规模化牛场牛附红细胞体病治疗观察

武玲玲

（辽宁省北票市黑城子动物卫生监督所 122100）

附红细胞体感染早在20 世纪20 年代就被人们发现，1928年Schilling 和Dingcr 同时在啮齿动物体内发现了类球状血虫体。我国1981 年首先在家兔中发现附红细胞体。以后相继在猪、牛、绵羊、山羊、马、兔、犬、猫、兔、猴、骆驼等哺乳物鸟类及人体中证实感染附红细胞体。迄今为止，已发现并命名的附红细胞体有数十种，本病已广泛分布于世界许多国家和地区。该病严重威胁着畜牧业的发展和人类健康，并呈反范围扩大趋势。治疗牛附红细胞体病的药物种类繁多，但目前该试验养牛场还未有相关调查报告。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试验动物

患病牛50 头。

1.1.2 试验试剂

瑞氏染色液、生理盐水、磺胺间甲嘧啶钠、盐酸多西环素、氟苯尼考注射液、血虫净、咪唑苯脲、完全培养基(RPMI-1640 与犊牛血清按8:2 的比例混合而成)、需要在4℃冰箱内保存的90%以上感染的抗凝血。

1.2.2.2 药物浓度的选择

1.1.3 仪器设备

注射器、载玻片、盖玻片、显微镜、微量移液器等。

1.2 试验方法

1.2.1 制作涂片，染色镜检

在养牛场采集患病牛耳静脉血液，在实验室制成涂片，室温条件下自然干燥，用甲醇固定3～5min 后滴加瑞氏染色液，并覆盖涂片上1～3min，然后在滴加与染色液同等计量的磷酸缓冲液(pH=6.4)，轻轻晃动使其与染色液充分混合，5min 左右水洗，干燥后在油镜下观察。

1.2.2 药敏试验

1.2.2.1 体外培养方法

按照7:1 的比例混合完全培养基与抗凝血，装进离心管（50ml）中，再用高压灭菌的青霉素小瓶进行分装，按照试验要求浓度添加药物，使混合液体积达到1ml，将混合液放置在37℃的普通培养箱内进行培养。

用生理盐水对药物进行稀释（剂量遵照使用说明），按照等差的方法设置4 组不同的浓度药物(每组浓度均设对照组)，每组液体混合物的总体积均要达到lml，并使药物浓度分别达到所需浓度。即盐酸多西环素：8、6、4、2μg/ml；氟苯尼考：4、3、2、1μg/ml；血虫净：12、9、6、3μg/ml；咪唑苯脲：4、3、2、1μg/ml；磺胺间甲嘧啶钠：4、3、2、1μg/ml。每6h 观察一次涂片，每组需要观察5 次。

1.2.2.3 判定红细胞的感染率

每次分别在4 组液体混合物取5μl 进行压片检查，利用高倍显微镜，每个压片观察5 个视野，每个视野观察20 个红细胞，最后取平均值，作为红细胞感染率的样本。

1.2.3 临床疗效观察

选择具有明显患有附红细胞体病的病牛50 头，并将50 头病牛随机分5 个组。对前4 组注射敏感药物，最后1 组作为空白对照。检测期间，各组采取相同的饲养管理方式，最后判定结果。

2 结果

2.1 涂片染色镜检

血液涂片经瑞氏染色后，感染附红细胞体的牛红细胞瑞氏染色后红细胞失去立体形，形态各异、大小不一，红细胞边缘不整齐，呈锯轮状、星芒状。在红细胞表面有圆形、月牙形、短杆形虫体，红细胞呈淡紫红色，虫体可染成淡蓝色，且发出亮亮的光彩。一般每个红细胞附有虫体3～4 个，多者达10～14个。用显微镜观察到红细胞边缘有锯齿状或星芒状时，可确诊病牛为阳性。

2.2 药敏试验

2.2.1 盐酸多西环素药敏试验结果

该盐酸多西环素治疗牛附红细胞体病的使用说明剂量为3～5mg/kg。根据以上分组试验结果表明，当盐酸多西环培养液的浓度为6μg/ml (实际治疗剂量为6mg/kg) 时，对牛附红细胞体的抑制和杀死作用最强大。

2.2.2 氟苯尼考药敏试验结果

氟苯尼考治疗牛附红细胞体病的使用说明剂量为0.2ml/kg，根据以上试验发现，该药物在体外对牛附红细胞体的抑制和杀死作用不强，牛附红细胞体对氟苯尼考不敏感。

2.2.3 血虫净药敏试验结果

血虫净治疗牛附红细胞体病的使用说明用量为3～5mg/kg，根据以上试验发现，该药物6μg/ml 和12μg/ml 在体外对牛附红细胞体抑制作用和杀死作用差别不大，且对牛附红细胞体的抑制和杀死作用效果最强。

2.2.4 咪唑苯脲药敏试验结果

咪唑苯脲治疗牛附红细胞体病的使用说明剂量为1～2mg/kg，根据以上试验发现，体外对牛附红细胞体抑制作用和杀死作用差别不大，牛附红细胞体均能被杀死。

2.2.5 磺胺间甲嘧啶钠治疗结果

磺胺间甲嘧啶钠治疗牛附红细胞体病的使用说明剂量为0.2ml/kg，根据以上试验发现，体外对牛附红细胞体抑制和杀死作用差别不大，牛附红细胞体可以被杀死。

2.3 临床疗效试验

选择患有附红细胞体病的病牛50 头，10 头一组，分成5组。对前4 组注射敏感药物，第5 组作为空白对照。对1、2、3、4 组持续给药5h，用药剂量分别为每天1 次肌肉注射盐酸多西环素，使用剂量6mg/kg；每天1 次肌肉注射血虫净，使用剂量3mg/kg；每天1 次肌肉注射咪唑苯脲，使用剂量lmg/kg；每天2 次静脉注射磺胺间甲嘧啶钠，使用剂量0.2ml/kg。对试验牛进行为期10d 的临床观察，对试验动物采集血液做血涂片，记录试验结果。

2.3.1 判定标准

对血液中是否有附红细胞体进行检测，同时结合临床症状检查。采取治疗后的牛耳静脉血液进行涂片染色镜检，观察红细胞形态、是否有附红细胞体存在。如观察到红细胞为球形、盘形或环形，并且红细胞表面及边缘没有圆形、月牙形或短杆形的折光性虫体，则表示附红细胞体不存在。临床症状检查，体温恢复到37.5～39.5℃，无贫血和黄疸症状，可视黏膜、精神状况、饮食、排粪正常者为治愈。

2.3.2 药物的治疗效果

由附表可知，治疗效果最好的药物是盐酸多西环素，其临床治愈率为90%，其次是血虫净，临床治愈率为80%，咪唑苯脲的临床治愈率为70%，磺胺间甲嘧啶钠的临床治愈率为50%。

附表 药物的治疗情况

2.4 附红细胞体镜检的讨论

使用涂片染色镜检可提高检出率，在血浆及红细胞上观察到不同形态的附红细胞体为阳性。

2.5 药敏试验的讨论

培养条件完全相同的情况下，不同药物治疗该病时，所使用的接近浓度(mg/kg) 都对牛附红细胞体有抑制作用，但其具有不同的作用效果。所以，在用药治疗牛附红细胞体时，应根据药敏试验结果选择敏感药物，按疗程投药，才能收到较好的治疗效果。

2.6 临床疗效试验讨论

治疗的4 种药物中治疗效果最好的是盐酸多西环素，其次是血虫净和咪唑苯脲治疗效果，最后是磺胺间甲嘧啶钠治疗效果。盐酸多西环素注射液驱杀牛附红细胞体作用明显好于其他3 种药物，治疗率为90%。在生产实践中，怀孕母牛不能用此药。血虫净在治疗时有少数中毒症状，应用阿托品、安乃近等缓解；治疗妊娠母牛时个别会引起流产。咪唑苯脲可造成少数牛出现过敏现象，需要用地塞米松进行抢救，大多数都能抢救过来，使用咪唑苯脲治疗牛附红细胞体病时应多注意过敏反应。没有太大治疗效果的是磺胺间甲嘧啶钠。在牛附红细胞体病治疗的过程中，除药物治疗外，还需对动物进行补血，增加红细胞生长，提高动物免疫力，有效防止继发感染等相应措施。