亚麻叶白千层化学成分研究

张 莎，董春茅，徐杨蕊，陈德坤，周澄杰，康峰华，徐康平，邹振兴

中南大学湘雅药学院，湖南 长沙 410013

亚麻叶白千层Melaleuca linariifoliaCT Musson隶属于桃金娘科（Myrtaceae）白千层属MelaleucaL.，该属植物全球约有290 种，主要分布在澳大利亚和东南亚。白千层属植物被广泛用作民间药物，主要用于感冒、流感以及痛风等疾病的治疗[1-2]，在第二次世界大战中被澳大利亚军队用作急救中的驱虫剂和抗菌剂[3-4]。因其观赏和药用价值也逐渐引入我国广东、广西、云南等地。国内外研究表明，白千层属植物除了富含精油外，还具有三萜类、黄酮类、木脂素类、糖苷类等[5]。目前对该属植物化学成分研究最多的是互叶白千层[6-7]，而对于亚麻叶白千层植物的研究仅停留在其精油成分及其抗菌活性成分上[8-10]，对其他活性化学成分研究未见相关报道。前期活性筛选结果发现，亚麻叶白千层醋酸乙酯萃取部位对人类多种肿瘤细胞具有较好的细胞增殖抑制作用，半数抑制浓度（IC50）在14～37 μg/mL。为了进一步挖掘亚麻叶白千层中的天然活性小分子化合物。本课题组选取该部位进行系统的化学成分研究，并从中分离得到15 个化合物，分别鉴定为3-O-乙酰熊果酸（3-O-acetyl ursolic acid，1）、3β-acetoxy-11-ursen-13α,30-olide（2）、betulinal（3）、diospyrolide（4）、3β-O-(E)-cumaroyl-alphitolinsaeure（5）、3′,4′-二羟基肉桂酸白桦脂酸酯（pyracrenic acid，6）、熊果醇（uvaol，7）、白桦脂醇（betulin，8）、豆甾-4-烯-3-酮（stigmast-4-ene-3-one，9）、5,7,4′-三羟基黄酮 3-O-α-L-毗喃鼠李糖苷（5,7,4′- trihydroxyl-flavone 3-O-α-L-rhamnopyranoside，10）、山柰酚-3-O-(6′′-没食子酰基)-β-D-葡萄糖苷[kaempferol 3-O-(6′′-galloyl)-β-D-glucoside，11]、α-生育酚（α-tocopherol，12）、methoxytocopherol（13）、α-tocopherolquinone（14）、植醇（phytol，15），结构见图1。以上所有化合物均为首次从该植物中分离得到。采用CCK8 法对化合物1～6 进行了体外细胞毒活性评价，结果显示化合物1、3、5、6 对6种人类肿瘤细胞（人肺腺癌NCI-H441 细胞、人大细胞肺癌NCI-H460 细胞、人肺癌A549 细胞、卵巢腺癌SKOV3 细胞、人宫颈癌HeLa 细胞和人肾透明癌细胞caki-1 细胞）表现出一定的增殖抑制活性。

图1 化合物1～15 的结构Fig.1 Structures of compounds 1—15

1 仪器与材料

Bruker AV-400/AV-500/AV-600 核磁共振仪（美国布鲁克公司）；Agilent 1290 UPLC-6545 accurate mass Q-TOF 色谱-质谱联用仪（美国Agilent 科技公司）；Agilent Zorbax Eclipse Plus C18（100 mm×3.0 mm，1.8 μm）色谱柱；MassHunter 质谱工作站（美国Agilent 科技公司）；Büchi-540 熔点测定仪（瑞士Büchi 公司）；Agilent 1260 分析液相色谱仪（DAD 检测器）、Agilent 1200 制备液相色谱仪（美国安捷伦公司）；YMC Pack ODS-A 分析型色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；YMC Pack ODS-A 制备型色谱柱（250 mm×10 mm，10 μm）；硅胶（60～100、200～300目，青岛海洋化工厂）；C18反向硅胶（40～75 μm，富士，日本Kasugai)；Sephadex LH-20（德国Healthcare Uppsala Swedeb）；所有溶剂均为分析纯。

NCI-H441、NCI-H460、A549、SKOV3、HeLa、caki-1 细胞均购自中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心。

亚麻叶白千层于2018年4月采集于广州中国科学院华南植物园，由中国科学院华南植物园谭海波副研究员鉴定为桃金娘科植物亚麻叶白千层M.linariifoliaCT Musson。目前该植物干燥枝、叶样品（20180411）保存于中南大学湘雅药学院。

2 提取与分离

亚麻叶白千层干燥枝、叶10 kg，粉粹，用95%乙醇冷浸提取，减压浓缩至无醇味，得总浸膏，浸膏进一步用水分散，依次用石油醚、醋酸乙酯各萃取3 次，减压浓缩后分别得石油醚萃取部位（160 g）和醋酸乙酯萃取部位（280 g）。

选取醋酸乙酯萃取部位，用石油醚-醋酸乙酯-甲醇（100∶0∶0～0∶0∶100）体系经硅胶柱色谱得10 个流分（Fr.1～10）。Fr.4（23.2 g）经ODS柱色谱分离，用甲醇-水（50∶50～100∶0）梯度洗脱得7 个流分（Fr.4-1～4-7）。Fr.4-4（6.5 g）经硅胶柱色谱，用石油醚-醋酸乙酯（20∶1～0∶100）梯度洗脱得6 个流分（Fr.4-4-1～4-4-6）。Fr.4-4-3（1.1 g）经Sephadex LH-20，用二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脱得3 个流分（Fr.4-4-3-1～4-4-3-3）。Fr.4-4-3-1（0.36 g）通过Prep-HPLC（90%～95%乙腈，0～5 min，95%乙腈，5～30 min，3 mL/min）得化合物1（4.8 mg，tR＝18 min）、3（3.8 mg，tR＝24 min）和4（2.6 mg，tR＝26 min）。Fr.4-4-3-2（0.13 g）经Prep-HPLC（90%～95%乙腈，0～5 min，95%乙腈，5～30 min，3 mL/min）得化合物7（8.9 mg，tR＝23 min）。Fr.4-5（3.8 g）经硅胶柱色谱，采用石油醚-醋酸乙酯（20∶1～0∶100）梯度洗脱得5 个流分（Fr.4-5-1～4-5-5）。Fr.4-5-3（1.4 g）再经硅胶柱色谱，采用石油醚-二氯甲烷-甲醇（10∶1∶0～0∶0∶100）梯度洗脱得6 个流分（Fr.4-5-3-1～4-5-3-6）。Fr.4-5-3-1（0.21 g）经Prep-HPLC（75%～95%乙腈，0～20 min，95%乙腈，20～40 min，3 mL/min）得化合物9（6.5 mg，tR＝13 min）、8（4.9 mg，tR＝18 min）、2（5.7 mg，tR＝29 min）和15（3.3 mg，tR＝31 min）。Fr.6（16.9 g）经硅胶柱色谱，用石油醚-二氯甲烷-甲醇（20∶1∶0～0∶0∶100）洗脱得9 个流分（Fr.6-1～6-9）。Fr.6-6（4.1 g）经ODS 柱色谱，甲醇-水（60∶40～100∶0）梯度洗脱得到6 个流分（Fr.6-6-1～6-6-6）。Fr.6-6-4（0.98 g）经Sephadex LH-20 凝胶柱色谱，二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脱，得到2 个流分（Fr.6-6-4-1～6-6-4-2）。Fr.6-6-4-1 经Prep-HPLC（75%～85%乙腈，0～40 min，3 mL/min）得到化合物5（18.5 mg，tR＝26 min）和6（11.3 mg，tR＝28 min）。Fr.6-6-4-2 经Prep-HPLC（60%～80%乙腈，0～30 min，3 mL/min）得化合物12（12.9 mg，tR＝13 min）、13（5.6 mg，tR＝15 min）、14（7.3 mg，tR＝24 min）。Fr.6-6-5（1.2 g）经Sephadex LH-20 凝胶柱色谱，甲醇洗脱得3 个流分（Fr.6-6-5-1～6-6-5-3）。Fr.6-6-5-2（0.4 g）经Prep-HPLC（30%～40%乙腈，0～40 min，3 mL/min）得到化合物10（6.4 mg，tR＝23 min）、11（5.8 mg，tR＝16 min）。

3 结果

3.1 结构鉴定

化合物1：白色固体。ESI-MSm/z: 499.376 8 [M＋H]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3)δ: 5.24 (1H, t,J= 3.5 Hz, H-12), 4.51 (1H, dd,J= 9.0, 5.5 Hz, H-3), 2.20 (1H, d,J= 11.5 Hz, H-18), 2.06 (3H, s, -COCH3), 1.08 (3H, s, H-27), 0.97 (3H, s, H-23), 0.97 (3H, s, H-26), 0.96 (3H, d,J= 8.0 Hz, H-30), 0.88 (3H, s, H-25), 0.87 (3H, d,J= 9.0 Hz, H-29), 0.78 (3H, s, H-24)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3)δ: 36.9 (C-1), 23.3 (C-2), 81.0 (C-3), 38.3 (C-4), 55.3 (C-5), 18.2 (C-6), 32.8 (C-7), 39.5 (C-8), 48.0 (C-9), 36.7 (C-10), 23.6 (C-11), 125.6 (C-12), 137.9 (C-13), 41.9 (C-14), 28.0 (C-15), 24.0 (C-16), 47.5 (C-17), 52.5 (C-18), 39.0 (C-19), 38.8 (C-20), 30.6 (C-21), 37.7 (C-22), 28.1 (C-23), 15.5 (C-24), 16.7 (C-25), 17.0 (C-26), 23.6 (C-27), 184.1 (C-28), 17.1 (C-29), 21.2 (C-30), 171.1 (CO), 21.3 (CH3)。以上数据与文献报道基本一致[11]，故鉴定化合物1 为3-O-乙酰熊果酸。

化合物2：白色固体。ESI-MSm/z: 497.351 8 [M＋H]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3)δ: 5.95 (1H, d,J= 10.0 Hz, H-11), 5.54 (1H, dd,J= 10.0, 3.0 Hz, H-12), 4.50 (1H, dd,J= 11.0, 5.5 Hz, H-3), 2.06 (3H, s, -COCH3), 1.16 (3H, s, H-27), 1.05 (3H, s, H-25), 1.00 (3H, d,J= 6.0 Hz, H-29), 0.93 (3H, s, H-23), 0.93 (3H, s, H-26), 0.86 (3H, s, H-28), 0.86 (3H, s, H-24)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3)δ: 38.0 (C-1), 23.3 (C-2), 80.7 (C-3), 37.9 (C-4), 54.8 (C-5), 17.6 (C-6), 31.3 (C-7), 41.7 (C-8), 53.0 (C-9), 36.3 (C-10), 133.3 (C-11), 128.9 (C-12), 89.7 (C-13), 41.9 (C-14), 24.7 (C-15), 30.8 (C-16), 45.1 (C-17), 40.3 (C-18), 38.1 (C-19), 60.6 (C-20), 22.8 (C-21), 31.2 (C-22), 27.7 (C-23), 16.1 (C-24), 19.2 (C-25), 18.9 (C-26), 16.1 (C-27), 18.0 (C-28), 17.9 (C-29), 180.0 (C-30), 171.1 (CO), 21.3 (CH3)。以上数据与文献报道基本一致[12]，故鉴定化合物2 为3β-acetoxy-11-ursen-13α,30-olide。

化合物3：白色晶体（甲醇）。mp 163～166 ℃。 ESI-MSm/z: 441.367 2 [M＋H]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3)δ: 9.70 (1H, d,J= 1.5 Hz, CHO), 4.77 (1H, d,J= 2.5 Hz, H-29a), 4.65 (1H, m, H-29b), 3.21 (1H, dd,J= 11.0, 4.5 Hz, H-3), 1.72 (3H, s, H-30), 1.00 (3H, s, H-27), 0.98 (3H, s, H-23), 0.94 (3H, s, H-25), 0.84 (3H, s, H-26), 0.77 (3H, s, H-24)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3)δ: 38.9 (C-1), 27.4 (C-2), 79.0 (C-3), 38.8 (C-4), 55.3 (C-5), 18.3 (C-6), 34.3 (C-7), 40.9 (C-8), 50.5 (C-9), 37.2 (C-10), 20.8 (C-11), 25.6 (C-12), 38.7 (C-13), 42.6 (C-14), 28.8 (C-15), 29.9 (C-16), 59.3 (C-17), 48.1 (C-18), 47.6 (C-19), 149.7 (C-20), 29.3 (C-21), 33.2 (C-22), 28.0 (C-23), 15.4 (C-24), 15.9 (C-25), 16.2 (C-26), 14.3 (C-27), 206.7 (C-28), 110.2 (C-29), 19.0 (C-30)。以上数据与文献报道基本一致[13]，故鉴定化合物3 为betulinal。

化合物4：白色针晶（甲醇）。mp 265～267 ℃。ESI-MSm/z: 415.321 7 [M＋H]+。1H-NMR (600 MHz, CDCl3)δ: 4.63 (1H, s, H-19), 3.19 (1H, dd,J= 11.4, 4.2 Hz, H-3), 0.97 (3H, s, H-23), 0.94 (3H, s, H-26), 0.86 (3H, s, H-27), 0.84 (3H, s, H-25), 0.76 (3H, s, H-24)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3)δ: 38.9 (C-1), 27.4 (C-2), 79.0 (C-3), 38.9 (C-4), 55.4 (C-5), 18.2 (C-6), 34.2 (C-7), 40.6 (C-8), 50.9 (C-9), 37.3 (C-10), 20.7 (C-11), 22.2 (C-12), 34.3 (C-13), 40.6 (C-14), 28.9 (C-15), 28.2 (C-16), 51.2 (C-17), 55.0 (C-18), 79, 3 (C-19), 29.7 (C-21), 29.6 (C-22), 28.0 (C-23), 15.4 (C-24), 16.4 (C-25), 15.7 (C-26), 13.2 (C-27), 179.5 (C-28)。以上数据与文献报道基本一致[14]，故鉴定化合物4 为diospyrolide。

化合物5：白色固体。ESI-MSm/z: 619.399 8 [M＋H]+。1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ: 12.08 (1H, s, COOH), 9.98 (1H, s, 4′-OH), 7.55 (2H, d,J= 8.5 Hz, H-2′, 6′), 7.52 (1H, d,J= 16.0 Hz, H-7′), 6.80 (2H, d,J= 8.5 Hz, H-3′, 5′), 6.40 (1H, d,J= 16.0 Hz, H-8′), 4.71 (1H, d,J= 2.5 Hz, H-29a), 4.58 (1H, s, H-29b), 4.53 (1H, d,J= 5.5 Hz, H-3), 3.68 (1H, m, H-2), 2.97 (1H, m, H-19), 1.67 (3H, s, H-30), 0.97 (3H, s, H-27), 0.88 (3H, s, H-26), 0.88 (3H, s, H-25), 0.84 (3H, s, H-24), 0.78 (3H, s, H-23)；13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6)δ: 48.2 (C-1), 65.4 (C-2), 84.0 (C-3), 39.3 (C-4), 55.0 (C-5), 18.3 (C-6), 34.2 (C-7), 40.8 (C-8), 50.2 (C-9), 38.0 (C-10), 21.1 (C-11), 25.5 (C-12), 38.2 (C-13), 42.5 (C-14), 29.7 (C-15), 32.2 (C-16), 55.9 (C-17), 49.0 (C-18), 47.1 (C-19), 150.8 (C-20), 30.6 (C-21), 37.0 (C-22), 28.8 (C-23), 18.1 (C-24), 17.6 (C-25), 16.2 (C-26), 14.8 (C-27), 177.7 (C-28), 110.1 (C-29), 19.4 (C-30), 125.7 (C-1′), 130.6 (C-2′, 6′), 116.2 (C-3′, 5′), 160.1 (C-4′), 144.5 (C-7′), 115.6 (C-8′), 167.2 (C-9′)。以上数据与文献报道基本一致[15]，故鉴定化合物5 为3β-O-(E)-cumaroyl- alphitolinsaeure。

化合物6：白色固体。ESI-MSm/z: 619.400 1 [M＋H]+。1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ: 7.44 (1H, d,J= 16.0 Hz, H-7′), 7.04 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-2′), 6.99 (1H, dd,J= 8.0, 2.0 Hz, H-6′), 6.75 (1H, d,J= 8.0 Hz, H-5′), 6.23 (1H, d,J= 16.0 Hz, H-8′), 4.70 (1H, brs, H-29a), 4.57 (1H, brs, H-29b), 4.49 (1H, dd,J= 11.0, 4.5 Hz, H-3), 2.97 (1H, m, H-19), 1.65 (3H, s, H-30), 0.96 (3H, s, H-23), 0.89 (3H, s, H-26), 0.87 (3H, s, H-24), 0.83 (3H, s, H-23), 0.80 (3H, s, H-27)；13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6)δ: 38.3 (C-1), 24.0 (C-2), 80.2 (C-3), 38.0 (C-4), 55.2 (C-5), 18.2 (C-6), 34.2 (C-7), 40.7 (C-8), 50.2 (C-9), 36.9 (C-10), 21.0 (C-11), 25.5 (C-12), 38.1 (C-13), 42.5 (C-14), 29.7 (C-15), 32.2 (C-16), 55.9 (C-17), 49.0 (C-18), 47.1 (C-19), 150.8 (C-20), 30.6 (C-21), 37.2 (C-22), 28.2 (C-23), 16.4 (C-24), 17.0 (C-25), 16.2 (C-26), 14.8 (C-27), 177.9 (C-28), 110.1 (C-29), 19.4 (C-30), 125.9 (C-1′), 114.9 (C-2′), 146.1 (C-3′), 148.9 (C-4′), 115.3 (C-5′), 121.8 (C-6′), 145.3 (C-7′), 116.2 (C-8′), 166.8 (C-9′)。以上数据与文献报道基本一致[16]，故鉴定化合物6 为3′,4′-二羟基肉桂酸白桦脂酸酯。

化合物7：白色固体。ESI-MSm/z: 443.388 7 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 5.12 (1H, t,J= 4.0 Hz, H-12), 3.55 (1H, d,J= 11.2 Hz, H-28a), 3.15 (1H, dd,J= 11.2, 4.8 Hz, H-3), 3.03 (1H, d,J= 11.2 Hz, H-28b), 1.13 (3H, s, H-27), 1.04 (3H, s, H-25), 0.98 (3H, s, H-23), 0.98 (3H, s, H-26), 0.94 (3H, d,J= 6.0 Hz, H-29), 0.83 (3H, d,J= 6.4 Hz, H-30), 0.79 (3H, s, H-24)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ: 38.7 (C-1), 26.5 (C-2), 78.3 (C-3), 37.8 (C-4), 55.3 (C-5), 18.1 (C-6), 32.6 (C-7), 39.9 (C-8), 47.3 (C-9), 36.6 (C-10), 22.7 (C-11), 124.9 (C-12), 138.8 (C-13), 41.8 (C-14), 25.7 (C-15), 22.5 (C-16), 38.5 (C-17), 54.2 (C-18), 39.3 (C-19), 39.5 (C-20), 35.2 (C-21), 30.4 (C-22), 27.3 (C-23), 14.8 (C-24), 15.1 (C-25), 15.9 (C-26), 23.1 (C-27), 68.8 (C-28), 16.5 (C-29), 20.4 (C-30)。以上数据与文献报道基本一致[17]，故鉴定化合物7 为熊果醇。

化合物8：白色粉末。ESI-MSm/z: 443.387 7 [M＋H]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3)δ: 4.68 (1H, s, H-29a), 4.58 (1H, s, H-29b), 3.80 (1H, d,J= 11.0 Hz, H-28a), 3.33 (1H, d,J= 11.0 Hz, H-28b), 3.19 (1H, dd,J= 11.5, 5.0 Hz, H-3), 1.68 (3H, s, H-30), 1.02 (3H, s, H-27), 0.98 (3H, s, H-23), 0.97 (3H, s, H-25), 0.82 (3H, s, H-26), 0.76 (3H, s, H-24)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3)δ: 38.7 (C-1), 27.4 (C-2), 79.0 (C-3), 38.9 (C-4), 55.3 (C-5), 18.3 (C-6), 34.2 (C-7), 40.9 (C-8), 50.4 (C-9), 37.2 (C-10), 20.8 (C-11), 25.2 (C-12), 37.3 (C-13), 42.7 (C-14), 27.0 (C-15), 29.2 (C-16), 47.8 (C-17), 48.8 (C-18), 47.8 (C-19), 150.5 (C-20), 29.8 (C-21), 34.0 (C-22), 28.0 (C-23), 15.4 (C-24), 16.1 (C-25), 16.0 (C-26), 14.8 (C-27), 60.5 (C-28), 109.7 (C-29), 19.1 (C-30)。以上数据与文献报道基本一致[18]，故鉴定化合物8 为白桦脂醇。

化合物9：浅黄色油状。ESI-MSm/z: 413.377 4 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 5.75 (1H, s, H-4), 1.20 (3H, s, H-19), 0.94 (3H, d,J= 6.4 Hz, H-29), 0.85 (3H, q,J= 7.2 Hz, H-21), 0.85 (3H, q,J= 7.2 Hz, H-26), 0.85 (3H, q,J= 7.2 Hz, H-27), 0.73 (3H, s, H-18)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 35.6 (C-1), 34.0 (C-2), 199.8 (C-3), 123.7 (C-4), 171.8 (C-5), 33.0 (C-6), 32.0 (C-7), 35.7 (C-8), 53.8 (C-9), 38.6 (C-10), 21.0 (C-11), 39.6 (C-12), 42.4 (C-13), 55.9 (C-14), 24.2 (C-15), 28.2 (C-16), 56.0 (C-17), 11.9 (C-18), 17.4 (C-19), 36.1 (C-20), 18.7 (C-21), 33.8 (C-22), 26.0 (C-23), 45.8 (C-24), 29.7 (C-25), 19.8 (C-26), 19.0 (C-27), 23.0 (C-28), 12.0 (C-29)。以上数据与文献报道基本一致[19]，故鉴定化合物9 为豆甾-4-烯-3-酮。

化合物10：黄色晶体（二氯甲烷-甲醇）。mp 211～213 ℃。ESI-MSm/z: 433.100 9 [M＋H]+。1H-NMR (500 MHz, CD3OD)δ: 7.77 (2H, d,J= 9.0 Hz, H-2′, 6′), 6.95 (2H, d,J= 9.0 Hz, H-3′, 5′), 6.39 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-8), 6.21 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-6), 5.37 (1H, d,J= 1.5 Hz, H-1′′), 0.92 (3H, d,J= 5.5 Hz, H-6′′)；13C-NMR (125 MHz, CD3OD)δ: 159.3 (C-2), 136.2 (C-3), 179.6 (C-4), 158.6 (C-5), 95.0 (C-6), 166.6 (C-7), 100.1 (C-8), 163.2 (C-9), 105.8 (C-10), 122.6 (C-1′), 131.9 (C-2′, 6′), 116.6 (C-3′, 5′), 161.7 (C-4′), 103.5 (C-1′′), 72.1 (C-2′′), 72.2 (C-3′′), 72.0 (C-4′′), 73.2 (C-5′′), 17.7 (C-6′′)。以上数据与文献报道基本一致[20]，故鉴定化合物10 为5,7,4′-三羟基黄酮3-O-α-L-毗喃鼠李糖苷。

化合物11：淡黄色固体。ESI-MSm/z: 601.116 9 [M＋H]+。1H-NMR (500 MHz, CD3OD)δ: 7.93 (2H, d,J= 8.5 Hz, H-2′, 6′), 6.94 (2H, s, H-2′′′, 6′′′), 6.73 (2H, d,J= 8.5 Hz, H-3′, 5′), 6.35 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-8), 6.18 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-6), 5.20 (1H, m, H-1′′), 4.28 (2H, m, H-6′′), 3.46 (4H, m, H-2′′～5′′)；13C-NMR (125 MHz, CD3OD)δ: 158.5 (C-2), 135.3 (C-3), 179.4 (C-4), 162.9 (C-5), 100.0 (C-6), 166.1 (C-7), 95.0 (C-8), 159.6 (C-9), 105.6 (C-10), 122.7 (C-1′), 132.2 (C-2′, 6′), 116.0 (C-3′, 5′), 161.5 (C-4′), 104.4 (C-1′′), 75.8 (C-2′′, 5′′), 71.5 (C-4′′), 64.3 (C-6′′), 121.3 (C-1′′′), 110.2 (C-2′′′, 6′′′), 146.4 (C-3′′′, 5′′′), 139.8 (C-4′′′), 168.1 (C-7′′′)。以上数据与文献报道基本一致[21]，故鉴定化合物11 为山柰酚-3-O-(6′′-没食子酰基)-β-D-葡萄糖苷。

化合物12：黄色油状物。ESI-MSm/z: 431.384 4 [M＋H]+。1H-NMR (600 MHz, CD3OD)δ: 2.54 (2H, t,J= 7.2 Hz, H-4), 2.11 (3H, s, H-7a), 2.06 (3H, s, H-5a), 2.04 (3H, s, H-8a), 1.73 (2H, m, H-3), 1.18 (3H, s, H-2a), 0.87 (3H, d,J= 6.0 Hz, H-12′a), 0.86 (3H, d,J= 6.0 Hz, H-13′), 0.85 (3H, d,J= 6.6 Hz, H-4′a), 0.84 (3H, d,J= 6.6 Hz, H-8′a)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD)δ: 73.9 (C-2), 31.7 (C-3), 20.5 (C-4), 120.4 (C-5), 144.7 (C-6), 121.6 (C-7), 122.9 (C-8), 145.3 (C-9), 116.7 (C-10), 22.9 (C-2a), 10.6 (C-5a), 11.6 (C-7a), 11.0 (C-8a), 39.4 (C-1′), 20.7 (C-2′), 37.3 (C-3′), 32.6 (C-4′), 37.3 (C-5′), 24.2 (C-6′), 37.2 (C-7′), 32.5 (C-8′), 37.1 (C-9′), 24.6 (C-10′), 39.2 (C-11′), 27.8 (C-12′), 21.9 (C-13′), 19.0 (C-4′a), 19.0 (C-8′a), 22.0 (C-12′a)。以上数据与文献报道基本一致[22]，故鉴定化合物12 为α-生育酚。

化合物13：黄色油状物。ESI-MSm/z: 461.394 2 [M＋H]+。1H-NMR (600 MHz, CDCl3)δ: 4.66 (2H, s, H-8a), 3.44 (3H, s, -OCH3), 2.60 (2H, t,J= 6.6 Hz, H-4), 2.15 (3H, s, H-7a), 2.11 (3H, s, H-6a), 1.77 (2H, m, H-3), 1.26 (3H, s, H-2a), 0.87 (6H, d,J= 6.6 Hz, H-13′, 12′a), 0.84 (6H, d,J= 6.6 Hz, H-4′a, 8′a)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3)δ: 74.4 (C-2), 31.4 (C-3), 20.0 (C-4), 144.7 (C-5), 123.1 (C-6), 115.9 (C-7), 125.8 (C-8), 147.3 (C-9), 115.4 (C-10), 23.7 (C-2a), 11.9 (C-6a), 11.7 (C-7a), 69.8 (C-8a), 58.1 (-OCH3), 39.8 (C-1′), 21.0 (C-2′), 37.5 (C-3′), 32.8 (C-4′), 37.5 (C-5′), 24.5 (C-6′), 37.4 (C-7′), 32.7 (C-8′), 37.3 (C-9′), 24.8 (C-10′), 39.4 (C-11′), 28.0 (C-12′), 22.6 (C-13′), 19.8 (C-4′a), 19.7 (C-8′a), 22.7 (C-12′a)。以上数据与文献报道基本一致[22]，故鉴定化合物13 为methoxytocopherol。

化合物14：黄色油状物。ESI-MSm/z: 447.373 8 [M＋H]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3)δ: 2.56 (2H, m, H-1′), 2.05 (3H, s, H-6a), 2.02 (6H, s, H-3a, 4a), 1.25 (3H, s, H-3′a), 0.88 (9H, d,J= 7.0 Hz, H-7′a, 16′, 15′a), 0.86 (3H, d,J= 7.0 Hz, H-11′a)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3)δ: 144.5 (C-1), 187.7 (C-2), 140.2 (C-3), 140.5 (C-4), 187.3 (C-5), 140.4 (C-6), 12.3 (C-3a), 12.4 (C-4a), 12.0 (C-6a), 21.4 (C-1′), 39.4 (C-2′), 72.7 (C-3′), 42.3 (C-4′), 21.3 (C-5′), 29.9 (C-6′), 32.8 (C-7′), 37.6 (C-8′), 24.5 (C-9′), 37.4 (C-10′), 32.8 (C-11′), 37.3 (C-12′), 24.8 (C-13′), 40.3 (C-14′), 28.0 (C-15′), 22.7 (C-16′), 26.6 (C-3′a), 19.8 (C-7′a), 19.7 (C-11′a), 22.6 (C-15′a)。以上数据与文献报道基本一致[23]，故鉴定化合物 14 为 α- tocopherolquinone。

化合物15：无色油状物。ESI-MSm/z: 314.341 3 [M＋NH4]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3)δ: 5.43 (1H, t,J= 5.5 Hz, H-2), 4.18 (2H, d,J= 7.0 Hz, H-1), 2.01 (2H, m, H-4), 1.69 (3H, s, H-17), 1.54 (1H, m, H-15), 0.88 (6H, d,J= 7.0 Hz, H-16, 20), 0.87 (6H, d,J= 6.5 Hz, H-18, 19)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3)δ: 59.4 (C-1), 123.1 (C-2), 140.3 (C-3), 39.9 (C-4), 25.1 (C-5), 36.7 (C-6), 32.7 (C-7), 37.4 (C-8), 24.5 (C-9), 37.4 (C-10), 32.8 (C-11), 37.3 (C-12), 24.8 (C-13), 39.4 (C-14), 28.0 (C-15), 22.6 (C-16), 16.2 (C-17), 19.7 (C-18), 19.8 (C-19), 22.7 (C-20)。以上数据与文献报道基本一致[24]，故鉴定化合物15 为植醇。

3.2 细胞毒活性评价

以星形孢菌素（staurosporine，STS）为阳性对照，采用CCK8 法检测化合物1～6 对6 种人肿瘤细胞（NCI-H441、NCI-H460、A549、SKOV3、Hela、caki-1）的细胞毒活性。首先将上述6 种癌细胞以3×103/孔的浓度悬浮在96 孔板中的含10%胎牛血清的RPMI 1640 培养基中，并在5% CO2、37 ℃条件下孵育24 h。然后，每组添加不同浓度的测试样品（0.39～50 μmol/L，2 倍梯度稀释），同时设立不加化合物的对照组和加STS 的阳性对照组，培养72 h 后，将含有CCK8 试剂（10%）的新鲜培养基（100 μL）加入各孔中，并再培养2 h。最后，在450 nm 下测定溶液的吸光度（A）值，并根据公式计算抑制率。

并用Graph Pad Prism 软件拟合化合物的IC50值。所有结果均平行测试3 次，取平均值。CCK8结果见表1。

表1 化合物1～6 对6 种肿瘤细胞的细胞毒活性Table 1 Cytotoxic activity of compounds 1―6 on six tumor cells

4 讨论

本研究从亚麻叶白千层醋酸乙酯部位中共分离得到15 个化合物，主要包括三萜类化合物9 个，黄酮苷类化合物2 个，生育酚类以及其他化合物4 个。体外活性实验表明化合物1、3、5、6 对6 种人类肿瘤细胞均有不同程度的增殖抑制作用，提示三萜类成分可能是亚麻叶白千层抗肿瘤主要药效物质基础，其分子作用机制还有待我们进一步深入研究。本研究结果丰富了白千层属的化学成分，也能为该植物综合药用开发利用提供一定的科学和实验依据。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突