SLCO1B1 521T>C和388A>G基因多态性对冠心病患者阿托伐他汀降脂疗效的影响

白 颖，史旭波，王建旗，杨 毅，葛 兴，张 弨（.首都医科大学附属北京同仁医院药学部，北京 00730；.首都医科大学附属北京同仁医院心血管中心，北京 00730）

心血管疾病是全球范围内造成死亡的首要原因，而低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）的升高是心血管疾病的重要危险因素，降低LDL-C可显著减少动脉粥样硬化性心血管疾病（atherosclerotic cardiovascular disease，ASCVD）的发病及死亡风险[1]。他汀类药物目前已被广泛用于心血管疾病的一级和二级预防[2-5]。阿托伐他汀是目前临床最常用的降脂药物之一，临床应用中发现其降脂疗效存在显著的个体差异，既往研究表明基因多态性在其中发挥重要作用[6]，可能改变编码蛋白的结构或表达，从而对他汀类药物的吸收、分布、代谢和排泄产生潜在影响。目前SLCO1B1基因多态性对于药物疗效的影响获得了较多关注，然而研究结论尚不一致[7]，中国冠心病人群中该基因多态性对于阿托伐他汀降脂疗效的影响相关研究较少，因此本研究探索SLCO1B1 521T>C和388A>G基因多态性对于中国冠心病患者阿托伐他汀降脂疗效的影响，旨为降脂治疗提供有益参考。

1 对象与方法

1.1 研究对象

纳入2017年11月– 2018年8月就诊于我院门诊或住院的冠心病患者。纳入标准：①经冠状动脉造影或冠状动脉血管CT造影检查，诊断为冠心病的患者；②未服用过降脂药物，或曾经服用过但停药4周以上；③签署知情同意书。排除标准：①肝功能异常；②中重度肾功能异常；③妊娠哺乳期妇女；④脑血管意外、严重创伤、恶性肿瘤；⑤甲状腺功能减退；⑥死亡或中途退出的患者；⑦服用影响阿托伐他汀疗效的其他药物，如：环孢素、红霉素、克拉霉素、伊曲康唑等。本研究经过北京同仁医院伦理审查委员会审批（批号：TRECKY2018-018）。

1.2 治疗方法

患者口服阿托伐他汀钙片（商品名：立普妥，厂家：辉瑞制药有限公司，规格：20 mg）20 mg，qn。同时收集患者年龄、性别、诊断、合并疾病、应用药物等基本资料并记录。

1.3 检测指标

用药前及规律服药12周后，采集空腹静脉血，检测甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、肝功能以及肌酸激酶。EDTA抗凝管留存患者血样，– 20 ℃存放待基因检测。后采用Sanger测序方法检测SLCO1B1 521T>C和388A>G基因型，进行分析。

用引物5软件设计扩增该基因的引物。热循环程序如下：96 ℃初始变性5 min，然后35个循环，96 ℃变性20 s，52 ℃退火20 s，72 ℃延伸30 s，最后72 ℃延伸10 min（PTC-200 PCR，BIO-RAD，USA）。PCR产物经0.7%琼脂糖凝胶电泳证实扩增，DNA用溴化乙锭显色。c.100 C>T和邻近区域进行测序，PCR产物通过添加4 μL ExoSAP®（USB®，美国）在37 ℃和75 ℃下分别添加1 h和15 min进行纯化。之后，在10 μL的体积中进行PCR测序并执行2 μL的扩增。FIED PCR产物，1.75 μL Big Dye®终止剂v3.1 5×测序缓冲液（Applied Biosystems，Foster City，CA，USA），0.32 μmoL引物（反向引物：5′-CCCTGCTACTTCTT-3′）和0.5 μL Big Dye®终止子v.3.1循环测序试剂盒（美国加利福尼亚州福斯特市应用生物系统公司）。循环条件为25个循环，在96 ℃下循环10 s，在50 ℃下循环5 s，在60 ℃下循环4 min。通过乙醇沉淀纯化产物。使用Seqscape V.2.5®软件（Applied Biosystems，Foster City，CA，USA）在ABI Prism®3130设备（Applied Biosystems，Foster City，CA，USA）上进行分析和测序，并与参考序列（NM U 000106）进行比较。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差表示。以χ2检验检测基因型分布是否符合哈迪-温伯格（Hardy-Weinberg）平衡。用药前后血脂水平变化比较采用配对t检验。不同基因型之间血脂指标变化比较采用方差分析，P < 0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 一般资料

本研究共纳入80例患者，其中男性53例，女性27例，年龄35 ～ 80岁，平均（59.49±10.53）岁，详见表1。

表1 患者基线资料Tab 1 Baseline data of patients

2.2 等位基因频率以及Hardy-Weinberg平衡检测

检测结果提示各位点基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡（P > 0.05），表明本研究人群具有群体代表性，见表2。

表2 等位基因频率以及Hardy-Weinberg平衡检验Tab 2 Allele frequency and Hardy-Weinberg equilibrium test

2.3 血脂情况

阿托伐他汀给药后患者血清TG、TC、LDL-C水平均较用药前显著降低（P < 0.05），用药前后HDL-C水平变化差异无统计学意义（P = 0.263），见表3。

表3 阿托伐他汀治疗前后血脂变化情况Tab 3 Changes of blood lipid before and after atorvastatin treatment

2.4 SLCO1B1 521T>C对阿托伐他汀降脂疗效的影响

研究结果提示，TT基因型与（TC + CC）基因型相比，患者血清TG、TC、LDL-C以及HDL-C的浓度变化率差异无统计学意义（P > 0.05），见表4。

表4 SLCO1B1 521T>C对阿托伐他汀降脂疗效的影响Tab 4 Effect of SLCO1B1 521T>C on lipid-lowering efficacy of atorvastatin

2.5 SLCO1B1 388A>G对阿托伐他汀降脂疗效的影响

研究结果提示GG基因型与（AA + AG）基因型相比，患者血清TG、TC、LDL-C以及HDL-C的浓度变化率差异无统计学意义（P > 0.05），见表5。

表5 SLCO1B1 388A>G对阿托伐他汀降脂疗效的影响Tab 5 Effect of SLCO1B1 388A>G on lipid-lowering efficacy of atorvastatin

3 讨论

目前国内外已报道了几十个基因与阿托伐他汀的疗效及安全性相关，如APOE、CYP3A4、CYP3A5、MDR-1、SLCO1B1、ABCB1等[6-7]。其中研究最多、争议最大的是SLCO1B1基因。SLCO1B1基因位于12号染色体（12p12）短臂，全长108 kb。该基因编码OATP1B1。OATP1B1特异性分布于肝细胞基底外侧膜，介导基质从门静脉系统向肝细胞的主动转运。OATP1B1的功能变化影响肝脏中转运药物的摄取和清除[6]。阿托伐他汀已被证实经OATP肝脏摄取。OATP的表达和功能差异会导致阿托伐他汀代谢的个体差异。本研究主要探讨SLCO1B1基因多态性对于阿托伐他汀降脂疗效的影响。本研究结果显示在中国冠心病患者中，SLCO1B1 521T>C和388A>G变异与阿托伐他汀降脂疗效无关。

SLCO1B1基因频率存在种族差异。本研究中SLCO1B1基因频率（521C为11.25%，388G为76.87%）与既往研究结果一致[8]，而与其他种族间存在差异[9]，基因频率的差异可能是造成目前研究结果差异的因素之一。

SLCO1B1 521T>C等位基因突变会导致OATP1B1转运活性降低，导致肝脏摄取降低，进而使药物血药浓度增高[6]。Pasanen等[10]发现阿托伐他汀治疗过程中，SLCO1B1 521CC基因型患者的药-时曲线下面积比521TT基因型患者的大144%。而一项基于人群的队列研究则发现接受辛伐他汀、普伐他汀、洛伐他汀和氟伐他汀治疗的SLCO1B1 521T>C变异患者的药物疗效降低，但对接受阿托伐他汀治疗的患者无影响[11]。目前，也有学者探索了中国人群SLCO1B1基因多态性对于阿托伐他汀降脂疗效的影响，但结论存在争议[12-13]，需要注意的是上述研究所纳入的人群均为高脂血症患者，而冠心病较高脂血症的情况更为复杂。本研究中冠心病合并高脂血症患者仅占61.25%，一项巴西的研究结果显示TC、LDL-C基线水平越高者，治疗后血脂降低幅度越大[14]，提示阿托伐他汀对于不同基线血脂水平患者的调脂幅度存在差异。另外冠心病患者不可避免的要使用冠心病二级预防药物如：抗血小板药物、ACEI/ARB、β-受体阻滞剂等。既往研究表明ACEI和ARB是OATP1B1的底物，可能会影响阿托伐他汀的疗效[15]。因此不适宜将既往对高脂血症人群的研究结果推论至冠心病患者。

本研究为单中心研究，研究人群均为我院冠心病患者，不能代表全部中国人群，存在一定的局限性。研究人数偏少，研究结果可能存在误差，还需要更大样本量的研究来进一步证实。

综上，本研究未发现SLCO1B1 521T>C和388 A>G基因多态性对中国冠心病患者阿托伐他汀降脂疗效有影响，考虑该基因变异可能是影响阿托伐他汀疗效的因素之一。药物代谢的遗传变异除转运体外，还包括微粒体细胞色素P450酶、细胞膜受体、细胞内受体和离子通道成分的基因变异，均可能会对研究结果有不同程度的影响。目前SLCO1B1可能不能作为遗传标记物来预测阿托伐他汀对于冠心病患者的降脂疗效。未来需要多因素以及大样本的研究来确定SLCO1B1基因多态性在降脂治疗中的作用，为个体化药物治疗提供参考。