水平存在差异，死亡组显著高于生存组，与上文所述具有一致性，患儿病情加重，死亡风险增加，血清HMGB1、miR-200c-3p及cTnⅠ水平皆呈现高表达。有研究表明：HMGB1、miR-200c-3p参与NRDS细胞炎症反应，且患儿病情加重，炎症与心损加重，血清HMGB1、miR-200c-3p及cTnⅠ水平升高，与本文结论一致[9]。另ROC曲线显示，血清HMGB1、miR-200c-3p及cTnⅠ水平对NRDS患儿的预后评估具有一定的价值，且联合检测预测价值更高。分析原因为：血清HMGB1、miR-200c-3p及cTnⅠ水平与NRDS患儿病情严重程度相关密切，可作为预后标志物。王文秀研究亦表明：巨噬细胞活化后4h产生HMGB1，18-24达高峰，能一段时间内存于体内，参与肺损伤等炎症反应，且具有警报素功能，浓度高低可反应病情、组织损伤程度，与预后相关密切[10]。

综上所述，血清HMGB1、miR-200c-3p及cTnⅠ水平在NRDS患儿中呈高表达，且与病情程度相关密切，具有较高的预后预测评估价值。