液相色谱串联质谱法检测水产品中 17种抗生素残留量

2021-07-26李康柏许均图陈德斌洪瑞申

现代食品 2021年9期

◎ 陈燕，李康柏，许均图，陈德斌，洪瑞申，王景

（华鑫检测技术有限公司，广东广州 510642）

抗生素在预防和治疗感染性疾病、促进动物生产、日常保健等过程中作出了很大贡献。随着现代畜牧业的发展，抗生素作为饲料添加剂和防腐剂广泛应用于渔业养殖生产。但过量使用抗生素会产生食品安全问题和生物环境问题[1]。目前，国家对抗生素用法和用量列入日常监测范围。已有检测方法主要是食品检测标准通用，本研究方法在原有食品检测标准的基础上，对方法进行优化，建立了基于SPE-LC-MS/MS的磺胺类[2]、四环素类[3]、喹诺酮类[4]、大环内酯类[5]以及氯霉素类[6-7]等17种抗生素药物残留量的检测方法。

1 材料与方法

1.1 仪器试剂

Agilent 1260液相色谱，Agilent 6470三重四极杆串联质谱仪，氮吹仪，旋转蒸发仪，涡旋振荡器。

阿莫西林、青霉素G、氟甲喹、土霉素、四环素、金霉素、甲氧苄啶（TMP）、磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺-6-甲氧嘧啶、磺胺甲基异恶唑、磺胺间二甲氧嘧啶、红霉素、罗红霉素、氯霉素和氟苯尼考，磺胺二甲嘧啶-13C6，恩诺沙星-D5、青霉素G-D7、氯霉素-D5标准品；甲醇、乙腈均为色谱纯；实验室用水为mili-Q超纯水。PEP固相萃取小柱（200 mg/6 mL）。

1.2 标准工作曲线配制

17种抗生素标准溶液的配置：准确称取适量样品，用甲醇溶解并定容至10 mL，配成1 mg·mL-1的标准贮备液。于-20 ℃下保存。脱水红霉素溶液由红霉素标准溶液制备：向红霉素标准溶液中加入适量稀硫酸，常温下振荡4 h，用稀NaOH溶液调节pH至6.0，定容，于4 ℃下保存。实验时，根据需要配成适当浓度的标准工作液，于4 ℃下保存，当天使用。

1.3 仪器工作参数

1.3.1 色谱条件

Agilent Poroshell EC-C18液相色谱柱（4.6 mm×100 mm，2.7 μm）。流动相A：0.1%甲酸水溶液，流动相B：乙腈。流速：0.5 mL·min-1。洗脱程序：0.0 min 10% B，7.0～9.0 min 95% B，9.1 min 10% B。进样量：20 μL。负离子模式为流动相A：水，流动相B：乙腈。流速：0.5 mL·min-1。流动相比例为A∶B=4∶6。

1.3.2 质谱条件

（1）Agilent 6470的质谱条件。电喷雾负电离源（ESI+）；干燥气温度300 ℃；干燥气流速6 L·min-1；雾化器压力0.276 MPa；毛细管电压4 000 V；鞘气温度300 ℃，鞘气流速 12 L·min-1；扫描模式：多重反应监测（MRM）。

（2）负离子模式条件。电喷雾负电离源（ESI-）；干燥气温度300 ℃；干燥气流速6 L·min-1；雾化器压力0.276 MPa；毛细管电压2 500 V；鞘气温度 300 ℃，鞘气流速 12 L·min-1；扫描模式：多重反应监测（MRM）。MRM优化后的检测条件见表1。

表1 多重反应监测扫描模式监测17种抗生素的部分质谱参数表

1.4 测定步骤

1.4.1 样品预处理

样品去皮、骨、内脏后取可食部分，切碎匀浆，于冰箱4 ℃下贮存备用。

1.4.2 提取

称取5.0 g样品，加入100 μL内标液，加入乙二胺四乙酸（EDTA）使之浓度为0.01 mol·L-1，用80%乙腈溶液提取。PEP SPE小柱（200 mg/6 mL）用6 mL超纯水活化平衡，上样富集，上样后用10 mL超纯水和5 mL 5%甲醇水溶液淋洗小柱，氮气吹干后用5 mL甲醇洗脱，洗脱液在45 ℃下水浴氮吹至近干，加入1 mL 5%甲醇水溶液溶解残渣，过0.2 μm滤膜后，供液相色谱-串联质谱测定。

2 结果与分析

2.1 方法检出限及回收率

四环素类、大环内酯类采用外标法进行定量，其他抗生素采用相应类别的内标进行定量。水产品中17种抗生素的回收率在61%～115%。采用目标化合物的母离子和特征子离子为选择监测离子对（MRM），结合化合物不同的保留时间对目标化合物进行定性，17种抗生素10 ng·mL-1的提取MRM谱图如图1所示。17种抗生素的回收率和检出限如表2所示。