鼻咽拭子与口咽拭子呼吸道病毒抗原检出率比较

单佳妮，汪天林，赵水爱，范礼云，刘 蕾

（国家儿童健康与疾病临床医学研究中心 国家儿童区域医疗中心浙江大学医学院附属儿童医院，浙江 杭州 310052）

病毒感染是导致儿童上呼吸道感染的主要原因，常见病毒包括流行性感冒病毒（influenza virus，Flu ）A、FluB、呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus，RSV）和腺病毒（adenovirus，ADV）等。采用胶体金等方法进行病毒抗原检测，操作方便、耗时短，可用于呼吸道病毒感染的早期诊断，在临床被广泛使用[1-2]。用于病毒检测的上呼吸道样本主要包括口咽拭子、鼻咽拭子、鼻咽吸取物；下呼吸道样本主要包括痰液、气管吸出物、支气管肺泡灌洗液等。由于患儿下呼吸道样本的获取存在一定困难，尤其是门诊或轻症患儿，并不适合收集其下呼吸道样本，临床上常采集此类患儿上呼吸道样本进行检测[3-4]。

口咽拭子采样时能够直视，大多采集者习惯于采集口咽拭子样本。秦笙等[5]发现，诊断RSV感染时，鼻咽拭子病毒培养阳性率和病毒核酸检测阳性率均高于口咽拭子。但胶体金免疫分析法对鼻咽拭子、口咽拭子样本病毒抗原检出率的具体影响未见相关报道。本研究采用胶体金法快速检测同时采集于同一患儿口咽拭子和鼻咽拭子样本中FluA、FluB、RSV和ADV抗原，比较2种样本病毒抗原阳性检出率，为临床选择样本类型提供参考。

1 材料和方法

1.1 研究对象

选取2020年1月1—20日就诊于浙江大学医学院附属儿童医院发热和呼吸道门诊的上呼吸道感染患儿199例，其中男117例、女82例，年龄（68±35）个月，所有患儿均无口腔、鼻腔活动性出血。本研究经浙江大学医学院附属儿童医院伦理委员会批准。

1.2 方法

由经过专业培训并考核合格者采集样本。（1）口咽拭子样本采集。采集者左手持无菌压舌板压住患儿舌头，右手将无菌拭子棒从口腔插入，以咽后壁、颚扁桃体的充血部位为中心，摩擦3次，采集黏膜上皮细胞，尽量避免碰到唾液。（2）鼻咽拭子样本采集。采集者左手托住患儿下巴，右手将无菌拭子棒插入患儿鼻腔，拭子朝向外耳方向，感觉有阻力后转动拭子并取出。采集成功后将拭子棒浸入装有样本保护液的采集管中，密闭后送检。

采集同一患儿口咽拭子样本（A管）和鼻咽拭子样本（B管），按照随机分配的原则确定不同患儿采集口咽拭子和鼻咽拭子样本的先后顺序。样本采集后置于试剂盒配套的病毒保护液中立即送检，30 min内报告检验结果。为避免检验人员主观因素对结果判定的影响，检验人员不知A管和B管的样本来源。

采用胶体金免疫分析法检测送检样本中的病毒抗原，包括FluA、FluB、ADV（1～8、11、19、37、55共12个血清型）、RSV（A、B 2个亚型）抗原，试剂盒购自杭州创新生物检控技术有限公司。严格按照试剂盒说明书要求进行操作。

1.3 统计学方法

采用SPSS 19.0软件进行配对四格表资料χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。计算2种样本检验结果相关性的Pearson列联系数。Pearson列联系数为0～1，愈近于0，说明几乎没有关系；愈近于1，说明2种样本的检测结果相关关系愈密切。

2 结果

2.1 口咽拭子和鼻咽拭子样本病毒检出率比较

同一患儿口咽拭子与鼻咽拭子样本胶体金免疫分析法病毒抗原检测结果显示，鼻咽拭子FluA、FluB、RSV、ADV和4种病毒总检出率高于口咽拭子（P<0.05）；RSV和ADV 2种样本病毒检出率差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

表1 口咽拭子和鼻咽拭子病毒阳性检出率比较 %

2.2 口咽拭子与鼻咽拭子样本病毒检测结果相关性分析

2种样本的抗原检测结果存在相关性，FluA、FluB、RSV、ADV和4种病毒合计Pearson列联系数分别为0.545（χ2=84.06，P<0.01）、0.576（χ2=98.90，P<0.01）、0.607（χ2=115.88，P<0.01）、0.369（χ2=31.42，P<0.01）和0.458（χ2=52.77，P<0.01）。列联系数不高主要是因为存在较多鼻咽拭子阳性而口咽拭子阴性结果。ADV的列联系数最低，相关程度不如其他病毒，是因为除6例患儿鼻咽拭子阳性口咽拭子阴性外，鼻咽拭子阴性口咽拭子阳性患儿有5例。如以鼻咽拭子病毒抗原检测结果为依据，口咽拭子FluA、FluB、ADV、RSV的敏感性和特异性分别59.7%和97.1%、61.9%和99.4%、45.5%和97.3%、75.0%和99.5%。口咽拭子与鼻咽拭子病毒抗原检测相关性结果见表2。

表2 口咽拭子与鼻咽拭子病毒检测结果相关性

3 讨论

呼吸道感染是儿科常见疾病，要做到精准治疗，病原学诊断非常重要。采用胶体金法检测呼吸道分泌物样本中的常见上呼吸道病毒抗原，耗时仅30 min，尤其适用于门、急诊。浙江大学医学院附属儿童医院2016年5月—2017年4月通过胶体金法检测了34 961例门、急诊呼吸道感染患儿FluA、FluB、RSV和ADV抗原，4种病毒的阳性率为39.8%。胶体金法临床准确性较高，有学者发现，以逆转录聚合酶链反应检测结果为标准，胶体金法检测FluA的敏感性为84.1%、特异性为95%；检测FluB的敏感性为85.7%、特异性98.7%[6]。杨慧等[2]发现，在甲型、乙型流行性感冒病毒的检测中，胶体金法与荧光聚合酶链反应检测结果的一致性较好，同时具有良好的敏感性和特异性。

临床上检测病毒抗原时常采集咽拭子样本，选择口咽拭子或鼻咽拭子样本常根据采样人员的个人习惯，随意性较大。本研究同时采集同一患儿口咽拭子和鼻咽拭子样本，采用胶体金法检测FluA、FluB、ADV、RSV抗原，2种样本的检测结果虽存在相关关系，但相关程度不高，主要是因为存在较多（40个）鼻咽拭子阳性，而口咽拭子阴性结果。因此，口咽拭子和鼻咽拭子样本并非可以相互取代，建议临床对高度疑似病例采用2根拭子依次采集其鼻咽拭子和口咽拭子样本，置于同一病毒保护液中送检，以提高检出率。有研究结果显示，多数呼吸道病毒的主要感染复制部位为后鼻咽部纤毛柱状上皮细胞，其次为前鼻孔和口咽部纤毛上皮细胞[7]，不同病毒的复制部位特性也值得进一步研究。

本研究中，鼻咽拭子4种病毒合计阳性率较口咽拭子高14.7%。其中，FluA、FluB鼻咽拭子阳性率分别较口咽拭子高10.6%、3.6%。本研究FluA、FluB检出率较高，可能与流行性感冒流行季有关。RSV、ADV鼻咽拭子的检出率虽高于口咽拭子，但差异无统计学意义，可能和阳性例数过少有关，需在RSV、ADV流行时期积累资料做进一步评估。

在欧美地区，鼻咽拭子检测法在临床实践中被认为是诊断呼吸道病毒感染最好的方法[8]。有学者发现，中鼻甲拭子与鼻咽拭子相比，通过实时逆转录定量聚合酶链反应测得的RSV病毒载量相似[9]，证实了通过鼻腔采样检测病毒的可靠性。结合本研究结果，在儿童中取单个咽拭子样本检测呼吸道病毒时，应选择采集鼻咽拭子，不建议采集口咽拭子，由于少数病例鼻咽拭子阴性而口咽拭子阳性，建议对于特殊病例用2根拭子分别采集其鼻咽拭子和口咽拭子样本混合于样本保护液后送检，以提高病毒检出率。