miR-34b和miR-320a的表达与前列腺癌组织临床病理特征及预后的相关性

吕文伟 魏澎涛

前列腺癌是常见的男性生殖系统恶性肿瘤，近年来发病率逐年上升[1]。前列腺癌的治疗方案有手术治疗和激素治疗，患者治疗后仍易转移和复发，严重影响患者的生活质量[2]。miRNA是一种内源性非编码小分子单链RNA，可以通过转录后调控蛋白质的表达[3]。miR-34b、miR-320a是目前已知的可能与前列腺癌相关的两条MicroRNA，目前很少有miR-34b、miR-320a与前列腺癌病情及预后的相关性研究。因此，本次旨在分析前列腺癌组织中miR-34b、miR-320a的表达与临床病理特征及预后的相关性，为临床诊断前列腺癌提供依据。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选择2015年3月至2017年2月本院收治的前列腺癌患者80例作为观察组，另选40例良性前列腺增生患者作为对照组。观察组患者年龄50～70岁，平均年龄为(65.1±4.8)岁，对照组患者50～69岁，平均年龄为(64.9±4.7)岁，两组年龄无统计学差异(P>0.05)，具有可比性。手术切取前列腺癌患者癌组织及癌旁组织各80份，切取良性前列腺增生患者增生组织40份。纳入标准：①前列腺癌患者均符合2014年前列腺癌指南中诊断标准[4]；②所有患者均知情同意，配合随访；③认知功能正常。排除标准：严重心肝肾功能不全、合并其他恶性肿瘤、糖尿病患者。本研究经我院伦理委员会批准，且患者和家属均自愿参加实验并签署知情同意书。随访3年，定期为患者进行直肠指检、血清PSA、B超等检查。根据PSA的倍增时间来判断随访患者的病情。

1.2 实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测组织miR-34b、miR-320a的表达

将离体的前列腺癌组织、癌旁组织、良性前列腺增生组织置于液氮中速冻，然后放置-80 ℃冰箱中备用。应用RNAiso PLUS试剂盒(上海百赛生物技术有限公司)提取细胞总RNA，以总RNA为模板，使用逆转录试剂盒合成cDNA。miR-34b定量引物上游序列为5’-CAATCACTAACTCCACTGCCAT-3’，下游序列为5’-TGGTGTCGTGGA GTCG-3’。miR-320a定量引物上游序列为5’-ACACTCCAGCTGGGAAAAGCUGGGUUGAGGA-3’，下游序列为5’-TGGTGTCGTGGAGTCG-3’。RT-PCR总反应体系为 20 μl，其中c DNA，引物，Master Mix 试剂和纯水。所有反应均在PCR仪完成，每个样本重复3次。以 2-ΔΔCt代表目的基因的相对表达量，计算公式为ΔCt=Ct目的基因-CtU6，ΔΔCt =ΔCt癌组织-ΔCt癌旁组织。分别计算各组织中miR-320a、miR-34b的相对表达量。

1.3 临床病理特征评价

将所有患者前列腺组织标本石蜡切片交由本院病理科医生进行Gleason评分和TNM病理分期，组织学分级依据前列腺癌Gleason分级[5]。临床分期按Jewett.whitmore分期标准。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 两组miR-34b、miR-320a表达量对比

观察组中miR-34b、miR-320 a相对表达量均低于对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两组miR-34b、miR-320a相对表达量对比

2.2 miR-320、miR-34b与前列腺癌临床参数的相关性

前列腺癌患者组织中miR-320a、miR-34b的表达与年龄、初始PSA无关，与Gleason评分、肿瘤大小、肿瘤分期、有无远处转移有关(P<0.05)，见表2。

表2 miR-320a、miR-34b的表达与前列腺癌临床病理特征的关系

2.3 观察组不同预后患者miR-34b、miR-320a表达情况

随访36个月，至2020年2月2日，前列腺癌患者死亡36例，存活44例。死亡组miR-320a、miR-34b表达水平显著低于存活组(P<0.05)，见表3。

表3 观察组不同预后患者miR-34b、miR-320a表达情况

3 讨论

miRNA是一类源性非编码单链小分子RNA，其转录与一般mRNA不同，并不翻译成蛋白质。癌症的发生与多种致癌基因和抑癌基因有关，而miRNA在肿瘤的发生中类似于致癌基因和抑癌基因，可通过与特定mRNA结合来调控基因的表达，因此miRNA被一些临床研究者视为潜在的肿瘤标志物[6-7]。miRNA具有高度的进化保守性，在血清和血浆中的存在形式较为稳定，可作为潜在的血清标志物应用于肿瘤的诊断中[8-9]。miR-34b、miR-320a都是与前列腺癌可能有一定联系的miRNA，临床中针对二者表达水平与前列腺癌的病理特征和预后的研究报道较少[10]。本次研究探讨了前列腺癌组织中miR-34b、miR-320a的表达与临床病理特征及预后的相关性，以期为临床诊断提供新思路。

miR-34b为1种抑癌基因，可通过多种通路调节癌细胞的生长和繁殖。本研究结果表明，前列腺癌患者miR-34b、miR-320 a表达水平较健康对照患者明显降低，差异具有统计学意义(P<0.05)。吕晓婷等[11]通过研究上调miR-320a对注射用核糖核酸Ⅱ诱导的肝癌 Bel-7402细胞凋亡和迁移的影响，发现与正常细胞相比，肿瘤表达的miR-320a表达水平明显下调，与本次研究结果类似。前列腺癌患者中组织中miR-320a、miR-34b的表达与年龄、初始PSA无关，与Gleason评分、肿瘤大小、肿瘤分期、有无远处转移有关(P<0.05)；死亡组miR-320a、miR-34b表达水平显著低于存活组。分析其原因可能有：①前列腺癌的进展与SOX4基因有着紧密的联系，miR-320a可作用于SOX4的非翻译区[12]。miR-320a表达量增多时可抑制细胞的增殖和发育，从而抑制前列腺癌肿瘤的生长，相对表达量越低，肿瘤体积越大。②miR-34家族可通过调节下游靶基因的表达抑制癌细胞的作用。miR-34在多种肿瘤中表达水平均下降，其机制可能与基因启动子区甲基化有关。在前列腺癌患者的组织中的表达水平明显低于非前列腺癌者，可能与DNA损伤的自我修复有关[13]。miR-34b是调节P53的重要分子，P53的异常可引起miR-34b表达水平下降，进而导致miR-34b下游靶基因水平下降，导致肿瘤的增值。

总之，miR-34b、miR-320a低表达的前列腺癌患者病情更易恶化，患者预后差。