lincRNA-UFC1在肝细胞癌组织中表达的临床意义

李国涛 朱豫萌 张 盼 张国强

快速增殖原发性肝细胞癌的主要生物学特征之一,是导致患者预后差的重要原因。研究肝细胞癌细胞快速增殖的机制对改善患者预后具有重要的临床意义。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一类不编码蛋白的RNA，广泛存在于真核生物中，其作用是调控基因表达。了解lncRNA的基因调控方式，研究疾病发生机制，为临床治疗有望提供新的靶点[1-2]。目前lncRNA成为研究癌症发病机制的热点，本文研究肝细胞癌组织以及肝细胞癌患者血清中lincRNA-UFC1的表达水平，以期为临床诊断、指导治疗提供参考。

1 材料与方法

1.1 研究对象

2016年1月至2019年1月，选择在医院治疗的原发性肝细胞癌患者的68例的石蜡标本进行研究，其中男性52例，女性16例，年龄43～71岁，平均(54.9±8.1)岁。所有患者均经病理证实为肝细胞癌；Edmondson分级：Ⅰ、Ⅱ级16例，Ⅲ、Ⅳ级52例；BCLC分期：A期48例，B期13例，C期5例，D期2例；手术治疗，术前未进行其他相关治疗。本研究经过医院医学伦理委员会同意。

1.2 检测方法

应用原位杂交的方法检测68例肝细胞癌组织以及其相对应的癌旁组织中lincRNA-UFC1水平的表达。肝细胞癌组织脱水、浸蜡、包埋，切片5 μm。石蜡经二甲苯、梯度酒精脱蜡水化，切片置入3% H2O2中10 min，灭活内源性过氧化物酶，无菌蒸馏水洗涤3次。暴露lncRNA核酸片段，后固定，预杂交，杂交，洗涤，加封闭液，滴加生物素标记的鼠抗地高辛，滴加SABC，滴加生物素化过氧化物酶，DAB显色，苏木精染核，梯度酒精脱水，二甲苯透明，封片，显微镜下观察。染色强度判断：0分为无色，1分为淡黄色，2分为棕黄色，3分为棕褐色；阳性细胞数计分：1分为1%～10%，2分为11%～50%，3分为51%～75%，4分为>75%；得分为染色强度积分+阳性细胞数积分；得分≥3分为高表达，<3分为低表达。

1.3 分析方法

比较癌组织与癌旁组织lincRNA-UFC1表达水平，比较不同临床病理参数患者癌组织中lincRNA-UFC1表达水平。

1.4 统计学处理

数据分析采用SPSS 17.0统计学软件。计数资料用百分比或者例数表示，用χ2检验。P<0.05为差异显著。

2 结果

2.1 肝细胞癌组织与癌旁组织中lincRNA-UFC1表达水平比较

癌组织中lincRNA-UFC1高表达率显著高于癌旁组织，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 肝细胞癌组织与癌旁组织中lincRNA-UFC1表达水平比较(例，%)

2.2 不同临床病理参数患者肝细胞癌组织中lincRNA-UFC1表达水平比较

无包膜、AFP>20 ng/ml、有门静脉癌栓、癌肿直径>5 cm、BCLC分期B+C+D患者癌组织中lincRNA-UFC1高表达率更高，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 不同临床病理参数患者肝细胞癌组织中lincRNA-UFC1表达水平比较(例，%)

3 讨论

90%的原发性肝细胞癌是肝细胞肝癌,具有发病率高、预后差的特点。长链非编码RNA属于功能性RNA，转录长度大于200nt，发挥调控基因的作用，参与生理、病理过程。目前发现的参与哺乳动物基因活动的lncRNA有上千个。最初发现lncRNA时认为其无生物学功能。但随着研究的深入，发现许多lncRNA有功能，调控染色体的修饰，转录激活、干扰等[3-6]。lncRNA调节蛋白编码基因，表达异常与疾病发病有关。许多发生基因沉默的抑癌基因均可转录lncRNA，诱导癌症的发生[7-10]。

lncRNA与多种疾病相关，例如癌症、心脏病、阿尔茨海默病、牛皮鲜、脊髓小脑共济失调症、X染色体易损综合征等[11]。研究显示过表达lincRNA-UFC1的癌细胞增殖能力明显增强，癌细胞克隆形成能力明显增强[12]。过表达lincRNA-UFC1的肝细胞癌细胞皮下瘤的增殖能力增强[13-15]。lincRNA-UFC1过表达的肝细胞癌细胞G0/G1期的比例明显下降,而S期的比例明显升高,癌细胞促细胞周期进展蛋白cyclin D1、CDK4、CDK6表达增加。过表达lincRNA-UFC1癌细胞株凋亡比例降低。lincRNA-UFC1沉默表达的癌细胞中促凋亡蛋白水平下降。lincRNA-UFC1结合RNA结合蛋白HuR(属于果蝇胚胎致死异常视觉家族，ELAV)发挥调节β-catenin水平。癌组织中lincRNA-UFC1与β-catenin mRNA表达呈正相关关系。癌细胞株中,lincRNA-UFC1上升与β-catenin表达水平增加呈正相关。研究显示miR-34a与lincRNA-UFC1直接结合并下调其表达。癌组织中lincRNA-UFC1与miR-34a表达呈负相关关系，miR-34a可以通过缩短lincRNA-UFC1的半衰期来调控lincRNA-UFC1的表达水平。本次研究结果显示，肝细胞癌组织中lincRNA-UFC1呈高表达，并且与 Edmondson病理学分级、是否有包膜、AFP水平、门静脉血栓、癌肿直径、BCLC分期有关。提示lincRNA-UFC1参与了肝细胞癌的发生与发展。曹传辉[16]研究lincRNA-UFC1在肝癌发生发展中的作用以及机制，结果显示其在肝癌组织中呈高表达，可以作为预测肝癌患者预后的1个有价值的分子标志物，其通过诱导肝癌细胞周期进展及抑制肝癌细胞凋亡促进肝癌细胞增殖，可以与RNA结合蛋白HuR直接结合，上调β-catenin的表达，进而促进肝癌细胞增殖。曹传辉的研究结果与本次研究结果相似。本次研究的不足之处是未能对其作用机制进行分析，期待在今后的工作中，增加文献阅读，收集相关资料，进一步分析。

综上所述，肝细胞癌组织中lincRNA-UFC1高表达率更高，其高表达与是否有包膜、AFP水平、是否有门静脉癌栓、癌肿直径、BCLC分期有关。