高效液相色谱法同时测定复方地克软膏中3组分的含量

游殷媛 李玉兰 陈桂红

1.深圳市宝安区中心医院药剂科，广东深圳 518102；2.深圳市宝安区卫生与健康局，广东深圳 518101

复方地克软膏的主要成分包括氯霉素、克霉唑和醋酸地塞米松三种药物，将以上三种药物均匀混合后再加入其他物质，包括硬脂酸、十八醇、尼泊金、液体石蜡[1-2]，随后将其加热，另加入蜡、三乙醇胺、樟脑、薄荷醇和纯净水，最后制成软膏。复方地克软膏临床使用相对较多，能发挥消炎、抗菌等作用，广泛用于过敏性皮炎、接触性皮炎等疾病中[3-4]。既往研究表明，复方地克软膏药物组成相对复杂，有效药物多以氯霉素，克霉唑、醋酸地塞米松为主。醋酸地塞米松属肾上腺皮质激素类的药物，克霉唑属于广谱抗真菌药，氯霉素属于酰胺醇类的抗菌药物[5-6]。为了解复方地克软膏中3组成分含量的情况，控制复方地克软膏的质量，保证药物安全及有效性，具有重要意义[7-8]。但是高效液相色谱法同时测定复方地克软膏中3组分的含量研究较少，因此本研究采用高效液相色谱法测定复方地克软膏中3组分的含量，探讨高效液相色谱法同时测定复方地克软膏中3组分含量的情况，现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器试剂

除气装置、自动进样器、二极管阵列检测器及四通泵均购自于美国安捷伦公司，Agilent 1100 HPLC系统，生产批号分别为20160085、20160072、20170164、20170732，同时，还包括分别由美国惠普公司提供和德国 Sartorius 公司提供的HP化学工作站和 CP225D 电子天平（量程：40、80、220 g，生产批号：20160572）。

1.2 试药

复方地克软膏由本院提供，批号为190301、194831；氯霉素API由安徽艾珂尔制药有限公司提供，国药准字：H34022991，规格：0.25 g，批次号：CH180101、CH180107；克霉唑原料药由江苏云阳集团药业有限公司提供，国药准字：H32020325，规格：0.25 g×100 s，批号：190107，195836；醋酸地塞米松API由西安瑞丰制药有限公司提供，国药准字：H20053752，规格：0.75 mg，批次编号 20170602、20184376；氯霉素对照品和克霉唑对照品及醋酸地塞米松参考品的批次编号分别为130555-201704、100037-201407、100122-200805，均由中国食品药品监督管理局提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Thermo Hypersil BDS C18，数据设置为250 mm×4.6 mm，5 μm；流动相：甲醇（a）-0.05 mol/L，磷酸二氢钾，其pH值为5.7，梯度洗脱时间：0～5 min时间内采用40%甲醇；5～15 min时间内采用40%→80%甲醇，15～19 min时间内采用80%甲醇；19～20 min时间内采用80%→40%甲醇；20～25 min时间内采用40%甲醇。流速为1.0 ml/min，设定检测波长235 nm、温度35℃，设定进样量10 μl。完成氯霉素峰、克霉唑峰及醋酸地塞米松峰的理论塔板数，均为＞10000且分离度＞15。

2.2 溶液制备

2.2.1 混合对照品溶液制备 准确称取定量氯霉素、克霉唑、地塞米松乙酸酯，用甲醇溶解，并将其放入同一10 ml量瓶中，充分摇匀，制成每毫升溶液分别包含2.0、1.0和0.6 mg三种成分的混合液，滤膜孔径25 μm，得混合对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液制备 准确称量0.6 g样品并将其放入25 ml量杯中，取20 ml甲醇，将其加入其中并塞紧，在50℃水浴中加热2 min，使底物完全融化，冷却，随后用甲醇固定体积并充分混合均匀放入冰水浴中，时间为2 h，快速过滤且将留取连续滤液。并选用适量的空白基质按照上诉方式进行制备空白基质溶液，滤膜孔径25 μm，得供试品溶液。

2.3 线性关系

分别精密称取2.2项下氯霉素、克霉唑和醋酸地塞米松不同质量溶度的系列混合对照品溶液，根据2.1项下色谱条件进样，记录峰面积。以待测成分色谱峰面积设定为纵坐标（y），测定药物浓度为横坐标（x），完成线性分析，见表1。

表1 待测成分线性范围及回归方程

2.4 稳定性试验

取2.2.2项下方法指标的供试品溶液，放置在0、2、4、6、8、18、24 h 时按 2.1 项下，完成峰面积的记录，并绘制相关曲线。结果表明，三种药物RSD均小于1%，提示溶液24 h内稳定性较好。

2.5 重复性试验

取上述同一批号药物6份，根据2.2.2供试品溶液，按2.1项下色谱条件进样，计算RSD值。结果表明，三种药物RSD为0.49%、0.79%、1.36%，可重复性较好。

2.6 精密度试验

分别精密量取2.2.1下氯霉素、克霉唑和醋酸地塞米松混合对照品溶液 0.5、0.7、1.0、2.0 mg 于量瓶中，向量瓶中加入适量的甲醇，获得不同质量浓度的系列混合对照品溶液，按2.1项下色谱条件进样，记录峰面积，计算RSD值，分别为0.73%、0.45%、1.23%，具有较好的精密度。

2.7 加样回收试验

氯霉素、克霉唑及醋酸地塞米松的加入量发生变化，对应的回收率也发生变化，氯霉素、克霉唑及醋酸地塞米松的平均回收率分别为99.93%、100.21%、100.26%。见表2。

表2 回收率试验结果（n=9）

2.8 专属性试验

选取2.2下混合对照品溶液、供试品溶液和空白基质溶液适量，按2.1项下色谱条件进样，然后将色谱记录下来并保存，并进行线性关系考察和精密度试验。根据高效液色谱图中显示，空白基质对氯霉素、克霉唑、醋酸地塞米松3种主要成分的测定，无干扰作用，表示本方法的专属性较好，见图1。

图1 高效液色谱图

2.9 样品含量测定

取不同批次样品适量，根据2.2.2项下方法制备供试品溶液，再根据2.1项下色谱条件进样测定，计算3种主要成分含量，结果表明，氯霉素含量分别为 92.23%（批号 190301）、91.59%（批号194831）；克霉唑含量分别为95.7%（批号：190107）、102.59%（批号 195836）；醋酸地塞米松含量为100.59%（批号20170602）、103.32%（批号20184376）。

3 讨论

选择不同的色谱柱并选择不同的柱温，分别对氯霉素的分离度、克霉唑的分离度和醋酸地塞米松的分离度进行研究，其结果显示不同柱温、不同色谱柱对氯霉素、克霉唑和醋酸地塞米松的分离度影响较小，则显示出高效液相色谱的耐用性较好[9-10]。复方地克软膏是一种复方制剂，组成成分非常复杂，包含许多亲水性和亲脂性基质。制备测试溶液时，应根据主要药物和辅助材料的理化性质选择溶剂，尝试不同浓度的甲醇溶液作为溶剂，或尝试不同浓度纯甲醇作为溶剂，提取样品。当甲醇浓度低时，色谱柱被堵塞而导致色谱柱压力升高。通过采用高效液相色谱检测复方地克软膏中3组分的含量，以便能够改进优化制备工艺[11-13]。

复方地克软膏原生产工艺操作要求为醋酸地塞米松、氯霉素、克霉唑混匀，加入甘油研成糊状，加入热水混匀再加入三乙醇胺混匀备用，再取硬脂酸、十八醇、尼泊金、液体石蜡加热共熔，随后加入樟脑、薄荷脑溶解，混匀备用，最后将水相备用液在搅拌下加入油相备用液中直至形成糊状半固体，停止搅拌，即得。此工艺存在的问题[14-15]：制剂的稳定性差，醋酸地塞米松、氯霉素含量不稳定；储存过程中易变色。同时，试剂制备过程中加入时，基质的温度对醋酸地塞米松、氯霉素、克霉唑的稳定性可能也有影响，从实验结果来看基质温度在50～60℃时加入混合出来的制剂原料含量更高。文献资料显示[16]，氯霉素滴眼液在制剂时，将注射用水煮沸，能够有效的减少水中含氧量，等到冷却到60℃以下时，再取合适剂量的氯霉素加入，能够有效的减少制备过程中，氯霉素分解的情况。在制备过程中，添加合适剂量的β-环糊精，就能够增强氯霉素的稳定性。如果利用β-环糊精或其衍生物，通过饱和水溶液法、超声波法、研磨法、冷冻干燥法等包合技术，制备氯霉素-β-环糊精包合物，有极大几率得到的氯霉素制剂稳定性更加良好，通过分析其中的含量并将其改进生产工艺路线[17-18]，使得复方地克软膏中各项成分含量更稳定、精密度良好、更具有专属性。本研究中，氯霉素、克霉唑及醋酸地塞米松的加入量发生变化，对应的回收率也发生变化，氯霉素、克霉唑及醋酸地塞米松的平均回收率分别为99.93%、100.21%、100.26%，说明醋酸地塞米松回收率较高。

综上所述，高效液相色谱法检测复方地克软膏中3组分的含量效果较好，该检测方法简单快速，结果准确性较高且具有较好的重复性，能完成该类药物质控，值得推广应用。