尿I-FABP联合CBG诊断新生儿坏死性小肠结肠炎的价值分析

温晓敏，张爱明，叶明阳，王文翔

(湖北医药学院附属襄阳市第一人民医院 新生儿科，湖北 襄阳441000)

坏死性小肠结肠炎(Neonatal necrotizing enterocolitis，NEC)是新生儿最常见的胃肠道急症，新生儿早产、极低出生时体重导致发生率增加，严重影响新生儿安全[1]。早期新生儿临床特征不明显，导致NEC新生儿漏诊[2]，因此寻找早期诊断NEC的方法迫在眉睫。肠型脂肪酸结合蛋白(Intestinal fatty acid binding protein，I-FABP)正常情况下仅存在于胃肠道粘膜处，当胃肠道受损失经肾脏排出体外，其水平可反映器官情况[3]。研究表明，I-FABP水平升高可增加NEC预后不良的风险[4]，I-FABP对NEC具有一定的诊断价值，但尿液中I-FABP水平研究较少。β-葡萄糖苷酶(Cytosolic β-Glucosidase，CBG)是肠道上皮纤维素酶，若肠道受损，其水平迅速升高影响肠道功能[5]。I-FABP、CBG单独对新生儿NEC的影响均有研究，但尿液中I-FABP联合CBG对新生儿NEC的诊断情况尚不清楚。因此，本研究通过检测I-FABP和CBG在NEC新生儿尿液中的表达情况，探讨二者在NEC中的诊断价值，以期为早期发现NEC做参考，具体结果如下。

1.1 资料与方法

收集2016年1月-2019年2月湖北医药学院附属襄阳市第一人民医院确诊的NEC新生儿82例为研究对象(患病组)，日龄1-28天，平均(13.24±3.46)天；男40例、女42例。同时期健康新生儿85例为对照(健康组)，日龄1-28天，平均(14.17±2.96)天；男42例、女43例。两组在日龄、性别一般资料上比较无统计学差异(P>0.05)，具有可比性。并收集新生儿出生时体重、出生时胎龄一般资料情况。

NEC新生儿均符合《实用新生儿学》(第4版)以及修订的Bell-NEC分期(Ⅰ-Ⅲ期)标准为NEC诊断标准。纳入标准：①新生儿均符合NEC诊断标准；②新生儿0-28日龄；③新生儿家属知情并签署知情同意书。排除标准：①先天性畸形新生儿；②资料不完整新生儿；③肠道畸形新生儿，包括先天性巨结肠、肠旋转不良等造成的肠道畸形；④其他因素造成的肠道损伤新生儿。

本研究经湖北医药学院附属襄阳市第一人民医院伦理学会审核并批准，符合中华伦理学委员会制订的伦理学标准。

Bell-NEC分期标准，见表1。本研究NEC新生儿Ⅰ期39例、Ⅱ期30例、Ⅲ期13例。

表1 Bell-NEC分期标准

1.2 样品收集及后期实验

采集健康新生儿及研究对象入组后24 h内用一次性集尿袋收集尿液。每例取5 ml置于无菌离心管中，室温静置2 h后2 000 rpm离心10 min，取上层清液置于新的EP管中分装保存于-20℃冰箱中备用。

1.3 酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)法检测尿液中I-FABP、CBG水平

-20℃取出部分尿液，置于4℃解冻后严格按照人ELISA I-FABP(货号：SBJ-H0004，南京海克尔生物科技有限公司)、人ELISA CBG(货号：RJ13603，上海仁捷生物科技有限公司)试剂盒操作进行，DNM-9606酶标仪(北京普朗医疗器械公司)上测样品及标准品，在450 nm处测定各孔光密度(optical density，OD)值，以标准品OD值为X轴，浓度为Y轴绘制ELISA标准曲线，以标准曲线方程计算计算样品浓度。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 健康组与患病组一般资料比较

健康组与患病组出生后日龄、性别、出生时体重、胎龄比较差异均无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 患病组与健康组一般资料比较

2.2 健康组与患病组尿液中I-FABP、CBG水平比较

健康组尿液中I-FABP、CBG低于患病组(P<0.05)。见表3。

表3 健康组与患病组尿液中I-FABP、CBG水平比较

2.3 NEC新生儿不同Bell-NEC分期尿液中I-FABP、CBG水平比较

NEC新生儿Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期3组尿液中I-FABP、CBG水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。与NEC新生儿Ⅰ期相比，Ⅱ期、Ⅲ期尿液中I-FABP、CBG水平升高(P<0.05)；与NEC新生儿Ⅱ期相比，Ⅲ期尿液中CBG水平升高(P<0.05)。见表4。

表4 患病组不同Bell-NEC分期尿液中I-FABP、CBG水平比较

2.4 NEC新生儿尿液中I-FABP与CBG关系

Pearson法分析结果显示，NEC新生儿尿液中I-FABP与CBG呈正相关(r=0.400，P<0.05)。见图1。

图1 NEC新生儿尿液中I-FABP与CBG相关性

2.5 尿液中I-FABP、CBG单独诊断预测新生儿NEC效能分析

ROC曲线显示，尿液中I-FABP水平预测NEC发生的ROC曲线下面积为0.767(95% CI:0.694-0.840)，截断值为9.105 ng/mL，其敏感性为59.80%、特异性为89.40%；尿液中CBG水平预测NEC发生的ROC曲线下面积为0.793(95% CI:0.722-0.864)，截断值为140.03 nmol/L，其敏感性为62.20%、特异性为92.90%。见图2。

图2 尿液中I-FABP、CBG单独预测新生儿NEC发生ROC曲线

2.6 尿液中I-FABP联合CBG诊断预测新生儿NEC效能分析

尿液中I-FABP联合CBG预测NEC发生的ROC曲线下面积为0.821(95% CI:0.752-0.889)，其敏感性为59.80%、特异性为100.00%。见图3。

图3 尿液中I-FABP联合CBG预测新生儿NEC发生ROC曲线

3 讨论

NEC病因复杂，早产、肠粘膜缺氧缺血、其他原因引起的肠道损伤等多种危险因素都会影响NEC[6]。X线平片检查和非特异的血清学检查是目前诊断手段，但早期X线平片检查症状不明显，缺乏灵敏度和特异性[7]，早期诊断疾病、判断病情一直是目前棘手问题。本研究中健康组与患病组出生后日龄、性别、出生时体重、胎龄比较差异均无统计学意义，排除标准中排除各种疾病损伤对肠道的影响，实验具有可比性，为研究因子提供依据。

尿液采集不会对新生儿造成痛苦，相较于血液、组织等新生儿家属较易选择[8]。Bell-NEC分期可反映NEC功能状态，同时评估NEC严重程度[9]。I-FABP是肠道柱状上皮细胞分泌的蛋白质，肠道正常时仅存在于肠粘膜组织，具有较好的器官特异性，可作为肠道蛋白标志物用于检测肠道状况；当肠道受损，肠道细胞通透性改变使I-FABP进入血液，持续改变60 min即可在尿液中检测到，灵敏度较高且对热相对稳定，可保持活性[10]。研究表明I-FABP水平可对NEC有一定的诊断价值，当肠道受损时血清中I-FABP水平升高，肠上皮细胞I-FABP透过细胞膜被乳酸摄取经门脉循环、外周循环达肾脏排出体外，其水平反映肠道受损状况，对NEC具有一定诊断价值[11]；CBG作为一种纤维素酶可水解纤维素为葡萄糖，特异性强，主要存在肠系膜处，可将纤维素水解为葡萄糖发挥功效，肠道受挤压或缺氧缺血坏死时水平升高，主要存在于微生物和植物中，水平升高证明肠道出现病理变化，可反映早期肠道损伤情况[12]。缺氧大鼠模型中CBG水平变化可评估大鼠肾损伤情况[13]，但在尿液中尚未发现。本研究发现健康组尿液中I-FABP、CBG低于患病组，可能是由于NEC新生儿肠道受损导致肠道细胞通透性变大，I-FABP、CBG透过细胞膜进入血液，随着血液循环到达肾脏经尿排出，从而导致I-FABP、CBG在NEC新生儿尿液中水平升高；但与疾病严重状态关系尚不明确。不同Bell-NEC分期比较发现，随着Bell-NEC分期的增加尿液中CBG水平升高。可能在一定范围内CBG水平升高降低机体中CBG水平，使机体中CBG发挥作用减弱。I-FABP的变化没有CBG变化明显，在Ⅱ期、Ⅲ期尿液中I-FABP在本研究中差异无统计学意义。可能是随着疾病的严重，尿液中I-FABP水平达到饱和，对疾病的影响严重。

进一步研究发现，NEC新生儿尿液中I-FABP与CBG呈正相关，可能在肠损伤过程中，I-FABP与CBG相互促进进入血液最终经尿液排出体外。尿液中I-FABP、CBG单独诊断NEC均对NEC具有一定的诊断价值，当尿液中I-FABP水平高于9.105 ng/mL或CBG水平高于140.03 nmol/L时，新生儿发生NEC的几率增加。二者联合诊断预测NEC发生可升高ROC曲线下面积，提高特异性，对于NEC预测疾病具有一定的诊断价值。

综上所述，NEC新生儿尿液中I-FABP、CBG均高表达，与疾病严重程度有关，二者呈正相关，联合诊断可在一定程度上预测NEC发生，有望成为判定新生儿患NEC的标志基因。在本研究中首次用尿液作为研究对象，首次检测尿液中CBG的水平变化与疾病的关系，存在一定的创新型。但本研究中只采集1次尿液样本进行研究，且NEC病情是变化的，是本研究的不足之处。