荧光定量PCR 法在乙型肝炎病毒检测中的应用价值

张会娟（周口永善医院检验科，河南 周口 461300）

乙型肝炎病毒（HBV）简称乙肝病毒，因传染性高，对公共卫生造成严重的影响，长期携带HBV 者因失去治疗信心，使病毒在体内反复复制，产生病变［1］。该病严重威胁患者的身体健康，因具有较高的传染性，给患者及家人带来极大的精神负担［2］。因此，及时寻找和诊断乙肝病毒的检测方法对临床具有重大意义，酶联免疫吸附法测定（ELISA）和荧光定量PCR法是临床上常用的两种检测乙肝病毒的方式［3，4］。 本研究为分析这两种方法在乙型肝炎病毒检测中的应用。 报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取 2017 年 6 月～2019 年 6 月我院收治的180 例乙型肝炎病毒携带者，其中男110 例、女 70 例；年龄 20～56（32.15±5.31）岁。

1.2 方法 所有患者均分别使用荧光定量PCR 法和酶联免疫吸附法检测，所有患者及其家属均知情并自愿签署知情同意书。 （1）试剂和仪器：ABI 7500Fast型荧光定量检测仪从美国ABI 公司购买，华泰和合（北京）商贸有限公司提供的CMax Plus 酶标仪和全自动洗板机，从上海浩源生物公司购买HBV DNA 荧光定量PCR 检测试剂盒，从厦门新创公司购买酶联免疫吸附测定试剂盒。 （2）荧光定量PCR 法：无菌条件下采集患者空腹静脉血5ml，在温度为4℃的冰箱中放置2h 后，挑出S/CO≥15 且HBsAg 筛查为有反应性的血浆，以3 500r/min 离心 10 min 分离血清。 采用ABI 7500Fast 型荧光定量检测仪和HBV DNA荧光定量PCR 检测试剂盒检测乙型肝炎病毒的DNA（HBV-DNA）浓度。 经 A450-630nm 计算光度值，吸光度值判定检测结果。 （3）ELISA：使用 CMax Plus 酶标仪、全自动洗板机及酶联免疫吸附测定试剂盒检测乙型肝炎标志物， 包括乙肝表面抗体（HB-sAb）、乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝 e 抗原（HBeAg）、乙肝 e 抗体（HBeAb）及乙肝核心抗体（HBcAb）。 上述所有操作均严格按照无菌操作和使用说明书执行，结果根据试剂的说明书和试剂盒的结果进行评估。

1.3 临床观察指标 将ELISA 法检测5 项乙型肝炎标志物结果分为“大三阳”组，即 HBeAg（+）、HB-sAg（+）、HBcAb（+）和“小三阳”组，即 HBeAb（+）、HBsAg（+）、HBcAb（+）。 ELISA 法，检测样本吸光度临界值为 1，测定值﹤1 为阴性，测定值﹥1 为阳性。 记录 HBsAb、HBsAg、HBeAg、HBeAb、HBcAb 的阳性和乙型肝炎核算定量DNA 的阳性。

1.4 统计学处理 数据采用SPSS 18.0 统计学软件进行处理。以%和n 表示计数资料，采用χ2检验；以表示计量资料，采用t 检验；以P﹤0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

本组180 例血清标本HBV-M 模式可分为7组，乙型肝炎血清学标志物阳性的患者均有不同程度的病毒DNA 复制；在乙型肝炎血清学标志物阳性的各模式中，组别 1（大三阳）患者 45 例，HBV-DNA 阳性率 97.78%（44/45）高于 2、3、4、5、6、7 组阳性率，差异有统计学意义（P﹤0.05）；组别 2（小三阳）患者 54例，HBV-DNA 阳性率 87.04%（47/54）高于 3、4、5、6、7 组阳性率，差异有统计学意义（P﹤0.05）；组别 1（大三阳）患 HBV-DNA 含量高于 2、3、4、5、6、7 组HBVDNA 含量，差异有统计学意义（P﹤0.05）；其余各组HBV-DNA 含量、HBV-DNA 阳性率相比，差异无统计学意义（P﹥0.05）。 见附表。

3 讨论

附表 荧光定量PCR 法和酶联免疫吸附法检测HBV-DNA 比较［n(%)］

乙型肝炎病毒具有较强的传染性，因起病缓慢、病情迁延不愈、传播途径广等特点，大部分患者早期无明显临床表现，经确诊时已是晚期，失了最佳治疗时间，导致患者需要持续治疗，给其身体带来痛苦，且增加经济负担［5，6］。 因此，早期临床准确诊断、予以治疗措施，能有效防止病情恶化，提高患者生存质量。

ELISA 法是一种免疫测定，对受检物质进行定性或定量分析的一种检测方法［7，8］。 但 ELISA 法检测无法及时、动态表现出HBV 在机体中的复制转录和传染活性。荧光定量PCR 法是在PCR 扩增过程每一个循环产物荧光信号的变化，通过标准曲线对未知模板进行定量分析。 方法能准确确定初始模板拷贝数和宽的动态范围内和较高的灵敏度。 荧光定量PCR法经分子水平直接检测HBV DNA 浓度，能直接体现HBV DNA 的复制情况和传染性，为临床治疗方案制定提供重要依据［9］。 HBsAg 诊断不仅是急性乙型肝炎及健康携带者的诊断指标，也是反映血清传染性的指标。大三阳即 HBeAg、HBsAg、HBcAb 为阳性，表明患者体内 HBV DNA 复制率高且传染性强［10］。 本研究结果显示，大三阳（组别1）患者HBV DNA 阳性率高于其他组患者，患者HBV-DNA 含量高于其他组别患者，说明ELISA 法和荧光定量PCR 法具有良好的一致性，均可准确判断患者是否处于HBV 感染期。ELISA 法主要以定性方式发出报告，荧光定量PCR 法测定HBV DNA 是以定量形式发报告，并结合乙肝血清免疫学检查，能准确、直接的判断患者体内HBV 的复制水平及真实含量。小三阳（组别2）HBV DNA 含量小于大三阳（组别1），在小三阳患者中，HBeAg 转阴性，没有传染性，HBeAb 转阳性，具有传染性，说明不能单靠血清学检测来判断结果，还需通过定量检测HBV DNA。

综上所述，荧光定量PCR 法能准确、真实、可靠、定量地检测乙型肝炎病毒，对早期诊治乙型肝炎、判断传染性和监测预后具有重要意义。