细菌培养法与荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)对妊娠晚期B族链球菌筛查的应用价值比较

金娴，樊春卉，谭萍，刘璇，陈芳

深圳市盐田区人民医院(深圳, 518081)

0 引言

B族链球菌（GBS）通常会定植在女性阴道内及肠道中，是诱发羊膜腔感染、早产及胎膜早破的高危因素[1]。另外，GBS能够经产道进行垂直传播，从而导致新生儿出现GBS感染，并存在诱发新生儿败血症、肺炎及脑膜炎的风险[2]。相关统计资料显示[3]，孕妇感染GBS的发生率约为11%～32%，并且其中的39%～68%又会传播给新生儿，围生期的GBS感染会严重威胁母婴生命安全。因此，对孕产期孕妇开展GBS感染筛查对于保证母婴健康意义重大。以往多通过直接检测孕妇阴道及肛门内分泌物完成GBS感染的筛查，但检出率相对较低，与发达国家20%～30%的检出率相比还有一定差距[4]。因此，亟待寻求一种更加高效、准确的检测方案应用于此，本次研究旨在明确实施传统常规检测前进行标本增菌培养对GBS感染检出率的影响，报道如下。

1 资料和方法

1.1 一般资料

本次研究对象均为接受GBS感染筛查的妊娠晚期孕妇，共计300例，纳入时间介于2019年3月—2019年9月，产妇孕期介于35周～37周之间；年龄介于22岁～41岁之间，平均年龄为（29.72±1.30）岁。纳入标准：孕周经B超核实相符；一周内无性生活；两周内无抗生素药物治疗史；不存在阴道流血症状；单活胎；孕妇对本研究知情同意；经本院伦理委员会批准。排除标准：取样部位曾用药、灌洗或使用过栓剂者；合并生殖道感染者；合并免疫系统疾病者；并发内外科疾病者。

1.2 方法

1.2.1 标本采集

分别采集所有纳入对象阴道、直肠分泌物作为检测标本，取材过程中首先擦去外阴分泌物，将2支拭子插入阴道下1/3部位，旋转1周后完成阴道分泌物的采集。随后将2支拭子于肛门插入，在肛门括约肌上2.5 cm处旋转1周完成直肠分泌物的采集。最后将2支拭子放进无菌管送检。

1.2.2 增菌培养

将其中采集的一份标本按照无菌操作方法置于选择性肉汤培养基中进行增菌培养，接种羊血脂平板培养基，分区划线，于5%～10%CO2恒温培养箱（35 ℃）中培养18 h留存，再另取一部分增菌培养18 h后的标本以同样条件继续培养18 h留存，共获得三份不同时间段（增菌前、增菌18 h及增菌36 h）标本。

1.2.3 细菌培养法检测

取原始标本及增殖培养18 h、36 h增殖液分别接种血平板，于5%～10%CO2恒温培养箱（35 ℃）中培养，挑取可疑菌落做涂片实施革兰染色镜检，革兰染色阳性，触酶试验阴性，CAMP试验阳性为GBS，GBS菌落特征表现为透光、灰白色、光滑、湿润、凸起，化脓链球菌、无乳链球菌分别作为阴性、阳性对照，而后经VITEK2全自动微生物鉴定系统检测确认。

1.2.4 PCR法检测

取原始标本加入1 mL生理盐水振荡混匀离心后去上清及及增殖培养18 h、36 h增殖液各1 mL离心后去上清，加入DNA提取液，100 ℃裂解10 min，12 000转/min离心5 min，取上清5 μL作为模板进行PCR扩增。PCR体系中加入内参照系统将可能存在的假阴性结果排除，FQ-PCR法检测阳性评价标准为CT指标＜38 Hu且荧光信号曲线呈S形。

1.3 观察指标

对比细菌培养法与FQ-PCR法直接筛查及增菌培养18 h、36 h筛查GBS感染的检出率。

1.4 统计学分析

以SPSS 22.0统计学软件分析整理研究数据，通过百分数（%）的形式呈现GBS感染检出率并行卡方检验，P＜0.05说明差异有统计学意义。

2 结果

两种检测方法在增菌18 h、36 h后的检出率均显著高于直接检测（P＜0.05）；FQ-PCR法直接检测的检出率显著高于细菌培养法（P＜0.05）；FQ-PCR法增菌18 h及36 h后的检出率均高于细菌培养法，但组间差异无差异有统计学意义（P＞0.05）。详见表1。

表1 细菌培养法与PCR法检测GBS感染的阳性率对比[n(%)]Tab. 1 Comparison of positive rates of GBS infection by bacterial culture and PCR

3 讨论

妊娠期孕妇受阴道pH值变化、机体免疫能力降低、体内雌激素及孕激素水平升高等因素影响，往往会致使其阴道菌群出现失调情况，并最终为GBS感染及细菌增殖提供了便利条件［5-6］。相关研究指出［7］，分娩前4 h予以孕妇抗生素治疗可大为降低新生儿感染GBS风险，因此，如何对孕产妇GBS感染情况加以快速确诊具有异常重要的临床意义。

本次研究结果显示，细菌培养法直接检测、增菌18 h及36 h后检测GBS感染的检出率分别为2.33%、9.33%、10.67%，FQ-PCR法各时段检出率分别为9.00%、12.67%、14.00%，两种检测方法增菌后的检出率均显著提升（P＜0.05）；FQ-PCR法直接检测的检出率显著高于细菌培养法（P＜0.05）；FQ-PCR法增菌18h及36h后的检出率均高于细菌培养法，但组间差异无差异有统计学意义（P＞0.05）。提示PCR法各时段筛查GBS感染的阳性检出率较之细菌培养法更高，且检出率随着增菌时间的延长明显增加。通过分析可知，检测过程中有多方面因素可能会对细菌培养法的准确性产生影响［8］。其一，其他种类的细菌生长有可能会对GBS繁殖产生抑制作用，致使GBS有效细菌量不足，而增加培养难度，并导致检测结果出现假阴性［9］；其二，标本受环境温度、保存条件等客观因素的影响，存在GBS死亡情况，进而造成漏诊［10］。而FQ-PCR法检出率高于细菌培养法的原因在于荧光PCR技术可通过扩增获取并增加特定的DNA片段，从而保证检出率能够有所提高［11］。同时扩增后还能够将微量病原菌及死亡GBS检测出来，因此其敏感度相对更高，从而提高检出率，因此筛查效率会更高［12］。此外，本研究中应用先增菌再实施GBS筛查的方案，进一步优化常规检测程序，将不同方案的积极作用充分优化组合，促使总体检出率得到了提升。

综上所述，在增菌基础上应用细菌培养法或FQ-PCR法筛查GBS感染的阳性检出率较之直接检测均有所提高，且操作简便，同时FQ-PCR法各时段的检出率均高于细菌培养法，使感染孕妇可早期用药治疗，进一步保证母婴安全，优化妊娠结局，值得推广。