基因毒性杂质甲磺酸甲酯测定方法验证

杜飒

浙江逸盛新材料有限公司 浙江 宁波 315803

引言

基因毒性杂质是指化合物本身直接或间接损伤细胞DNA，产生基因突变或体内诱变，具有致癌可能或者倾向，基因毒性杂质危害性大，需要严格控制其在药物中的限度，保障用药安全。由于甲磺酸甲酯无紫外吸收且具有挥发性，所以采用气相色谱法进行方法开发与验证，以适用于残留溶剂分析方法中甲磺酸甲酯的日常分析需要[1]。

1 实验部分

1.1 仪器及试剂

仪器：气相色谱仪Agilent 7890 B;色谱柱D B-WA X 30m×0.32mm×0.5μm；

电子天平 AL-104；微量进样针

试剂：甲磺酸甲酯；碘化钠（分析纯）稀释液：超纯水

1.2 实验条件和标准方法

采用DB-WAX 色谱柱（30m×0.32mm×0.5μm），FID检测器，进样口温度100℃，分流比5:1，检测器温度270℃，柱温：35℃保持8分钟，然后以每分钟40℃升温至200℃，保持4分钟。载气为氮气，流速为0.8ml/min；顶空进样顶空瓶平衡温度为80℃，平衡时间为30分钟，进样针温度95℃，传输线温度100℃。

1.3 实验过程

用微量进样针精密移取约20μl甲磺酸甲酯标准品置装有适量超纯水的50ml量瓶中，加超纯水稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml置200ml量瓶中，加超纯水稀释至刻度，从中精密量取10ml置100ml量瓶中，加超纯水稀释至刻度，作为储备溶液，精密量取储备溶液5ml置顶空瓶中，加入约6g碘化钠，摇匀，轧盖密封，作为标准溶液。精密量取标准溶液1ml注入气相色谱仪，记录色谱图。

按照以上实验条件及方法分别从4个方面进行验证：

1.3.1 专属性：移取上述标准溶液5ml分别至6个顶空瓶中，进样6次。甲磺酸甲酯峰理论板数应不低于5000，6针峰面积RSD应不小于10%。

1.3.2 定量限与检测限：逐级稀释标准溶液，如达到信噪比≥10:1，此浓度溶液为定量限溶液，取该溶液重复进样6次；如达到信噪比≥3:1，此浓度溶液为检测限溶液。

1.3.3 线性：取从定量限浓度到标准限度浓度200%之间的5个线性检测溶液进样。

1.3.4 耐用性：微调色谱参数（起始柱温设定为33℃、37℃，流速设定为0.7ml/min、0.9ml/min）及更换色谱柱再分别对标准溶液进行试验[2]。

实验结果如下表：

表1 分析结果汇总表

2 实验结果与结论

标准溶液按照标准方法分析谱图如下：

图1 标准溶液图谱

按实验结果来看，验证项目的结果都在可接受标准之内，证明此方法可行，可靠。此方法可以作为甲磺酸甲酯的日常检测分析。