红枣枸杞浸泡酒对小鼠润肠通便功能的研究

胡 博，唐晓姝，陈雪梅，张白曦*

（1.江南大学 国家功能食品工程技术研究中心，江苏 无锡 214000；2.江南大学 食品学院，江苏 无锡 214000）

随着人们饮食结构、生活方式和工作方式的改变，便秘已成为人们生活中的常见问题[1-5]。流行病研究发现，女性慢性便秘病率高于男性[6]，且便秘的发生率随年龄增加而提高，特别是65岁以上便秘发生率明显增高。我国成年人患病率在7.0%～20.3%[7]。老年人慢性便秘总患病率为11.5%，其中年龄在60～65岁患病率为8.7%，而85岁以上的老人患病率则高达19.5%[8]。便秘是临床常见的复杂症状，现代很多人往往容易忽视便秘，但是便秘对人的身体健康有着很大的影响和损害[9]，便秘会导致人体内毒素积累，降低五脏功能，甚至可能导致其他疾病的发生[10]。

红枣含有蛋白质、糖类、有机酸、氨基酸、维生素A、维生素C等丰富的营养成分[11]。红枣不但是美味果品，还是滋补良药，有强筋壮骨、补血行气、滋颐润颜之功效[12-14]。枸杞味甘、性平，富含枸杞多糖及甜菜碱等活性物质，是一种传统的“药食兼用”原材料，其活性成分可增强免疫力、抗肿瘤、防衰老、增加造血功能、抗脂肪肝等[15]。

浸泡酒作为一种传统的食品加工工艺，制作简便，成本低廉，一直以来得到广泛的应用。信维平[16]从果蔬中分离出抗氧化物质，可对饮料调味和作为预防癌症等疾病的功能性食品。农仲文等[17]通过对山竹果皮中活性物质做浸泡酒的研究，发现酒中活性成分高，抗氧化作用好。白酒是很好的浸提溶剂，可将红枣、枸杞中的有效成分充分地提取出来，并以适当的比例通过恰当的方式被人们摄入体内发挥其作用。以红枣、枸杞为原料，蒸馏白酒为基酒制备浸泡酒，研究其润肠通便的功效，为进一步开发具有润肠通便功能的浸泡酒提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

红枣、枸杞、浓香型蒸馏白酒（酒精度65%vol）：市售；洛哌丁胺片（每片含洛哌丁胺2 mg）：西安杨森制药公司；活性炭（粉状）：天津市科密欧化学试剂有限公司；阿拉伯树胶粉、低聚木糖：国药集团化学试剂有限公司；植物总酚测试试剂盒（比色法）、总黄酮测试试剂盒（比色法）：南京建成生物工程研究所。

1.2 仪器与设备

UV-2600 紫外可见分光光度计：日本岛津公司；5830R型离心机：德国Eppendorf公司。

1.3 方法

1.3.1 样品处理方法

以红枣、枸杞为原料，洗净晾干，以料液比1∶10（g∶mL），用浓香型蒸馏白酒浸泡在陶罐中，加盖密封后25 ℃避光贮存6个月，得到酒精度为60%vol的浸泡酒受试物。

张连长脸板得像块湿木头:“下雨只不过是下雨,下再大的雨也还是下雨,不是下刀子!你们不是那些插队知青!他们一插队,不想当农民那也是农民了!你们叫兵团战士!是战士就得有点战士的样子!没有口令擅自行动,不是好战士!跑到仓库去的,都要受处分!”

1.3.2 试剂配制方法

洛哌丁胺混悬液的配制：①小肠运动实验：取洛哌丁胺片14 mg（7 片），用研钵研碎呈粉末后加蒸馏水至25 mL，临用前配制。②排便实验：取洛哌丁胺片26 mg（13 片），用研钵研碎呈粉末后加蒸馏水至25 mL，临用前配制。

低聚木糖的配制：称取15.00 g低聚木糖粉，用蒸馏水定容至100 mL。

墨汁的配制：称取阿拉伯树胶10 g，加蒸馏水80 mL，煮沸至溶液透明，称取活性碳（粉状）10 g 加至上述溶液中煮沸3次，待溶液凉后加水定容至100 mL，于冰箱中4 ℃保存，用前摇匀。

1.3.3 受试物剂量确定方法

根据WOOD A M等[18]关于酒精摄入风险阈值的研究表明，全因死亡率与饮酒摄入量呈现正相关性，其最低风险摄入量为100 g/周（纯酒精）。换算为酒精含量60%vol的浸泡酒，则每日摄入量为30 mL。按照标准人体质量60 kg换算为本次小鼠每日灌胃剂量为5.0 mL/kg体质量[19]，作为本次实验的中剂量组。低剂量组灌胃剂量为2.5 mL/kg体质量。

美国心脏协会、癌症协会等组织建议的适度饮酒量为：女性每日酒精饮料摄入量不超过一份；男性每日酒精饮料摄入量不超过两份（一份标准酒精饮料含有约17.7 mL的纯酒精）[20]。按照标准人体质量60 kg换算为酒精含量60%vol的浸泡酒，则男性每日摄入量为59 mL。换算为本次小鼠每日灌胃剂量为10.0 mL/kg体质量，作为本次实验的高剂量组。

根据《保健食品检验技术与评价规范》[19]，对于含乙醇的受试样品，如果乙醇含量超过15%vol，允许将其含量降至15%vol。因此将浸泡酒及蒸馏酒的乙醇含量旋蒸降至15%vol，并调配至相应剂量。

1.3.4 动物分组方法

选取无特定病原体（specific pathogen free，SPF）级健康雄性BALB/c小鼠（18～22g）140只：由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，生产许可证编号：SCXK（沪）2017-0005，动物质量合格证编号：2015000556762。在屏障设施检疫室内预饲养5 d后，按动物体质量将动物随机分成小肠运动实验组和排便实验组，每个大组分成7个组，每组10只动物，即溶剂对照组（动物饮用水），模型对照组（洛哌丁胺），阳性对照组（低聚木糖1.5 g/kg体质量），浸泡酒低（2.5 mL/kg体质量）、中（5.0 mL/kg体质量）、高（10.0 mL/kg体质量）剂量组和蒸馏酒对照组（10.0 mL/kg体质量），灌胃剂量为0.1 mL/10 g，受试样品、溶剂蒸馏水均经口灌胃，连续7 d。

1.3.5 实验方法

（1）酒中功效成分的测定

糖含量测定：参照许亮[21]的方法进行测定；总酚含量、总黄酮含量的测定：试剂盒测试。

（2）小肠运动实验

便秘模型的建立：给受试样品7 d后，各组小鼠禁食不禁水20 h。模型对照组和3个剂量组灌胃给予盐酸洛哌丁胺5.2 mg/kg体质量，阴性对照组给等量蒸馏水。

墨汁推进率的测定：

给盐酸洛哌丁胺0.5 h后，剂量组灌胃给予含相应浓度受试样品的墨汁（含10%活性碳粉、10%阿拉伯树胶），阴性和模型对照组给墨汁灌胃。

25 min后立即脱颈椎处死动物，打开肠腔分离肠系膜，剪取上端自幽门、下端至回盲部的肠管，置于托盘上，轻轻将小肠拉成直线，测量肠管长度为“小肠总长度”，从幽门至墨汁前沿为“墨汁推进长度”，并记录数据。按下式计算墨汁推进率[19]：

该公式参照《保健食品检验技术与评价规范》润肠通便功能评价方法[19]，将墨汁推进率按照该公式进行换算后才能更准确的反应各剂量组间的差异情况。墨汁推进率需进行数据转换，X=Sin-1（X代表墨汁推进率的数据换算值，p为墨汁推进率，需用小数表示）。

（3）排便实验

便秘模型的建立：给受试样品7 d后，各组小鼠禁食不禁水20 h。模型对照组和3个剂量组灌胃给予盐酸洛哌丁胺10.0 mg/kg体质量，阴性对照组给蒸馏水。

排便时间、粪便粒数和粪便质量的测定：给盐酸洛哌丁胺0.5 h后，阴性对照组和模型对照组小鼠用墨汁灌胃，剂量组灌胃给予含相应浓度受试样品的墨汁，动物均单笼饲养，正常饮水进食。从灌墨汁开始，记录每只动物首粒排黑便时间、5 h内排便粒数及质量，记录时除去小鼠排出第一粒黑便前的粪便。

1.3.6 数据处理及结果判定

试验数据结果用SPSS 22.0软件进行方差齐性检验，满足方差齐要求的数据资料用单因素方差分析方法进行统计处理；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

2 结果与分析

2.1 红枣枸杞酒与蒸馏酒中总黄酮、总酚、总糖、粗多糖含量的比较分析

红枣枸杞酒和蒸馏酒中总黄酮、总酚、总糖、粗多糖含量的比较分析结果见表1。由表1可知，红枣枸杞酒中总黄酮含量约为蒸馏酒的4倍，总酚含量约为蒸馏酒的90倍，总糖含量为3.74 g/100 mL，乙醇沉淀多糖含量为0.200 g/100 mL，说明浸泡酒中含有较多的单糖和小分子糖。蒸馏酒中的总糖含量为0.009 57 g/100 mL，多糖未检出，说明蒸馏酒中仅有少量的单糖和小分子糖存在。由于红枣枸杞中的有效成分浓度较高，尤其是多糖含量较高，能促进肠道有益菌的增殖和所占比例，抑制肠道有害菌及腐败物质形成，可促进益生菌产生短链脂肪酸和短链有机酸，可降低肠道pH，促进肠蠕动，改善便秘[22]，推测红枣枸杞酒中的糖能够起到促进肠胃消化、润肠通便的作用。

表1 红枣枸杞酒和蒸馏酒中总黄酮、总酚、总糖、粗多糖含量的比较分析Table 1 Comparative analysis of total flavone,total phenol,total sugar and crude polysaccharide in jujube and wolfberry-soaked wine and distilled liquor

2.2 小肠推进率

实验期间，各组小鼠无死亡，生长情况良好，无腹泻等各种不良现象。由表2可知，模型对照组与空白组相比，小肠推进率显著降低（P＜0.05），说明建模成功；阳性对照组与模型对照组相比，小肠推进率显著增加（P＜0.05），说明实验体系可行；低、中剂量组、蒸馏酒对照组与模型对照组相比，小肠推进率无显著性差异（P＞0.05），高剂量组与模型对照组相比，小肠推进率显著增加（P＜0.05）。说明该红枣枸杞酒在高剂量浓度（10.0 mL/kg体质量）下可增加小肠推进率。

表2 红枣枸杞酒对小鼠小肠推进率的影响Table 2 Effect of red jujube and wolfberry-soaked wine on small intestinal propulsion rate of mice

2.3 首粒黑便排便时间

由表3可知，便秘模型对照组的首粒排黑便时间显著高于空白组（P＜0.05），说明便秘模型成立；阳性对照组与模型对照组相比，显著降低（P＜0.05），说明实验方案及实验体系可行。低剂量组与模型对照组相比显著降低（P＜0.05），且首粒黑便排便时间比阳性对照组少，说明该红枣枸杞酒在低剂量浓度下可缩短首粒黑便排便时间。中剂量组、蒸馏酒对照组与模型对照组相比无显著性差异（P＞0.05），高剂量组与模型对照组相比显著增加（P＜0.05），在缩短首粒黑便排便时间方面效果不明显。

表3 红枣枸杞酒对小鼠首粒黑便排便时间的影响Table 3 Effect of red jujube and wolfberry-soaked wine on the defecation time of the first black stool in mice

2.4 5 h内排黑便粒数

由表4可知，便秘模型对照组的5 h内平均排黑便粒数显著低于空白组（P＜0.05），说明便秘模型成立；阳性对照组与模型对照组相比，显著增加（P＜0.05），说明实验方案及实验体系可行。低、高剂量组与模型对照组相比显著增加（P＜0.05），排便频率明显升高，且与阳性对照组相比效果一致；中剂量组、蒸馏酒对照组与模型对照组相比无显著性差异（P＞0.05）。说明该红枣枸杞酒在低、高剂量浓度下可增加5 h内排黑便的粒数。

表4 红枣枸杞酒对小鼠5 h内排黑便粒数的影响Table 4 Effect of red jujube and wolfberry-soaked wine on the number of black stools excreted by mice within 5 h

2.5 5 h内排黑便质量

由表5可知，便秘模型对照组的5 h内排黑便质量显著低于空白组（P＜0.05），说明便秘模型成立；阳性对照组与模型对照组相比，排黑便质量显著降低（P＜0.05），低、中剂量组、蒸馏酒对照组与模型对照组相比无显著性差异（P＞0.05），高剂量组与模型对照组相比显著增加（P＜0.05），且排黑便质量略低于阳性对照组。说明该红枣枸杞酒在高剂量浓度（10.0 mL/kg体质量）下可增加5 h内排黑便的质量。

表5 红枣枸杞酒对5 h内排黑便质量的影响Table 5 Effect of red jujube and wolfberry-soaked wine on weight of black stools excreted by mice within 5 h

3 结论

本实验采用实验性便秘模型小鼠评价了红枣枸杞浸泡酒的通便功能。结果表明，红枣枸杞酒在高剂量浓度下与便秘模型对照组均有显著性差异（P＜0.05），而蒸馏酒对照组与便秘模型组无显著性差异（P＞0.05），进一步证实通便效果来自于浸泡过程中红枣与枸杞溶出的功效成分。结合红枣枸杞浸泡酒的功效成分分析，红枣枸杞酒中总酚及总黄酮相较蒸馏酒中含量较多，可影响小鼠的胃肠蠕动及排便功能。但是因实验要求含酒精类的样品需将酒精度缩至15%vol以下进行，因此需通过旋蒸手段将各剂量组酒精含量进行统一，推至一般人群的每日摄入量下能否表现出润肠通便效果还需进一步探讨，总之，枸杞红枣浸泡酒与蒸馏酒对照组相比，其功效优势更明显。