苏合香质量标准的研究

孙 健诸艳蓉胡 青毛秀红季 申

（上海市食品药品检验研究院，国家药品监督管理局中药质量控制重点实验室，上海201203）

苏合香为金缕梅科植物苏合香树Liquidambar orientalisMill.树干渗出的香树脂经加工精制而成，具开窍、辟秽、止痛之功效，用于治疗中风痰阙、猝然昏倒、胸痹心痛、胸腹冷痛、惊痫［1］，大多用于配伍开窍止痛之中成药，如苏合香丸、冠心苏合丸、麝香保心丸等，该植物主要分布于小亚细亚南部，如土耳其、叙利亚北部等地区［2］。另外，《美国药典》 将同属植物北美枫香树Liquidambar styacifluaL.也作为苏合香的基原。

苏合香质量标准现收载于2020 年版《中国药典》 一部和进口药材质量标准，主要包括性状、化学鉴别、薄层鉴别、酸值检查、皂化值检查、肉桂酸含量测定，但其专属性不强，含量限度过低，无法对伪品进行有效区分。因此，本实验对苏合香物质基础进行分析，从薄层鉴别、酸值皂化值检查、特征图谱、特征成分含量测定等方面全面系统地研究，以期为该药材质量标准制定提供依据。

1 材料

1.1 仪器 Agilent 5975B 型气相质谱联用仪、Agilent 6890 型气相色谱仪（美国Agilent 公司）；XSE205DU 型电子分析天平（十万分之一，美国Mettler⁃Toledo公司）；CP224S型电子分析天平（万分之一，德国Sartorius 公司）。

1.2 试剂与药物 苏合香对照药材（中国食品药品检定研究院，批号120931⁃201804）。肉桂酸肉桂酯对照品（北京百灵威科技有限公司，批号LF60Q43）；肉桂酸⁃3⁃苯丙酯对照品（天津阿尔塔科技有限公司，批号ALT077011⁃4，纯度97.2%）。无水乙醇、石油醚、正己烷、甲酸乙酯、甲酸均为分析纯（国药集团化学试剂有限公司）。苏合香18批，均由国内企业提供，具体信息见表1；伪品4批，均购自药材市场。

表1 样品信息Tab.1 Information of samples

2 方法与结果

2.1 物质基础研究

2.1.1 分析条件 HP⁃5MS 毛细管柱（柱长30 m，内径0.25 mm，膜厚度0.25 μm）；载气氮气，体积流量0.7 mL／min；程序升温，初始60 ℃保持5 min，4 ℃／min 升至280 ℃，保持10 min；进样量1 μL；EI 离子源（70 eV）；接口温度250 ℃；离子源温度230 ℃；扫描范围m／z35～500。

2.1.2 供试品溶液制备 取本品0.5 g，置于具塞离心管中，精密加入10 mL 无水乙醇，振摇10 min溶解，即得。

2.1.3 结果分析 通过检索NIST 数据库，对GC／MS 总离子流色谱图（图1）中的特征峰进行化合物鉴定，再以对照品进行比对，结果见表2。由此可知，2 个产地药材成分组成基本一致，均有18个化合物，其中12 个与对照品比对，发现含量最高者为肉桂酸肉桂酯、肉桂酸⁃3⁃苯丙酯，与文献［3⁃15］ 报道一致。

图1 苏合香GC／MS 总离子流色谱图Fig.1 GC／MS total ion current chromatogram of Styrax

表2 苏合香成分鉴定结果Tab.2 Results of component identification of Styrax

2.2 TLC 定性鉴别 取本品约0.1 g，精密称定，置于具塞离心管中，精密加入10 mL 无水乙醇，振摇10 min 溶解，作为供试品溶液；取对照药材约0.1 g，同法制成对照药材溶液；取肉桂酸肉桂酯对照品，加无水乙醇制成每1 mL 含3 mg 该成分的对照品溶液。按照2020 年版《中国药典》 四部通则0502，吸取上述3 种溶液各5 μL，点于同一硅胶G 薄层板上，以石油醚（30～60 ℃）⁃正己烷⁃甲酸乙酯⁃甲酸（10 ∶30 ∶15 ∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10% 硫酸乙醇溶液，在105 ℃下加热至斑点显色清晰，并在365 nm 紫外光灯下检视，结果见图2。由此可知，供试品色谱中在对照药材、对照品色谱相应位置上呈现相同颜色的荧光斑点。

图2 苏合香TLC 色谱图Fig.2 TLC chromatograms of Styrax

2.3 酸值、皂化值 按照2020 年版《中国药典》四部通则0713 脂肪和脂肪油测定法项下的酸值测定法和皂化值测定法进行测定，结果见表3。

表3 各样品酸值、皂化值测定结果Tab.3 Results of acid value and saponification value determination of various samples

2.4 特征图谱建立

2.4.1 分析条件 HP⁃5 毛细管柱（柱长30 m，内径0.25 mm，膜厚度0.25 μm）；程序升温，初始70 ℃，5 ℃／min 升至125 ℃，保持10 min，10 ℃／min升至270 ℃，20 ℃／min 升至320 ℃，保持3 min；进样口温度300 ℃；检测器温度350 ℃；分流进样，分流比10 ∶1；进样量1 μL。

2.4.2 参照物溶液制备 取对照药材约0.1 g，精密称定，置于具塞离心管中，精密加入10 mL 无水乙醇，振摇10 min 溶解，作为对照药材参照物溶液。精密称取肉桂酸肉桂酯、肉桂酸⁃3⁃苯丙酯对照品适量，无水乙醇制成每1 mL 分别含两者3、1.5 mg 的溶液，作为对照品参照物溶液。

2.4.3 供试品溶液制备 取本品约0.1 g，精密称定，置于具塞离心管中，精密加入10 mL 无水乙醇，振摇10 min 溶解，即得。

2.4.4 耐用性试验 考察3 种5%苯基甲基聚硅氧烷气相色谱柱（柱长30 m，内径0.25 mm，膜厚度0.25 μm），即Agilent HP⁃5MS、Agilent DB⁃5MS、Thermo TG⁃5MS。结果，供试品色谱均可获得理想的分离度和峰形，表明该方法耐用性良好。

2.4.5 重复性试验 取本品（批号IMF⁃010166）6 份，按“2.4.3”项下方法制备供试品溶液，在“2.4.1”项色谱条件下进样测定。结果，供试品特征图谱中有8 个特征峰，均与对照药材参照物色谱峰中的相对应，其中峰7、8 均与后者保留时间一致，表明该方法重复性良好。

2.4.6 稳定性试验 取供试品溶液，于0、8、22、30 h 在“2.4.1”项色谱条件下进样测定。结果，供试品特征图谱中有8 个特征峰，均与对照药材参照物色谱峰中的相对应，其中峰7、8 均与后者保留时间相一致，表明溶液在30 h 内稳定性良好。另外，肉桂酸肉桂酯的降解产物肉桂酸不影响石竹烯判定。

2.4.7 测定结果 选取对照药材参照物色谱图（图3）中8 个峰面积相对较大的色谱峰作为特征峰，发现供试品特征图谱（图4）中有相应的8 个特征峰，其中峰7、8 与其保留时间一致。

图4 18 批样品特征图谱Fig.4 Specific chromatograms of eighteen batches of samples

图3 对照品参照图谱Fig.3 Specific chromatogram of reference substances

2.5 肉桂酸⁃3⁃苯丙酯含量测定

2.5.1 分析条件 同“2.4.1”项，色谱图与图4一致。

2.5.2 对照品溶液制备 精密称取肉桂酸⁃3⁃苯丙酯对照品适量，加无水乙醇制成每1 mL 含1.5 mg该成分的溶液，即得。

2.5.3 供试品溶液制备 按“2.4.3”项下方法制备，即得。

2.5.4 线性关系考察 精密称取肉桂酸⁃3⁃苯丙酯对照品适量，加无水乙醇分别制成每1 mL 含0.4、0.8、2、4、10 mg 该成分的溶液，各精密吸取1 μL，在“2.5.1”项色谱条件下进样测定。以肉桂酸⁃3⁃苯丙酯质量浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）进行回归，得方程为Y＝739.375 82X－17.431 80（r＝0.999 95），在0.4～10 mg／mL 范围内呈良好的线性关系。

2.5.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液（1.5 mg／mL）1 μL，在“2.5.1”项色谱条件下进样测定6 次，测得肉桂酸⁃3⁃苯丙酯峰面积RSD为0.2%，表明仪器精密度良好。

2.5.6 稳定性试验 取同一份供试品溶液（批号IMF⁃010166），于0、8、22、30 h 在“2.5.1”项色谱条件下进样测定，测得肉桂酸⁃3⁃苯丙酯峰面积RSD 为1.3%，表明溶液在30 h 内稳定性良好。

2.5.7 重复性试验 取同一批样品（批号IMF⁃010166），按“2.5.3”项下方法平行制备6 份供试品溶液，在“2.5.1”项色谱条件下进样测定，测得肉桂酸⁃3⁃苯丙酯含量RSD 为0.5%，表明该方法重复性良好。

2.5.8 加样回收率试验 取肉桂酸⁃3⁃苯丙酯含量已知的样品（批号IMF⁃010166，为简便计算，使用未折算对照品纯度的18.2%）约0.05 g，共9份，精密称定，置于具塞离心管中，每3 份为1组，分别按80%、100%、120%水平精密加入对照品，再精密加入10 mL 无水乙醇，振摇10 min 溶解，在“2.5.1”项色谱条件下进样测定，计算回收率，结果见表4。

表4 肉桂酸⁃3⁃苯丙酯加样回收率试验结果（n＝9）Tab.4 Results of recovery tests for 3⁃phenylpropyl cinnamate（n＝9）

2.5.9 样品含量测定 取 18 批样品，按“2.5.3”项下方法制备供试品溶液，在“2.5.1”项色谱条件下进样测定，计算含量，结果见表5。

表5 肉桂酸⁃3⁃苯丙酯、总肉桂酸含量测定结果Tab.5 Results of content determination of 3⁃phenylpropyl cinnamate and total cinnamic acid

2.6 总肉桂酸含量测定 按2020 年版《中国药典》 一部苏合香含量测定项下方法，对18 批样品碱水解后的肉桂酸总量进行测定，结果见表5。

3 讨论

3.1 物质基础研究 苏合香原植物产于国外，基原鉴定困难较大，本实验收集到2 个产地药材，并与对照药材进行成分比较，发现两者基本一致，表明它们为正品。另外，2 个产地苏合香成分组成基本一致，仅含量较低的桂皮醛、苯乙烯、蒎烯等有所不同，其中产地为洪都拉斯者可能是北美枫香树所产。

再对伪品的化学成分进行鉴定，发现可分为4类，包括（1）主要含苯甲酸苄酯、肉桂酸苄酯；（2）主要含苯甲酸、桂皮醛、肉桂酸；（3）主要含肉桂酸甲酯、肉桂酸⁃3⁃苯丙酯、肉桂酸肉桂酯，但含量较低；（4）主要含十八烯酸乙酯等脂肪酸酯。但按现行质量标准进行检验时发现，上述成分均符合规定，即无法有效区分苏合香真伪。

3.2 TLC 定性鉴别 以苏合香特征成分为指标考察TLC 定性鉴别方法，发现肉桂酸⁃3⁃苯丙酯无明显斑点，故选择对照药材、肉桂酸肉桂酯进行分析。按“2.2”项下方法检验，发现“3.1”项下4类伪品均不符合规定，表明该方法可有效区分苏合香真伪。

3.3 酸值检查 18 批样品酸值在52～55 范围内，而现行质量标准规定为52～76，即它们均接近于低限。因此，建议参照《美国药典》 标准，适当放宽苏合香酸值限度为50～76。

3.4 特征图谱建立 选择苏合香中峰面积较大的共有成分作为特征图谱检测指标，最终确定为苯乙烯、4⁃乙基酚、苯丙醇、肉桂醇、石竹烯、肉桂酸苄酯、肉桂酸⁃3⁃苯丙酯、肉桂酸肉桂酯，按面积归一化法计算，其总占比达80%以上，其中2 种主要成分占70% 左右，能代表本品大多数化合物。结果，4 种伪品均不符合规定，表明该方法可有效区分苏合香真伪。

3.5 含量测定 本实验对苏合香含量最高、次高的成分肉桂酸肉桂酯、肉桂酸⁃3⁃苯丙酯定量测定方法进行了研究，发现前者在乙醇、乙醚、乙酸乙酯等溶剂中极不稳定，而以环己烷为溶剂时提取效率较差，故采用GC 法测定后者含量，规定按含量平均值的80%拟定限度时，本品中该成分质量分数不得低于13.5%。结果，18 批样品均符合上述限度，而4 批伪品均远低于限度。虽然苏合香现行质量标准中的总肉桂酸含量测定方法可代表肉桂酸酯类成分总量，但建议大幅提高其含量限度为不得低于23.0%。

4 结论

苏合香主要化学成分为以肉桂酸肉桂酯、肉桂酸⁃3⁃苯丙酯为代表的肉桂酸酯类，本实验针对性地对该药材TLC 定性鉴别、酸值皂化值检查、特征图谱、含量测定方法进行研究，建立了全面、专属性强的质量控制方法，可有效区分其真伪。