分析尖锐湿疣病灶内TLR9 表达水平与免疫应答和细胞凋亡的关系

林文生 黄芳

CA 是由人乳头瘤病毒(HPV)感染所引起的一种性传播疾病,有研究表明HPV 感染会造成免疫应答异常,导致免疫系统不能及时清除病原体［1］。持续性感染会造成细胞凋亡障碍,因细胞增生而出现菜花样或乳头样赘生物。TLR9 作为Toll 样受体(TLRs)的物质之一,参与HPV 的识别,因此探讨TLR9 与免疫应答、细胞凋亡之间的关系,有利于掌握CA 发展过程中的特征［2］。本研究回顾性分析本院CA 患者的病历资料,总结如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取本院2018 年9 月～2020 年9 月收治的61 例CA 患者作为观察组,其中,初发患者34 例(观察组A),年龄27～44 岁,平均年龄(31.26±4.28)岁；复发患者27 例(观察组B),年龄28～45 岁,平均年龄(32.91±4.06)岁；另选取同期行包皮环切术的非CA 患者42 例作为对照组,年龄27～44 岁,平均年龄(31.27±4.29)岁。三组患者的一般资料比较,差异无统计学意义(P＞0.05),具有可比性。

1.2纳入及排除标准

1.2.1纳入标准 观察组患者符合卫健委疾病控制司制订的CA 诊断标准。

1.2.2排除标准 ①合并恶性肿瘤、乙型肝炎等疾病；②合并人类免疫缺陷病毒(HIV)感染；③合并自身免疫疾病和(或)使用免疫抑制剂。

1.3方法 取观察组病灶及对照组包皮组织,固定后制为标本。采用RNA 提取试剂盒收集标本中RNA；采用cDNA、去离子试剂、反向、正向引物溶液、UltraSYBR Mixture 试剂。试剂混合后经聚合酶链式反应(PCR)仪器处理,检测基因表达。

1.4观察指标 对比三组TLR9 的mRNA 表达水平、免疫应答情况、细胞凋亡情况,分析CA 病灶内TLR9的mRNA 表达水平与免疫应答和细胞凋亡的相关性。

1.5统计学方法 采用SPSS17.0 统计学软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差()表示,采用t 检验。相关性检验采用Spearman 相关分析。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1三组TLR9 的mRNA 表达水平对比 观察组A患者TLR9 的mRNA 水平高于观察组B 及对照组,观察组B 患者TLR9 的mRNA 水平高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 三组TLR9 的mRNA 表达水平对比()

表1 三组TLR9 的mRNA 表达水平对比()

注：与对照组对比,aP＜0.05；与观察组B 对比,bP＜0.05

2.2三组免疫应答情况对比 观察组A 的IFN-γ、IL-17 水平高于观察组B 及对照组,观察组B 的IFN-γ、IL-17 水平高于对照组；观察组A 的IL-4、IL-10 水平低于观察组B 及对照组,观察组B 的IL-4、IL-10 水平低于对照组；差异有统计学意义(P＜0.05)。见表2。

表2 三组IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-17 水平对比()

表2 三组IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-17 水平对比()

注：与对照组对比,aP＜0.05；与观察组B 对比,bP＜0.05

2.3三组细胞凋亡情况对比 观察组B 的PCNA、Survivin 水平高于观察组A 及对照组,观察组A 的PCNA、Survivin 水平高于对照组；观察组B 的FasL、Fas 水平低于观察组A 及对照组,观察组A 的FasL、Fas 水平低于对照组；差异有统计学意义(P＜0.05)。见表3。

表3 三组细胞凋亡情况对比()

表3 三组细胞凋亡情况对比()

注：与对照组对比,aP＜0.05；与观察组A 对比,bP＜0.05

2.4CA 病灶内TLR9 的mRNA 表达水平与免疫应答和细胞凋亡的相关性分析 CA 病灶内TLR9 的mRNA表达与IFN-γ、IL-17、FasL、Fas 的表达呈正相关(P＜0.05),与IL-4、IL-10、PCNA、Survivin 的表达呈负相关(P＜0.05)。见表4。

表4 CA 病灶内TLR9 的mRNA 表达水平与免疫应答和细胞凋亡的相关性分析

3 讨论

HPV 感染后如机体免疫应答及时有利于快速清除病毒,而免疫应答紊乱则不利于病毒的清除,同时还会增加CA 复发的风险［3］。因此免疫应答与CA 转归密切相关,TLR9 能够识别HPV,下调免疫应答,促进病毒的清除［4］。本研究中,观察组A 患者TLR9 的mRNA 水平高于观察组B 及对照组,观察组B 患者TLR9 的mRNA 水平高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)。这一结果提示CA 的复发可能与TLR9 表达下降影响对HPV 的识别以及对免疫应答的调节有关。

在免疫应答调节中T 淋巴细胞发挥了重要作用,Th1、Th2 等作为CD4+T 淋巴细胞亚群,参与免疫应答调节［5］。IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-17 为上述亚群所分泌的因子,分析因子水平能够了解CA 患者免疫应答情况［6,7］。本研究中,观察组A 的IFN-γ、IL-17 水平高于观察组B 及对照组,观察组B 的IFN-γ、IL-17水平高于对照组；观察组A 的IL-4、IL-10 水平低于观察组B 及对照组,观察组B 的IL-4、IL-10 水平低于对照组；差异有统计学意义(P＜0.05)。IFN-γ、IL-17 为促炎因子,IL-4 为抑炎因子,IL-10 为免疫抑制细胞因子,患者 Th1/ Th2 以及 Th17/Treg 比值改变,Th1 数量上升引起IFN-γ 表达提高,Th17 数量上升引起IL-17 表达提高进而诱发介导促炎效应加速病毒的清除［8］。而CA 复发患者因Th1/ Th2 以及 Th17/Treg比值相比初发患者更低,为此不利于病毒的清除［9］。经过研究还了解到,观察组B 的PCNA、Survivin 水平高于观察组A 及对照组,观察组A 的PCNA、Survivin水平高于对照组；观察组B 的FasL、Fas 水平低于观察组A 及对照组,观察组A 的FasL、Fas 水平低于对照组；差异有统计学意义(P＜0.05)。这一结果说明CA病灶中存在细胞凋亡异常表现,CA 复发患者抗凋亡基因(BPCNA、Survivin)水平最高,抑制凋亡基因(FasL、Fas)水平最低,表示CA 复发患者的细胞增殖更明显,进而疾病复发风险更高。CA 病灶内TLR9 的mRNA表达与IFN-γ、IL-17、FasL、Fas 的表达呈正相关(P＜0.05),与IL-4、IL-10、PCNA、Survivin 的表达呈负相关(P＜0.05)。这一结果也验证了TLR9 表达异常将对免疫应答、细胞凋亡有影响,TLR9 降低将导致下游免疫应答的启动受到干扰［10］。免疫系统清除HPV 能力不足,细胞凋亡受到抑制,增加CA 复发风险,细胞异常增殖最终导致菜花样增生或乳头样增生［11］。

总之,在CA 发展过程中如果患者免疫应答发生紊乱,细胞凋亡就会受到抑制,进而促进病情发展或引起复发。