GLUT-1、VEGF表达与鼻咽癌发生发展及MVD的关系

张媛媛 陈选英 薛晓会

临床上鼻咽癌的发生，能够导致患者近期病情进展速度的显著加快，增加了鼻咽癌患者远期的病死风险[1-2]。临床上对于鼻咽癌的发生机理的研究，可以为疾病的诊疗及预后随访提供参考。葡萄糖转运蛋白1(GLUT-1)的表达上升，能够通过提高葡萄糖转运蛋白的激活程度，促进癌细胞对于ATP的能量利用代谢，最终促进肿瘤细胞的持续性自我增殖[3]；血管内皮细胞生长因子(VEGF)是血管内皮诱导生长因子，其对于肿瘤新生血管的形成促进作用，能够提高肿瘤病灶的血流灌注量，提高肿瘤细胞的血氧供应程度，最终影响肿瘤细胞的持续性异常分裂过程[4]。部分研究者探讨了VEGF在鼻咽癌患者病灶组织中的表达情况，认为在鼻咽癌患者中，VEGF蛋白的表达浓度可明显上升[5]，但缺乏对于GLUT-1、VEGF的表达与鼻咽癌患者体内微血管密度(MVD)的关系分析。为了揭露GLUT-1、VEGF的表达与鼻咽癌患者的病情关系，从而为临床上鼻咽癌的诊疗提供参考，本次研究选取我院病理中心收集的80 例鼻咽癌组织标本，探讨了GLUT-1、VEGF蛋白的表达情况。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取我院2017年5月至2019年10月收集的80例鼻咽癌组织标本(鼻咽癌组)及其癌旁组织(对照组)。入选标准：①鼻咽癌的诊断标准参考中华医学会制定的标准[6]；②所有标本均为手术后获取；③手术前患者未接受放化疗、免疫学治疗、内分泌治疗；④本研究符合《赫尔透辛基宣言》相关医学伦理规定，经我院医学伦理委员会批准，对研究对象的各项资料严格保密。排除标准：①合并其他部位恶性肿瘤的患者；②未经病理学检查确诊；③资料缺失；④伴有风湿免疫系统疾病。其中男性60例、女性20例，年龄44～75岁，平均(55.2±9.8)岁；临床分期：Ⅰ期20例、Ⅱ期25例、Ⅲ期30例、Ⅳ期5例；浸润深度：T1～T2 48例、T3～T4 32例；病灶最大径≥3 cm 48例、病灶最大径<3 cm 32例；淋巴结转移阳性43例。

1.2 免疫组化染色技术

免疫组化结果判定：GLUT-1蛋白阳性染色表达于细胞膜或细胞质中，VEGF蛋白阳性染色表达于细胞膜中，两种蛋白的阳性染色呈黄色、棕黄色、褐色表达。①依据染色的程度分为：未染色(0分)、仅仅淡黄色染色(1分)、棕黄色染色(2分)、染色呈褐色、黑色(3分)；②根据染色的细胞占比结果：占比≤10%计分1分、占比范围11%～50%计分2分、占比范围51%～75%计分3分、占比>75%计分4分，染色程度与阳性细胞计分之乘积<3分为阴性、≥3分为阳性。石蜡切片采用二甲苯进行脱腊至水，5%的双氧水常温在孵育10 min，采用磷酸盐缓冲液孵育5 min，蒸馏水冲洗3次，每次5 min，5%的山羊血清抗体封闭10 min，不冲洗，滴加一抗(购自abcum公司 批号：20119304 浓度：1∶500)，4 ℃冰箱孵育过夜，蒸馏水冲洗3次，每次5 min，滴加生物素标记好的二抗(购自北京康泰生物 批号：20104856 浓度：1∶1000)，37 ℃孵育30 min，蒸馏水冲洗3次，每次5 min，滴加第二代辣根酶标记的工作液体，37 ℃孵育10 min，蒸馏水冲洗3次，每次5 min，显色之后采用酒精脱水、二甲苯透明、树胶封片，镜下观察。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 鼻咽癌组织与鼻咽正常组织中GLUT-1蛋白、VEGF蛋白表达差异

鼻咽癌组织中GLUT-1蛋白、VEGF蛋白阳性表达率分别为71.25%、62.50%，均显著高于对照组标本中的30.00%、25.00%，差异具有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 鼻咽癌组织与鼻咽正常组织中GLUT-1蛋白、VEGF蛋白表达差异(例，%)

2.2 鼻咽癌组织GLUT-1蛋白、VEGF蛋白表达与临床病理学特征的关系

鼻咽癌组织中的GLUT-1蛋白、VEGF蛋白阳性表达率在不同临床分期、不同淋巴结转移情况的组织中比较，差异均具有统计学意义(P<0.05)；在不同病灶大小、不同浸润深度的组织中比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表2，表3。

表2 GLUT-1蛋白与鼻咽癌病理特征的关系(例，%)

表3 VEGF蛋白与鼻咽癌病理特征的关系(例，%)

2.3 不同GLUT-1蛋白、VEGF蛋白表达的鼻咽癌组织中MVD计数比较

GLUT-1蛋白、VEGF蛋白阳性表达鼻咽癌组织中的MVD计数均显著高于阴性表达的鼻咽癌组织，差异具有统计学意义(P<0.05)，见表4，表5。

表4 GLUT-1蛋白阳性与阴性表达组织中MVD计数比较

表5 VEGF蛋白阳性与阴性表达组织中MVD计数比较

3 讨论

长期吸烟、HPV病毒感染等内外环境诱导的鼻粘膜上皮细胞的损伤，能够在异常增殖分裂过程中增加鼻咽癌的发生风险[7]。临床上鼻咽癌的发生总体呈现出了高发态势和年轻化的发病趋势，长期的鼻咽癌病情进展，能够导致患者远期总体生存时间的显著缩短[8]。部分研究者报道的鼻咽癌的5年内病死率可超过15%以上，同时其5年内的复发或者远处转移的风险可超过20%以上[9]。在研究鼻咽癌发病机理的过程中，越来越多的研究关注到肿瘤蛋白在恶性肿瘤发生过程中的价值。虽然有研究探讨了上皮非特异性肿瘤标志物对于鼻咽癌病情评估的非标注作用，但依靠普通非特异性肿瘤标志物评估鼻咽癌病情的灵敏度及可靠性均较低[10]。而通过寻找可靠而高灵敏度的肿瘤病情评估指标，能够在揭露鼻咽癌发病机理的同时，为临床上鼻咽癌的诊疗提供临床方面的参考。

GLUT-1是葡萄糖转运相关蛋白，其能够通过运载葡萄糖蛋白，提高癌细胞对于葡萄糖氧化呼吸链的吸收利用速率，最终影响到肿瘤细胞的增殖过程。GLUT-1对于葡萄糖转运体结构的调控作用，能够影响到肿瘤细胞膜上受体的激活程度，提高肿瘤细胞内第二信使的上调水平；VEGF作为生长因子家族成员，其能够通过影响到血管内皮细胞的损伤修复过程，加剧肿瘤新生血管的形成速度，最终参与到恶性肿瘤的发生发展中[11]。已有的现阶段研究主要探讨了VEGF对于鼻咽癌细胞的生长影响，认为VEGF能够显著影响到鼻咽癌细胞的浸润过程[12]，但缺乏对于GLUT-1、VEGF的表达与MVD的关系分析。

本次研究中免疫组化的相关探讨发现，在鼻咽癌病灶组织中，GLUT-1、VEGF蛋白的表达阳性率水平明显的上升，高于良性病变组，统计学差异显著，表明GLUT-1、VEGF蛋白的高表达能够显著影响到鼻咽癌的病情进展。GLUT-1、VEGF的蛋白高表达，能够在癌基因的激活、葡萄糖代谢转运、肿瘤血管的重塑化等方面发挥作用，从而最终影响到鼻咽部恶性肿瘤的发生。例如有其他研究者也发现，在发生了局部淋巴结转移的患者中，鼻咽癌病灶组织中GLUT-1蛋白的表达阳性率可上升25%～55%，同时GLUT-1蛋白的表达还与鼻咽癌患者远期的总体生存时间有关[13-14]。在探讨GLUT-1、VEGF蛋白的表达与鼻咽癌患者临床病理特征的关系时，发现在不同的临床分期或者是否发生淋巴结转移的患者中，GLUT-1、VEGF蛋白的表达具有显著的差异，提示了GLUT-1、VEGF蛋白的表达能够影响到鼻咽癌患者的临床病理特征进展。GLUT-1对于鼻咽癌临床分期和淋巴结转移的影响，在于其能够影响到癌细胞膜上ATP控制的膜离子通道蛋白的开放程度，提高了肿瘤细胞的浸润和粘附能力，最终促进了临床分期和淋巴结转移的发生；VEGF的高表达对于鼻咽癌临床病理特征的影响，在于其能够提高病灶组织细胞的血流灌注量和血氧水平，从而影响到鼻咽部肿瘤的淋巴结浸润和侵犯过程[15]。MVD是评估肿瘤病灶血管形成的相关指标，MVD的过度上升能够显著增加远期肿瘤复发和转移的风险，GLUT-1、VEGF蛋白阳性表达的鼻咽癌组织中的MVD计数均明显上升，提示了GLUT-1、VEGF的表达还能够影响到肿瘤血管的分布密度。

综上所述，鼻咽癌组织中GLUT-1、VEGF蛋白表达上调，与肿瘤发生发展及微血管形成均具有一定的关系。但关于GLUT-1、VEGF蛋白影响MVD表达的具体机制仍然需要进一步的探讨。