耳叶黑柴胡的生药学鉴别研究

张 妤，郝 娟，蔡翠芳

(1.山西药科职业学院，山西 太原 030031；2.山西省太原市食品药品检验所，山西 太原 030001)

耳叶黑柴胡(Bupleurum smithii var. Auriculatum)[1]为伞形科多年生草本植物，主要分布于山西忻州地区[2]，以宁武、神池、岢岚等地较为多见，生长于海拔1500～2400 m的山坡草地、路旁、疏林等地。耳叶黑柴胡中文名出自于《植物分类学报》1974版，由于与柴胡(Bupleurum Radix)分布区域相近，外观形态相似，致使山西多地区误将耳叶黑柴胡采集加工作柴胡入药。至今未见有对耳叶黑柴胡药材的系统研究报道。为澄清药源，本试验对耳叶黑柴胡的性状、显微、薄层色谱进行较为系统的研究，为其区分柴胡和耳叶黑柴胡提供依据，也为耳叶黑柴胡的开发利用提供参考。

1 实验仪器与材料

1.1 仪器

奥林巴斯DP73显微镜；KQ-250DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；DE-200g高速万能粉碎机(浙江红景天工贸有限公司)；梅特勒ML503电子天平；硅胶G薄层板(青岛海洋化工厂)。

1.2 材料

耳叶黑柴胡10批样品采集于山西省宁武县、神池县、岢岚县，见表1，经山西药科职业学院蔡翠芳教授鉴定，为耳叶黑柴胡Bupleurum smithii var. Auriculatum 的干燥根和根茎。所采集标本均保存于山西药科职业学院生药标本室；柴胡皂苷a、d对照品从山西省药品检验所(中国食品药品检定研究院，批号:110777-201711，110778-201711)购买；其余试剂均为分析纯。

表1 耳叶黑柴胡样品采集信息

2 实验方法与结果

2.1 性状鉴别

耳叶黑柴胡根多呈圆锥形，主根长1～5cm，直径0.2～0.6cm，略弯曲，多无分枝。根茎近圆形，较长，有稀疏的不定芽，多排成2列。顶端常残留茎基1～5个，表面黑褐色，有纵沟，粗糙。具突起的支根痕，皮孔状突起不明显。质稍软，容易折断。耳叶黑柴胡断面较平坦，皮部呈淡棕色，木部呈黄白色，味微苦辛。

2.2 显微鉴别

常规徒手切片。将耳叶黑柴胡根、根茎横切面切成薄片置于载玻片上，逐滴加入水合氯醛试液并加热处理，透化后，浓盐酸、间苯三酚染色，滴加稀甘油，盖上盖玻片，备用。将药材粉碎(40目筛)，水合氯醛装片，备用。

2.2.1根横切面

主根类圆柱形。木栓层为10～70余列细胞；木栓细胞呈扁平长方形，木栓形成层2～3列细胞，细胞扁平，长径约为短径4倍。栓内层有4～7层切向延长的薄壁细胞，油室断续排列成2层，油室周围分泌细胞多为6个，近圆形，可见少量黄色油状物。韧皮部较窄，其中油室较多，常连成带状，排列成2～6层，内含黄色油状物。形成层成凹凸不平的环，不甚明显。木质部呈放射状，导管多数，直径8～54μm,大型导管2～3个呈切向排列，小型导管1～2号个呈径向排列。

1.木栓层 2.油管 3.皮层 4.韧皮部 5.形成层 6.木质部 7.导管

2.2.2根茎横切面

根茎木栓层为20～45余列扁平细胞，木栓形成层2～3列细胞，细胞扁平，长径约为短径4倍。栓内层内侧薄壁细胞切向延长，多为3～7层，油管断续排列成2层，油管周围分泌细胞多为6～15个，内含黄色油状物。韧皮部中可见油管分布，油管周围分泌细胞多为6～15个，多数可见其中黄色油状物。形成层成成凹凸不平的环，不甚明显。木质部呈放射状排列，导管明显。髓部较窄，由多个薄壁细胞组成，多破裂。

1.木栓层 2.皮层 3.油管 4.韧皮部 5.形成层 6.木质部 7.髓

2.2.3药材粉末

耳叶黑柴胡的粉末为棕褐色；木纤维3～6μm，散在；油管多，60～118μm，含淡黄色条状分泌物；导管多为网纹，直径11～33μm；木栓细胞黄棕色，长34～64μm，宽20～27μm，表面观呈类长方形或多角形，壁稍厚。

a.网纹导管(×400)

2.3 薄层色谱鉴别[3]

取上述10批耳叶柴胡、北柴胡对照药材各0.5g，加入20mL的甲醇，超声(200W，40kHz)处理10min。将超声后的滤液滤过，并浓缩滤液至5mL；另取试验对照品柴胡皂苷a、d，加甲醇制成对照品混合溶液(0.5mg/mL)。依据中国药典(2020年版)薄层色谱法(通则0502)试验[4]，吸取耳叶柴胡、北柴胡对照药材、对照品混合溶液各5μL，点于硅胶G薄层板上，将以8∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水作为展开剂展开[5]，展开后取出，晾干，以2%对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液作为其显色剂，并在60℃加热处理直至斑点显色清晰[5]，随后在波长为365nm紫外光灯下检视。10批耳叶黑柴胡的薄层色谱与对照品位置基本一致，显相同斑点，与北柴胡薄层色谱存在显著差异。

a.柴胡皂苷a、d对照品 1～10.10批耳叶黑胡 11.北柴胡

3 讨论

耳叶黑柴胡性状鉴别要点：根呈圆锥形，多无分枝。表面黑褐色，粗糙。皮孔状突起不明显。顶端残留茎基1～5个，质稍软，易折断，断面较平坦，皮部呈浅棕色，木部呈淡黄白色，味微苦辛。显微鉴别要点：根、根茎木栓层均是排列整齐紧密、扁平长方形木栓细胞。油管断续排列成2层，油管周围分泌细胞多为6个，形成层成凹凸不平的环，不甚明显。网纹导管多见。薄层色谱以配比为8∶2∶1的乙酸乙酯-乙醇-水作为其展开剂，10批样品在相应的位置上显相同斑点，且与北柴胡薄层色谱存在显著差异。

耳叶黑柴胡在我省神池、宁武等县药用已有200多年的历史[6]，本试验从忻州地区采集了10批供试品使用现代仪器对其原植物形态、药材性状及显微进行详细对比研究，为鉴别耳叶黑柴胡与北柴胡提供依据。特别是随着柴胡野生资源逐渐减少，两种药材能否互相替代使用还需进一步探讨研究。