NSE、CYFRA21-1、miR141在肺癌诊断中的价值

马玲玲 杨秋伟 任 磊

神经元特异性烯醇化酶(NSE)是癌细胞骨架结构蛋白，在癌细胞凋亡或者癌细胞破碎的过程中，NSE可显著释放入血[1]；细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)作为细胞器或者细胞内蛋白的分解产物，能够反应癌细胞的增殖浸润风险，加剧肿瘤细胞的生物学特征的改变[2]；微小RNA141(miR-141)是微小RNA家族成员，近年来的研究表明，微小RNA家族能够在肿瘤细胞的增殖调控中发挥作用[3]。本次研究选取我院肿瘤科经病理学检查证实的肺癌患者92例，探讨了NSE、CYFRA21-1、miR141的表达情况，并初步分析NSE、CYFRA21-1、miR141的诊断学价值。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取我院2017年5月至2019年10月经病理学检查证实的肺癌患者92例作为肺癌组、健康体检对象90例作为对照组。入选标准：①肺癌的诊断标准参考中华医学会制定的标准[4]；②所有肺癌患者均经过胸部CT、MRI，纤支镜病理学活检或术后病理学证实；③接受血清肿瘤标志物检查前，患者无放化疗病史；④对照组为我院体检中心体检结果正常的对象；⑤本研究符合《赫尔透辛基宣言》相关医学伦理规定，经我院医学伦理委员会批准。排除标准：①合并其他部位恶性肿瘤的患者；②未经病理学检查确诊；③资料缺失。肺癌组男性53例、女性39例，年龄42～75岁，平均(59.2±11.3)岁；TNM分期：Ⅰ期20例、Ⅱ期37例、Ⅲ期25例、Ⅳ期10例；淋巴结转移阳性46例；病理学分型：非小细胞肺癌75例、小细胞肺癌17例。对照组，男性46例、女性44例，年龄39～75岁，平均(57.7±14.2)岁。2组研究对象的年龄、性别比较，无统计学差异(P>0.05)。

1.2 检测方法

采用ELISA法进行NSE、CYFRA21-1的检测，采集受试者的肘部静脉血5 ml，1 000 r/min离心10 min，取上清液待测。抗原浓度的测定使用十字交叉法，采用碳酸盐缓冲液进行稀释抗原后，加入96孔的酶标板中，并盖好板盖，放置在4 ℃的冰箱中过夜，然后蒸馏水冲洗3次(5 min)，轻轻叩击酶标板进行甩干。在每孔中加入200 μl的脱脂牛奶(5%)，放置在4 ℃的冰箱再次过夜，再经蒸馏水冲洗3次(5 min)，加入稀释好的抗体(购自abcum公司 浓度1∶800)后，再次使用蒸馏水冲洗3次(5 min)，每孔中加入100 μl的底物，显色后在酶标仪上进行吸光度的检测；对检查者的肘部静脉血进行采集(3 ml)，以3 000 r/min离心20 min，取其上层液体，并提取RNA(试剂盒由北京奥维亚生物公司生产)，逆转录成cRNA后进行基因扩增，采用primer 5软件进行检测基因的合成和引物设计，采用GADPH作为内参，miR141引物5'CAAGGACCAACTACAACC 3':下游5'TGCCTCTTCTTTAATTG3'，经历45个循环后进行曲线溶解，每个孔设置3个复孔，取平均值。

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 2组的血清NSE、CYFRA21-1、miR141水平比较

肺癌组患者的NSE、CYFRA21-1、miR141水平均显著高于对照组(P<0.05)；见表1。

表1 肺癌组和对照组的血清NSE、CYFRA21-1、miR141水平比较

2.2 血清NSE、CYFRA21-1、miR141水平变化与肺癌TNM分期、淋巴结转移、病理学类型的关系

肺癌组患者的NSE水平与TNM分期、淋巴结转移、肺癌的病理学类型有关(P<0.05)。CYFRA21-1水平与淋巴结转移有关(P<0.05)；miR141水平与TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05)；见表2。

表2 血清NSE、CYFRA21-1、miR141水平变化与肺癌TNM分期、淋巴结转移、病理学类型的关系

2.3 血清NSE、CYFRA21-1、miR141水平在诊断肺癌中的价值

绘制ROC曲线，血清NSE、CYFRA21-1、miR141水平在诊断肺癌中的AUC值分别为0.730、0.672、0.836；三项指标联合应用在诊断肺癌中的AUC值为0.918；见图1。

图1 血清NSE、CYFRA21-1、miR141水平在诊断肺癌的ROC曲线

3 讨论

在不同病理性内外环境的诱导下，肺泡上皮细胞或者鳞状上皮细胞的持续性病变，能够增加支气管来源或者肺泡上皮细胞来源恶性肿瘤的发生风险。同时在长期吸烟、气溶胶颗粒吸入或者其他有害物质污染的环境中，肺癌的整体发病水平可持续上升[4-5]。临床上15%以上的肺癌临床确诊时已处于疾病的中晚期，失去了早期根治性手术机会[6]。而通过对于肺癌患者的早期诊断方式的研究，能够为肺癌的手术治疗或者治疗后临床预后的随访提供参考。肺部CT能够在肺癌的诊断过程中发挥作用，但肺部CT检查耗时较长，同时缺乏定量化监测的价值。肺部结节穿刺活检，能够在肺癌的早期诊断过程发挥金标准作用，但胸部结节穿刺活检属于有创检查，其费用较高，患者的接受程度较低。现阶段多数研究者探讨了癌胚抗原、鳞状细胞癌抗原及糖链蛋白199等在肺癌诊断过程中的价值，认为相关肿瘤非特异度蛋白的表达上升，能够显著提高肺癌早期诊断的灵敏度，但其诊断的整体漏诊率或者误诊率水平仍然较高[7]。

NSE是神经特异性烯醇化酶相关因子，其主要存在于脑组织或者神经胶质成分中，在癌细胞膜破碎的过程中，NSE可显著释放入血。CYFRA21-1作为癌细胞骨架结构蛋白，在癌细胞增殖的过程中，细胞骨架结构的合成速度的增加，能够促进外周血中CYFRA21-1的上升；miR141是微小RNA家族成员，其能够参与到肿瘤信号通路PI3K的调控激活过程，诱导癌细胞内转录相关因子的上调，最终促进癌细胞增殖失控[8]。回顾相关研究，多数研究分析了NSE、CYFRA21-1在肺癌患者中的表达，认为在肺癌患者中，NSE、CYFRA21-1的表达浓度明显上升[9-11]，但对于miR141的分析不足。

本次研究发现，在肺癌患者血清中，NSE、CYFRA21-1、miR141蛋白的表达阳性率水平均明显上升，高于健康体检对照组，统计学差异显著，表明NSE、CYFRA21-1、miR141在肺癌患者中存在明显的高表达态势，这主要与肺癌细胞的异常增殖、癌细胞骨架蛋白的过度合成及肿瘤细胞转录调控的异常等因素有关。另外，过度上升的miR141还能够反馈性诱导癌细胞膜上离子通道蛋白的异常开放，提高了癌细胞膜内第二信使浓度，最终促进了肺癌的发生。有其他研究者也认为，在肺癌患者血清中，miR141的表达浓度可随着肺癌患者的病情进展而显著上升，特别是在肺癌患者临床预后较差或者短期内病死风险较高的患者中，miR141的表达浓度可翻倍上升[12]。本次研究还发现，NSE、CYFRA21-1、miR141的表达与肺癌患者的临床病理特征密切相关，其中在不同TNM分期、是否淋巴结转移、非小细胞肺癌患者中，NSE浓度明显上升，高于临床病理特征较轻或者小细胞肺癌患者，统计学差异显著。NSE的上升对于临床病理特征的影响，在于其能够提高肺癌细胞粘附淋巴结组织的能力，促进了癌细胞浸润深度和浸润范围的增加；CYFRA21-1在发生淋巴结转移的患者中浓度较高，表明CYFRA21-1能够影响到肿瘤细胞的淋巴结转移过程，这主要考虑由于CYFRA21-1能够提高肿瘤细胞膜上内皮粘附分子adherin 的表达浓度，促进了肿瘤细胞的淋巴结转移[13]；miR141在TNM分期较晚或者发生淋巴结转移的患者中浓度较高，表明miR141同样能够显著促进肺癌患者临床病理特征的进展。诊断学分析可见，NSE、CYFRA21-1、miR141在联合诊断肺癌的过程中具有重要的应用价值，其联合诊断的AUC曲线下面积可超过0.9，提示其检测价值较为可靠。

综上所述，在肺癌患者中，NSE、CYFRA21-1、miR141的表达浓度明显上升，临床上通过联合检测NSE、CYFRA21-1、miR141，能够提高肺癌的诊断效能。