新生仔猪丁型冠状病毒腹泻病例诊断报告

陈慧婷，徐翠，黎家祥，花象柏

（南昌德尔塔生物技术有限公司，江西南昌330013)

猪丁型冠状病毒又称δ（德尔塔）冠状病毒（PDCoV),该病毒于2012年由香港大学Woo等从169份猪粪样品中检出，检出率约为10.1%,美国于2014年检出[1]。2015年，从江西暴发的新生仔猪腹泻中，也检出了PDCoV[2]。2021年2月，从江西省南昌市新建区西山镇某养猪户所送的新生仔猪腹泻病料检测出PDCoV为阳性，猪流行性腹泻病毒（PEDV)呈阴性，从而确定该养猪户新生仔猪腹泻由PDCoV引起，现诊疗情况报告如下。

1 发病情况

该养猪户饲养母猪100头左右，其中生产母猪60余头。从2020年7月份开始，持续出现新生仔猪腹泻，先后30窝仔猪发病。新生仔猪腹泻多从产后3～4日龄开始，7d以内仔猪发生腹泻的多以死亡为转归，耐过7d不死的则可存活下来，每窝残存仔猪数0～4头不等。当时未作实验室检测，认为由PEDV引起，先后给母猪免疫过猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联灭活苗和猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻和猪轮状病毒三联活疫苗各2次，新生仔猪腹泻发病没有减少。

2 临床症状

新生仔猪于3～4日龄突然发病，先呕吐，后水样腹泻，发病猪经过3～4d脱水死亡。前期体温不升高，后期有些下降。

3 剖检变化

剖检2头死亡仔猪，胃内有大量新鲜乳白色凝固乳汁，肠壁变薄，肠内有多量淡黄色米汤样内容物，其余脏器无肉眼可见变化。

4 实验室检测

4.1 检测样品采集

2头剖检仔猪均取下列病料。一是内脏病料，包括扁桃体、肺、脾、肝、肾、和肺门、肝门、腹股沟和肠系膜等部位的淋巴结等组织少许，用作发病诱因检测；由于剖检病例看不到猪瘟和猪伪狂犬病的病变，故只作猪蓝耳病病毒（PRRSV）的检测。二是结扎5～10cm的小肠一段，用作新生猪最常见的两个发病原因PEDV和PDCoV的检测。

4.2 实验试剂

RNA提取试剂盒来自TAKARA公司，反转录试剂盒及其他试剂来自天根生化科技（北京）有限公司。

4.3 实验方法

按试剂盒说明书操作，先从采集的样品提取RNA，再以RNA为模板，反转录扩增cDNA，然后以cDNA为模板，进行PCR扩增，最后用PCR产物进行核酸电泳，观察实验结果。

4.4 实验结果

内脏病料相关病原PRRSV和肠道病料相关病原PEDV及PDCoV的检测结果见表1：

表1 内脏病料检测结果

5 讨论

我国自2010年暴发新生仔猪腹泻以来，给养猪业造成了巨大的经济损失。关于引起新生仔猪腹泻的病原研究，已确定主要病原为PEDV,其次为PDCoV。但是，由PEDV和PDCoV这两种病原引起的新生仔猪腹泻，在流行病学、临床症状和剖检病变等方面都极为相似，无法在临床上对两者进行鉴别。本次发病的新生仔猪腹泻，一直当作PED来处理，发现不奏效后，才送病料至实验室进行检测。对所送两个病例的检测结果表明，PEDV均为阴性，PDCoV均为阳性；在发病诱因上，PRRSV的检测结果也为阴性；故可确定本次新生仔猪腹泻，由单一PDCoV病原引起。

美国于2014年暴发新生仔猪腹泻，在腹泻样品中PDCoV的检出率达30%[2]。贺冬生等报道[3]，华南某猪场有母猪2 000头，3～7日龄新生猪发生腹泻，发病率90%,死淘率90%以上，经实验室检测猪传染性胃肠炎病毒、PEDV和猪轮状病毒等均为阴性，PDCoV为阳性，从而确定该猪场的新生仔猪腹泻由PDCoV引起。D.Song等报道[2]，在中国江西暴发的新生仔猪腹泻中检出PDCoV,从2012年11月到2015年3月，所收集的新生仔猪腹泻样品中，PDCoV的单一感染率为33.71%。逄凤娇等报道[4]，华东地区猪场2014～2015年收集的43份腹泻样品检测，PDCoV阳性率为18.60%。陈建飞等分离出国内首株丁型冠状病毒[5]。由此看来，PDCoV确成为引起新生仔猪腹泻的重要病原之一。鉴于目前尚无控制PDCoV的疫苗，故开发防控PDCoV所致新生仔猪腹泻的疫苗迫在眉睫。