胸腹水细胞块石蜡包埋联合免疫组织化学技术在病理学诊断中的应用价值

李延新 杜雄 刘永霞

【关键词】胸腹水细胞;块石蜡包埋;免疫组织化学技术

胸腹水也叫胸腹腔积液，是临床上判断癌症的主要手段，临床上严重的胸腹水会给患者的生命带来巨大的威胁。进行细胞脱落病检是各医院病理科的重点工作，胸腹水细胞学检查是临床上常见的确定肿瘤性疾病的方法，比较细胞的大小、形状、内部构造，可以进行定性判断，这种方法具有简单、快捷、痛苦小等特点。临床上大多对细胞进行直接离心涂片法做出判断，但直接涂片法下的细胞较厚，不能呈现单一的细胞层，内部构造不容易观察，细胞量较少，阳性的检出率较低等，不利于临床上分辨肿瘤细胞以及间皮细胞[1]。因此临床上推出使用块石蜡包埋联合免疫组织化学技术对细胞进行切片染色，染色后的细胞结构清晰，切片的薄厚均匀，细胞结构较完整等特点，可以反复切片，进行染色后可以更準确鉴定肿瘤细胞分类及原发地，本文就胸腹水细胞块石蜡包埋联合免疫组织化学技术在病理学诊断中的应用价值进行如下报道。

1资料与方法

1.1一般资料

对在医院进行治疗的患者送检的胸腹水共60名，其中胸水46名，腹水16名。其中男性36名，女性24名。年龄分布在30岁～76岁，临床上确诊疾病22名，原因待查38名。

1.2试剂

所有的免疫组化试剂、即用型试剂盒及DAB显色剂均为美国DaKO试剂，使用DaKO全制动免疫组化仪进行实验步骤操作。

1.3方法

①收集患者胸腹水：根据胸腹水的浓度进行取用，取30～90毫升进行离心，每分钟2000转，离心10分钟。②将胸腹水进行离心后，舍弃上清液，取出少量沉淀做细胞涂片。③取95%乙醇，加入其他沉淀中，加入沉淀至30毫升，震荡2分钟，再进行离心，每分钟2000转，离心5分钟。④离心后放弃上清液，加入15毫升15%福尔马林固定。⑤静置3～5小时，去除福尔马林液体，用纸将沉淀和其他组织一起包裹，使用全自动脱水机进行脱水处理。⑥常规细胞切片使用苏木精-伊红染色后，在使用中性树胶封固。⑦使用CK7、CAl25、CK20、CK、CDX-2、ME、Calretinin、Vi-mentin、TTF-1等抗体，使用细胞免疫进行染色。胸水加做TTF-1，腹水加做CA125，与提供的对照物质进行阳性的比对，DAB显色[2]。

2结果

在60名疑似恶性胸腹水标本进行块石蜡包埋后，借助免疫组织化学染色，诊断结果如下：恶性胸腹水来源疑似乳腺癌2例，肺癌10例，腺癌12例，鳞癌4例，未发生原发性的恶性肿瘤16例，反应性间皮细胞增生为26例。

与常规涂片方法比较，该方法制片色彩鲜艳，背景清晰，有利于收集到更多的细胞，且具有一定的组织结构。因抗体不同，切片中所表达的阳性部位与组织学相同，所以阳性颗粒呈棕黄色。

3讨论

胸腹水是临床上最常见的特征之一，在临床上常用于鉴别癌细胞的类型及来源，以及鉴别肿瘤细胞是否病变，还可以明确肿瘤的性质。但胸腹水易受其他因素的影响，因此在鉴别过程中，会出现一系列的问题。常规涂片的缺点很多，如涂片的细胞数量较少，常常伴随着红细胞及其他炎症渗出物及粘液，背景不够清晰，在涂片时涂片较厚，多层细胞重叠，在诊断时，这些因素给观察细胞带来特别大的困扰。因此在临床上，经常使用福尔马林浸泡固定胸腹水，可以将胸腹水像组织块一样脱水，之后再进行包埋切片。

对胸腹水细胞块石蜡包埋联合免疫组织化学技术具有以下优点：①操作简单，方法便捷，不需要过多的仪器。②在包埋切片中，细胞为单层切片，便于观察。③可以搜集所有细胞，使碎小的组织也可以完整的切出，利于读取切片。④将胸腹水制成蜡块，方便保存，在临床会诊时可拿出反复使用，⑤可以将切片的免疫细胞进行化学染色，对肿瘤的类型以及来源进行准确的诊断，在鉴别时，可以清晰地观察到阳性细胞，利于临床上的鉴别。⑥通过生物分子标记法对切片组织进行标记，可以对临床上的治疗进行及时调整，也方便对疾病的确诊以及分析。⑦将进行切片的细胞块进行分子检测，可以实施分子靶向治疗，对组织细胞的耐药基因进行检测。

在炎性胸腹水增生或者退变的过程中，同皮细胞与某些恶性细胞从外观或结构上易混淆，因此临床上对胸腹水细胞块石蜡包埋联合免疫组织化学技术，不仅满足了诊断上的需求，还可以增加阳性细胞的检出率：①Calretinin、vimentin、MC，此类阳性细胞为间皮增生细胞。②CK-7、TTF-1等阳性细胞多来源于肺。③CK7、CA125等阳性细胞来源于卵巢。④CDA2、CK20等阳性细胞多来源于胃肠道。但是阳性细胞为非特异性细胞，抗体的组织特异性也并非绝对，因此需要进一步的观察。

综上所述，对胸腹水细胞块石蜡包埋联合免疫组织化学技术，加强临床上对肿瘤的判断，可以大范围推广。