突变等位基因肿瘤特异性对甲状腺乳头状癌的诊断价值和预后相关性分析

李雪平 汪明强 吕金利 马志勇 王湛钧

甲状腺乳头状癌(PTC)常发生于甲状腺恶性肿瘤患者中，属于1种高发型内分泌系统肿瘤，而且发病率呈逐年上升趋势。相关报道显示：甲状腺乳头状癌患者治疗后，预后情况和远处转移的几率均显著改善可能与其基因的异质性有着很大关系[1-3]。但是一些高危患者容易出现复发、转移甚至死亡现象，因此寻找判断指标对甲状腺癌患者的预后较差情况进行识别和判断有着重要临床价值。当前甲状腺癌分子的标志物逐渐进入到临床研究之中，例如STRN/ALK的基因融合、TERT启动子突变、PPAR/ PAX8基因融合、PTC/RET基因融合、RAS突变以及BRAF突变等，其中以BRAF突变最为常见，所以单个的基因并没有办法对患者的预后情况进行准确判断[4]。因此本文选取我院2017年6月至2020年6月共收治的132例甲状腺乳头状癌患者作为研究对象，分析突变等位基因肿瘤特异性对甲状腺乳头状癌的诊断价值和预后相关性。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取我院2017年6月至2020年6月共收治的132例甲状腺乳头状癌患者作为研究对象，应用突变等位基因肿瘤特异性(mutant-allele tumor heterogeneity，MATH)将患者分为高MATH组和低MATH组，甲状腺乳头状癌患者的MATH在2.57到93.72之间，平均为(29.46±16.21)；因此将MATH≥29.46的患者分为高MATH组，共65例，将MATH<29.46的患者纳入低MATH组，共67例。纳入标准：患者临床资料完整；所有患者均知情并签署知情同意书；患者通过术后病理证实为甲状腺乳头状癌。排除标准：术中没有进行临床清扫；多病找恶性病变患者；术前经受过相关放化疗治疗的患者。两组患者的一般资料对比无明显差异(P>0.05)，具有可比性，见表1。

表1 一般资料

1.2 方法

①应用石蜡切片核酸提取试剂盒和人类BRAF基因突变检测试剂盒(购自厦门艾德生物医药科技股份有限公司)；ABI7500实时荧光定量PCR仪提取DNA并检测，具体过程根据试剂盒说明书进行操作。

②应用突变扩增组织系统与荧光PCR技术来对实验中DNA样本出现BRAF基因突变情况进行检测，针对BRAF基因突变的位点设计特异突变检测引物，并对甲状腺乳头状癌基因扩增除突变模板，同时利用FAM标记的双环探针荧光探针对扩增产物进行实时检测。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 2组患者临床病理特征对比分析

对比2组患者临床病理特征对比无明显差异(P>0.05)，见表2。

表2 2组患者临床病理特征对比分析

2.2 2组基因突变不同类型患者临床病理特征比较

对比2组基因突变不同类型患者临床病理特征发现，两组性别、年龄、肿瘤大小、钙化情况对比无明显差异(P>0.05)，淋巴结节转移例数对比差异显著(P<0.05)，见表3。

表3 2组基因突变不同类型患者临床病理特征比较

2.3 突变等位基因肿瘤特异性对甲状腺乳头状癌预后预测价值

对单因素分析具有统计学差异指标进行赋值：MATH值不是甲状腺乳头状癌患者生存情况的显著预测因素(P=0.459)，不同BRAF基因型甲状腺乳头状癌患者的生存情况无显著差异(P=0.464)，而在突变型和野生型患者中，高MATH患者的生存率显著低于低MATH患者(P突变型=0.030、P野生型=0.016)，见表4。

表4 突变等位基因肿瘤特异性对甲状腺乳头状癌的预后的预测价值

3 讨论

肿瘤内异质性主要指的是在相同的肿瘤之内以及特定的原发肿瘤和其转移之间出现的不同行为特征、表型以及遗传的癌细胞亚群[5-6]。这种差异对于恶性肿瘤患者的诊断和治疗具有指导意义。相关报道提出，多病灶类型的甲状腺乳头状癌患者可能会出现特定组织类型的异质性，并且可能在分子水平之上，存在瘤内特异性[7-8]。伴随着PTC患者肿瘤的进展，癌细胞在分裂之后，子代细胞出现父代细胞及同代细胞均可能出现病理学差异，因此该肿瘤侵袭以及生长指标甚至患者预后均发生变化。MATH为肿瘤全外显子测序相关结果，可用于ITH程度评估。孙颖等提出，乳腺癌、头颈部鳞癌的异质性程度可作为当前临床上一种有用生物标记[9]。MATH是否可用于PTC患者预后评估，该问题目前尚未见报道。

本研究结果表明，对比两组患者临床病理特征以及BRAF基因型等对比均无明显差异(P>0.05)；对比两组基因突变不同类型患者临床病理特征发现，两组淋巴结节转移人数对比差异显著(P<0.05)，其余指标无显著差异(P>0.05)。当前PTC之中常见分子改变为TERT、BRAF突变。当前研究中显示，在PTC患者之中BRAF的突变率为40%～60%，而且端粒酶反转录酶的突变提升了启动子活性，并通过维持端粒子的长度导致癌细胞增殖，出现PTC。相关研究显示[10]，分子标记物在PTC患者的预后之中的作用抑制属于焦点研究内容，联合多基因突变或者是单基因突变被应用多项PTC预后预测之中，但是结果依然存在较大争议。本研究结果表明，对单因素分析具有统计学差异指标进行赋值：MATH值不是甲状腺乳头状癌患者生存情况的显著预测因素(P=0.459)，BRAF基因型对于甲状腺乳头状癌患者的生存情况无显著影响(P=0.464)，而突变型和野生型患者中，高MATH患者的生存率显著低于低MATH患者(P均<0.05)。因此证明，突变等位基因肿瘤特异性可以在BRAF野生型和突变型之中预测甲状腺乳头状癌患者的预后情况。相关研究显示[11]，PTC的复发与远处转移与TERT的启动因子突变有着很大关系，而Moon等[12]研究则认为这种突变和临床特征没有明显相关性，并且不能够判断患者的预后情况。本研究中应用的MATH数字算法是肿瘤内异质性的直观测量方法，与单细胞分析或者肿瘤微切割相比具有明显优势[13]。

综上所述，突变等位基因肿瘤特异性可以在BRAF野生型和突变型之中预测甲状腺乳头状癌患者的预后情况，具有临床诊断价值，可以用于临床治疗指导。