外周血白细胞形态学参数在甲型、乙型流行性感冒诊断中的应用

蔡 祺，陈骊婷，郭 平，林 瀚，万颖蕾

（上海交通大学医学院附属瑞金医院检验科，上海 200025）

流行性感冒（简称流感）是一种由流感病毒引起的在全球范围内周期性流行的急性呼吸道疾病。据世界卫生组织统计，全球每年有5%～15%的人发生流感，死亡例数高达50万[1]。流感病毒属正黏病毒科单股负链分节段RNA病毒，根据病毒内部的核蛋白（nucleocapsid protein，NP）和基质蛋白（matrix protein，MP）抗原性不同，分为A（甲）、B（乙）、C（丙）、D（丁）4型[2]。甲型流感病毒2009年3月在墨西哥和美国西南部被发现，随后蔓延至全球，能感染包括人、禽类、猪、马、狗等多种动物，极易发生变异，曾多次引起全球范围的暴发流行，为人流感主要病原体[3-4]；乙型流感病毒主要感染人，其结构和引发的症状与甲型流感病毒相似，但变异较少，可引起小规模暴发流行；丙型流感病毒能感染人和猪，但多以散发病例形式出现，一般不引起流行，且感染后症状较轻；丁型流感病毒不常见，目前仅在猪和牛体内被分离到，与丙型流感病毒相似。

目前，流感病毒的实验室检测主要为血常规、C反应蛋白（C-reactive protein，CRP）和病原体检测。血常规和CRP检测经济、方便、快速，但特异性不高。病原体检测特异性好，但成本相对较高。目前，有部分血液分析仪可通过荧光染色和激光光散射检测来识别每个细胞的颗粒性、核质比和分叶特性等特征，对白细胞（white blood cell，WBC） 形态进行定量检测，在生成血常规报告的同时，同步生成可以反映细胞结构、颗粒、体积及细胞内复杂程度等特征变化的白细胞形态学参数（leukocyte morphological parameter，LMP）结果，可用于感染性疾病的诊断和鉴别诊断、败血症的诊断、病毒性肝炎的诊断和活动性判断等[5-11]。本研究旨在探讨LMP在甲型流感、乙型流感临床诊断中的应用价值。

1 材料和方法

1.1 研究对象

选取2019年7月—2020年1月上海交通大学医学院附属瑞金医院甲型流感、乙型流感患者186例，其中男97例、女99例，年龄（37.6±18.1）岁，包括甲型流感患者77例（甲型流感组）、乙型流感患者109例（乙型流感组）；另选取同期101名体检健康者作为健康对照组，其中男54名、女57名，年龄（37.2±15.8）岁。

1.2 方法

用无菌拭子（美国BD公司）采集所有研究对象咽喉分泌物样本，用无菌乙二胺四乙酸二钾抗凝真空采血管（美国BD公司）采集所有研究对象外周血样本。采用BC6800血液分析仪（深圳迈瑞公司）及配套试剂检测血常规[WBC计数、中性粒细胞百分比（the percentage of neutrophil，NEUT%）、单核细胞百分比（the percentage of monocyte，MO%）]及LMP[单核细胞前向散射光中心位置（monocyte forward scattered light central position，Mon_FSC_CenterPos）、单核细胞前向散射光分布宽度（monocyte forward scattered light distribution width，Mon_FSC_Width）、高荧光强度细胞比例（high fluorescence intensity cell percentage，HFC%）]。采用CRP-M100特定蛋白免疫分析仪（深圳迈瑞公司）及配套试剂检测CRP。采用广州万孚生物技术有限公司甲型和乙型流感病毒抗原检测试剂盒（双抗体夹心法）检测甲型流感、乙型流感病毒抗原。抽取400 μL咽喉分泌物样本提取液进行样本抽提处理，吸取处理好的病毒采集液，加入甲型流感、乙型流感试剂检测板加样孔内，每孔加入80 mmol/L，15～20 min后观察结果，以出现质控条带与病毒检测条带为阳性。

1.3 统计学方法

采用SPSS 24.0软件进行统计学分析。呈正态分布的数据以表示，组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析。采用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线评估各项指标的诊断效能。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 甲型流感组、乙型流感组、健康对照组一般资料

77例甲型流感患者中，CRP阳性28例、阴性49例；109例乙型流感患者中，CRP阳性23例、阴性85例；101名健康体检者CRP、甲型流感、乙型流感病毒抗原检测均为阴性。

2.2 甲型流感组、乙型流感组（CRP阴性患者）、健康对照组各项指标比较

甲型流感组、乙型流感组NEUT%、MO%、Mon_FSC_CenterPos、Mon_FSC_Width、HFC%明显高于健康对照组（P＜0.01）。甲型流感组NEUT%高于乙型流感组（P＜0.01），MO%、Mon_FSC_CenterPos、Mon_FSC_Width、HFC%均低于乙型流感组（P＜0.01）。见表1。

表1 甲型流感组、乙型流感组（CRP阴性患者）和健康对照组各项指标的比较

表1 甲型流感组、乙型流感组（CRP阴性患者）和健康对照组各项指标的比较

注：与健康对照组比较，*P＜0.01；与甲型流感组比较，#P＜0.01；空白表示无此项。

组别 例数 NEUT%/% MO%/% Mon_FSC_CenterPos Mon_FSC_Width HFC%/%健康对照组 101 57.72±8.24 5.98±1.38 923.56±25.03 230.20±19.92 0.118±0.080甲型流感组 49 72.80±9.23 9.07±3.18* 973.89±32.91* 266.62±32.17* 0.257±0.200*乙型流感组 85 65.53±11.31 10.83±3.65*# 987.73±31.13*# 276.91±34.30*# 0.369±0.330*#

2.3 各项指标诊断CRP阴性流感患者的效能

将甲型流感组和乙型流感组中CRP阴性的患者合并为CRP阴性流感组。ROC曲线分析结果显示，WBC计数诊断CRP阴性流感的曲线下面积（area under curve，AUC）为0.455。NEUT%、MO%、HFC%、Mon_FSC_CenterPos和Mon_FSC_Width诊断CRP阴性流感的AUC分别为0.776、0.876、0.805、0.924、0.866，最佳临界值分别为66.55%、7.35%、0.15%、948.00、249.57，敏感性分别为62.7%、80.0%、76.1%、88.8%、76.1%，特异性分别为86.1%、86.1%、69.3%、85.1%、85.1%。见图1。

图1 各项指标诊断CRP阴性流感的ROC曲线

2.4 甲型流感组、乙型流感组（CRP阳性患者）和健康对照组各项指标比较

甲型流感组和乙型流感组HFC%、Mon_FSC_CenterPos均高于健康对照组（P＜0.01）；甲型流感组HFC%、Mon_FSC_CenterPos低于乙型流感组（P＜0.01）。见表2。

表2 甲型流感组、乙型流感组（CRP阳性患者）与健康对照组Mon_FSC_CenterPos、HFC%比较

表2 甲型流感组、乙型流感组（CRP阳性患者）与健康对照组Mon_FSC_CenterPos、HFC%比较

注：与健康对照组比较，*P＜0.01；与甲型流感组比较，#P＜0.01；空白表示无此项。

组别 例数 Mon_FSC_CenterPos HFC%/%健康对照组 101 923.56±25.03 0.118±0.080甲型流感组 28 975.57±29.72* 0.214±0.140*乙型流感组 23 997.52±41.60* 0.365±0.270*#

2.5 各项指标诊断CRP阳性流感患者的效能

将甲型流感组和乙型流感组中CRP阳性的患者合并为CRP阳性流感组。ROC曲线分析结果显示，WBC计数、HFC%、Mon_FSC_CenterPos诊断CRP阳性流感的AUC诊断分别为0.629、0.763、0.928，最佳临界值分别为7.23×109/L、0.25%、947.99，敏感性分别为49.0%、45.1%、88.2%，特异性分别为81.2%、95.0%、85.1%。见图2。

图2 各项指标诊断CRP阳性流感的ROC曲线

3 讨论

甲型和乙型流感的临床表现通常与普通呼吸道感染相似，且往往伴随细菌感染。通常初诊患者会通过血常规、CRP和流感病毒抗原检测来进行诊断和鉴别诊断。一般CRP阴性且病毒抗原检测阳性可以认为是单纯性病毒感染，伴随CRP升高的病毒感染则可认为是混合性感染。甲型流感、乙型流感患者感染初期血常规检测结果通常表现为WBC计数正常或升高，淋巴细胞百分比正常或降低，但往往伴随细菌感染导致的WBC计数和淋巴细胞百分比等检测结果多变，不能对疾病作出鉴别诊断。COSKUN等[12]发现，甲型流感患者血常规检测结果中MO%显著增加，与健康人群和有流感样症状的患者比较，差异有统计学意义，他们认为单核细胞增多或可作为甲型流感的一个生物学标志物。本研究结果也显示，甲型流感、乙型流感患者MO%高于健康人群（P＜0.01），ROC曲线分析结果也显示，MO%对CRP阴性流感有较好的诊断效能。

本研究结果显示，CRP阴性的单纯性甲型流感、乙型流感患者Mon_FSC_CenterPos、Mon_FSC_Width这2个描述单核细胞形态的参数均高于健康对照者（P＜0.01）。ROC曲线分析结果显示，Mon_FSC_CenterPos诊断CRP阴性流感的AUC最大，诊断效能优于MO%，在特异性相差不多的情况下，Mon_FSC_CenterPos诊断CRP阴性流感AUC最大的敏感性优于MO%。对于CRP阳性流感，Mon_FSC_CenterPos依然表现出良好的诊断效能，AUC与CRP阴性流感相同，敏感性和特异性也一致，说明Mon_FSC_CenterPos对流感的诊断效能理想，且不受细菌感染的影响。本研究还发现，甲型流感组、乙型流感组、健康对照组HFC%差异均有统计学意义（P＜0.01），其诊断效能逊于Mon_FSC_CenterPos，但不受细菌感染影响，也可作为一个参考的指标。

综上所述，甲型流感、乙型流感患者Mon_FSC_CenterPos均会升高，在单纯性病毒感染时诊断效能要优于MO%、NEUT%等传统指标；在伴随细菌感染的混合感染时，在MO%、NEUT%等指标无法鉴别诊断的情况下，Mon_FSC_CenterPos仍表现出较好的诊断效能。Mon_FSC_CenterPos为血常规检测时的仪器检测参数，不用额外的仪器、试剂，可以作为一个鉴别诊断甲型流感、乙型流感成本低、效果良好的生物学指标。