ApoE基因多态性与脑梗死认知障碍及复发的相关性分析

孔咏梅，郭医杰，王美蓉，刘亚林，张晓林

（邢台市第三医院神经内科，邢台 054000）

脑梗死又被称为缺血性脑卒中，是临床较为常见的脑卒中类型，其发生主要是由于患者供应脑部血液的动脉出现粥样硬化和血栓形成，造成管腔狭窄、闭塞，继而引发局灶性急性脑供血不足，脑组织坏死［1］。该病病情进展迅速，若未及时采取有效治疗，会对患者生命安全严重威胁［2］。临床显示［3-4］，由于脑梗死患者存在局灶性的血运减少，周围的神经元细胞、神经胶质细胞均会受到损伤，因而易导致患者的神经功能的受到一定程度的损害，遗留认知障碍等后遗症。据统计［5-6］，急性脑梗死后继发认知障碍的比例在26.05%～63.04%。近年来有学者研究发现，载脂蛋白E（Apolipoprotein E，ApoE）对于调节机体的血脂代谢、胆同醇平衡方面起到了重要作用，在动脉粥样硬化的发生、发展及神经功能损伤的修复中也扮演了关键角色［7］。既往研究显示［8］，脑梗死及血管性认知障碍的发生与ApoE基因多态性关系密切。然而，目前有关脑梗死认知障碍及复发与ApoE基因多态性关系的研究尚不多见。因此，本研究探讨了ApoE基因多态性与脑梗死认知障碍及复发的相关性，旨在明确其在脑梗死认知障碍及复发中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2018年1月～2019年12月本院收治的78例脑梗死后认知功能障碍患者为观察组。其中男42例，女36例；年龄50～82岁，平均（65.48±7.92）岁；既往史：高血压史50例，冠心病史28例，糖尿病史23例；文化程度：初中及以下48例，高中及以上30例。另选取同期本院收治的脑梗死后认知功能正常患者80例作为对照组，其中男45例，女35例；年龄49～79岁，平均（63.51±7.53）岁；既往史：高血压史46例，冠心病史31例，糖尿病史20例；文化程度：初中及以下48例，高中及以上32例。两组各方面比较未见明显差异（P>0.05），均衡可比。医院伦理委员会通过此项目，患者了解并同意参与。

1.2 诊断标准脑梗死诊断参考符合2017年《中国脑血管病防治指南》［9］中相关标准，均经颅脑CT、MRI检查证实。

认知功能障碍诊断根据蒙特利尔认知评估量表（Montreal Cognitive Assessment，MoCA）评分［10］、简易智力状态检查量表（Mini-mental State Examination，MMSE）评分［11］及临床失智评分（Clinical Dementia Rating，CDR）评分进行判定：①MoCA评分＜26分；②MMSE评分＜26分（文盲组24分）且CDR评分=0或0.5分；③19分（文盲组17分）≤MMSE评分≤26分（文盲组24分），且CDR评分=1分。满足①且满足②、③两者之一即诊断为认知功能障碍［12］。

1.3 纳入与排除标准纳入标准：①两组均符合上述脑梗死诊断标准，观察组患者同时符合认知功能障碍诊断标准；②首次发病，脑梗死后2周～3个月，病情稳定；③性别不限，年龄不低于16周岁；④视觉、听觉正常，意识清醒，能配合完成检查。

排除标准：①观察组排除因脑梗死原因以外引发的认知功能障碍；②伴严重心、肝、肾等脏器疾病；③伴严重并发症；④伴先天免疫缺陷性疾病；⑤伴恶性肿瘤；⑥伴精神疾病；⑦存在失语、意识障碍等无法配合研究者；⑧难以完成随访者。

1.4 方法及分组

1.4.1 资料收集收集所有研究对象性别、年龄、既往史（包括高血压、冠心病、糖尿病）、文化程度等资料。

1.4.2 基因多态性检测采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应（PCR-RELP）检测ApoE基因分型。采集所有研究对象的晨起空腹静脉血2mL，EDTA-2Na抗凝，提取全血基因组DNA，使用美国ABI 7500型PCR扩增仪进行PCR扩增，引物序列：①上游：5’-TCCAAGGAGCTGCA GGCGGCGCA-3’；②下游：5’-ACAGAATYCGCCCCG GCCTGGTACACTGCCA-3’。反应条件：95℃预变性5 min，，95℃30 min→65℃30 min→72℃30 min循环45次，72℃延伸10 min，2%凝胶琼脂糖电泳。ApoE基因酶切10%聚丙烯酰胺凝胶电泳、酶切、银染，在紫外线凝胶成像仪下观察电泳结果。

1.4.3 分组方法对观察组患者随访1年，随访方式为门诊复查、电话。根据1年内脑梗死复发情况，将观察组患者分为复发组、未复发组。

1.5 统计学方法采用SPSS 22.0软件分析数据，计量资料均以mean±SD表示，对先对计量资料首行正态性检验，满足正态性且组间方差齐，采用两样本独立t检验、单因素方差分析比较组间差异，两两比较采用SNK检验；计数资料均以（%）表示，采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组ApoE基因型及等位基因分布对比2组患者中，最常见的ApoE基因型均为ε3/3（观察组58.97%、对照组63.75%）；经比较，2组的ε2/3、ε2/4、ε3/3、ε3/4基因型频率无明显差异（P>0.05），但观察组的ε4/4基因型频率明显高于对照组（P<0.05）。2组患者中，最常见的等位基因均为ε3（观察组70.51%、对照组78.75%），其次是ε4、ε2；经比较，2组的ε2、ε3等位基因频数无明显差异（P>0.05），但观察组的ε4等位基因频数明显高于对照组（P<0.05），见表1。

表1 两组ApoE基因型及等位基因分布对比［n（%）］

2.2 不同ApoE基因亚型患者的MOCA、MMSE评分对比脑梗死患者中，携带ε4等位基因患者的MoCA、MMSE评分均明显低于携带ε2、ε3患者（P<0.05），见表2。

表2 不同ApoE基因亚型患者的MOCA、MMSE评分对比

2.3 不同复发情况患者的临床资料对比观察组78例患者均获随访，随访率100%。据统计，有26例患者在为期1年的随访中出现脑梗死复发，复发率33.33%。经比较，复发组和未复发组患者在性别、年龄、合并疾病及文化程度方面均无明显差异（P>0.05），见表3。

表3 观察组不同复发情况患者的临床资料对比［n（%）］

2.4 不同复发情况患者ApoE基因型及等位基因分布对比对比不同复发情况患者ApoE基因型及等位基因分布情况发现，复发组和未复发组的ε2/3、ε2/4、ε3/3、ε3/4、ε4/4各基因型频率无明显差异（P>0.05），ε2、ε3等位基因频数无明显差异（P>0.05），但复发组的ε4等位基因频数明显高于未复发组（P<0.05），见表4。

表4 不同复发情况患者ApoE基因型及等位基因分布对比［n（%）］

3 讨论

ApoE属于载脂蛋白家族成员，主要在肝脏合成、代谢，其作为一种多态性蛋白，能够参与多种脂蛋白的代谢和运输，其不仅与血浆脂蛋白水平高度相关，也与机体的血脂水平关系密切［13］。ApoE编码基因位于第19号染色体长臂13区2带，其多态性的产生是由于第4号外显子编码112位、158位氨基酸密码子表达ε2、ε3、ε4共3种等位基因，根据不同的组合方式可形成ε2/2、ε2/3、ε2/4、ε3/3、ε3/4、ε4/4共6种基因型［14］。

近些年研究显示，ApoE基因多态性具有多重生物学意义，其与认知功能障碍有一定联系。罗伏钢等［15］分析了脑梗死后血管性痴呆（vascular dementia，VD）患者的ApoE基因多态性分布情况，发现脑梗死后VD患者的ε4等位基因频率明显高于健康人群，ApoE ε4基因可能是脑梗死后VD发生的易感基因，且其可缩短患者出现VD的时间。朱烨等［16］研究指出，不同年龄段的老年阿尔茨海默病（Alzheimer disease，AD）患者ApoE基因表达不一，且ApoE ε4基因与认知功能障碍关系密切。本研究结果显示，观察组的ε4/4基因型频率明显高于对照组，观察组的ε4等位基因频数明显高于对照组，提示ε4/4基因型在脑梗死认知障碍患者中可能是潜在的危险性因素，ApoE ε4基因可能与脑梗死认知障碍发生有关，与国内外学者研究结论类似。同时，本研究对比不同ApoE基因亚型患者的MOCA、MMSE评分发现，与ApoE ε2、ε/3基因等位基因携带者相比，ApoE ε4基因携带者的上述认知功能评分显著下降，进一步证实了ApoE ε4基因可能是导致脑梗死认知障碍发生的危险因素。目前，有关ApoE ε4基因在脑梗死认知障碍中的作用机制尚未明确，推测其可能与以下因素有关：①ApoE ε4活性增加，可引发大量脂质内吞，提升机体的胆固醇水平，造成血脂代谢紊乱，加速动脉粥样硬化的形成；②在神经元损伤后的修复过程中，髓鞘磷脂代谢起到了重要作用，ApoE正是髓鞘磷脂代谢关键因子，然而这一作用是E3单体特异性的，E4无此功能，因此携带ε4基因可能会阻碍神经细胞损伤后神经功能的恢复；③与ε3相比，ε4的抗氧化能力更弱，其对缺血性神经元损伤的保护作用也更差，因此ApoE ε4基因携带者出现神经细胞缺血性损伤的程度也会较重。

ApoE基因多态性与动脉粥样硬化的发生具有密切关联，在冠心病、脑梗死等心脑血管疾病的发生、发展中有一定的作用［17-18］。吉维忠等［19］的研究显示，青海世居藏族人群脑血管病患者中ApoE基因型以ε2/3最常见，ε3等位基因可能是藏族人群脑梗死的易感因素。张晋霞等［20］则认为ε4等位基因是汉族人群缺血性脑卒中患者危险及遗传易感因素。目前，关于何种ApoE基因多态性对脑梗死复发的影响最大尚未见报道，本研究对比不同复发情况患者ApoE基因型及等位基因分布情况发现，复发组的ε4等位基因频数明显高于未复发组，提示ε4等位基因则是脑梗死复发的潜在危险因素。推测其原因可能是ε4基因则具有升高胆固醇的作用，患者体内的血脂紊乱状态更易造成疾病复发。

ApoE基因多态性与脑梗死认知障碍及复发存在相关性，携带ε4基因可能是脑梗死认知障碍及复发的易感因素。