禽流感H5亚型流行病学监测调查

2021-06-20吕艳秋黄东风姚学军康晓杰刘志忠白若雨薛勇王岳伟邱海莲刘鑫袁梦仪北京市昌平区动物疫病预防控制中心

中国畜牧业 2021年3期

关键词：昌平区免疫抗体胶体金

文│吕艳秋黄东风姚学军康晓杰刘志忠白若雨薛勇王岳伟邱海莲刘鑫袁梦仪（北京市昌平区动物疫病预防控制中心）

张震东（北京市昌平区中医院）

陈继锋（北京市昌平区流村镇动物卫生防疫站）

赵志荣（北京市昌平区十三陵镇农业服务中心）

禽流感作为影响禽业发展的主要疫情，在世界范围内时有发生，2020年在国内外均有H5N6亚型和H5N8亚型高致病性禽流感疫情发生的报道，给养殖者造成了较大的经济损失。

为了了解北京市昌平区高致病性禽流感防控措施的效果，笔者随机抽检了一个存栏量40000只蛋鸡的养殖场，该场鸡只均经过重组禽流感病毒（H5＋H7）三价灭活疫苗（细胞源，H5N1 Re-11株＋Re-12株，H7N9H7-Re2株）的免疫。并且免疫在有效期内，抽检30只蛋鸡血样，采用HA-HI试验检测免疫抗体；抽检30只鸡的咽喉和肛门拭子，采用胶体金技术和实时荧光RT-PCR试验检测AIV抗原。通过随机抽检，及时发现疫情隐患，并确保禽群处于有效抗体保护。

一、材料

1.疫苗及检测试剂。

（1）使用疫苗为重组禽流感病毒（H5＋H7）三价灭活疫苗（H5N1 Re-11株＋Re-12株，H7N9 H7-Re2株），生产厂家为哈药集团生物疫苗有限公司。

（2）AIV H5亚型Re-11/ Re-12血凝抑制试验抗原和阳性血清，购自哈尔滨维科生物技术开发公司。

（3）鸡红细胞悬液购自北京实验动物中心，为SPF级公鸡红细胞。

（4）禽流感病毒通用型实时荧光RT-PCR检测试剂盒购自哈尔滨元亨生物药业有限公司。

（5）禽流感H5亚型抗原检测卡（胶体金法）购自郑州中道生物技术有限公司。

以上疫苗和试剂均在有效期内，为合格产品。

2.被检动物。被检动物来自昌平区某养鸡场。

二、方法

1.被检动物。

（1）昌平区某鸡场蛋鸡存栏量40000只，随机抽检临床健康的成年蛋鸡60只。

（2）免疫期。鸡群免疫重组三价灭活疫苗后1～3个月内。

（3）样品数量。鸡血样品30份；咽喉/肛门拭子样品分2组，各30份，即同一只鸡分别采集咽肛拭子各2份。

2.抗体检测。将采集的血样离心，分离血清，血凝抑制（HI）试验法测定抗体效价。具体操作参照GB/T18936—2003进行。禽流感抗体血凝抑制试验（HI）抗体效价≥24判定为合格。禽群免疫抗体合格率≥70%判定为合格。

3.抗原检测。

（1）胶体金法。用棉签拭子取新鲜的蛋鸡排泄物或喉气管分泌物约0.1克或100微升，立即将棉签拭子插入装有样品稀释液的样品管内，充分搅动，直至棉签拭子上的样品全部溶入稀释液，将棉签在管壁上挤干后丢弃，样本液静置备用，用禽流感H5亚型抗原检测卡（胶体金法）检测抗原，具体操作参照禽流感H5亚型抗原检测卡（胶体金法）使用说明书。样品加入加样孔后，与胶体金标记物一起沿层析膜移动，若样本中存在AIV-H5抗原，则与胶体金标记物结合使检测线显示紫红色；若样本中不存在AIV-H5抗原则不产生颜色反应。

（2）实时荧光RT-PCR检测方法。用棉拭子取蛋鸡新鲜呼吸道分泌物或排泄物，置于50%甘油生理盐水中，采用禽流感病毒通用型实时荧光RT-PCR检测方法检测病毒，具体操作参照《禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法》（GB/T 19438.1-2004）。

三、结果

随机抽检昌平区某养鸡场临床健康的成年蛋鸡60只，血液样品30份。用于血凝抑制（HI）试验法测定抗体效价；咽喉/肛门拭子分2组，各30份（即同1只鸡分别采集咽肛拭子各2份）。其中，30份采用禽流感H5亚型抗原检测卡（胶体金法）检测抗原，另30份蛋鸡的咽喉/肛门拭子样品，采样实时荧光RT-PCR检测方法检测病毒。血液样品共计30份，咽肛/拭子样品共计60份，检测结果见表1、表2。

从表1中可以看出，检测免疫后37天的蛋鸡群，随机抽检30份血样， AIV-H5N1 Re-11平均免疫抗体合格率为100%；其中2份样品免疫抗体为5log2，3份样品免疫抗体为6log2，16份样品免疫抗体为7log2，6份样品免疫抗体为8log2，3份样品免疫抗体为9log2。AIV-H5N1 Re-12平均免疫抗体合格率为100%；其中2份样品免疫抗体为5log2，3份样品免疫抗体为6log2，16份样品免疫抗体为7log2，6份样品免疫抗体为8log2，3份样品免疫抗体为9log2。