孕产妇Rh抗原表型分布及其在Rh新生儿溶血病预防中价值探讨
2021-05-25强新晨杨华莹邵俊良
强新晨,杨华莹,邵俊良
(南京医科大学附属无锡人民医院,江苏 无锡214023)
新生儿溶血病(Hemolytic disease of newborn,HDN)是由于母婴红细胞血型不合导致母体产生针对胎儿红细胞血型抗原的同种免疫性抗体引起的疾病。HDN多见于ABO血型和Rh血型不合导致,其他血型系统不合导致的新生儿溶血病较少见。虽然ABO血型不合导致的HDN最为常见,但由于Rh血型不合导致的HDN较其他血型系统更为严重[1-2]。Rh-HDN易导致宫内胎儿贫血、新生儿黄疸甚至核黄疸的发生,治疗不及时后果严重、甚至导致患儿死亡[3],出生后受到母体免疫性抗体干扰容易造成配血困难[4],因此Rh-HDN越来越引起重视。本研究对孕妇Rh抗原表型分布及新生儿Rh表型、新生儿溶血病试验、红细胞不规则抗体特异性鉴定及效价测定进行回顾性分析,从而为Rh-HDN临床预测、诊断和治疗提供参考依据,现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
南京医科大学附属无锡人民医院2018年5月至2020年8月孕产妇共8 801例,年龄范围为19-42岁,平均年龄(27.4±5.6)岁;同期确诊为Rh-HDN 患儿12例为研究对象,患儿入院时无合并其他重大疾病,其中男患儿7例,女患儿5例,日龄为2-15天,均留取外周血EDTA-2K抗凝标本2 ml。本研究符合《世界医学协会赫尔辛基宣言》相关要求,并获得南京医科大学附属无锡人民医院伦理委员会许可。
1.2 仪器与试剂
Rh血型抗原微柱凝胶检测卡和抗人球蛋白微柱凝胶检测卡(长春博迅生物技术公司生产)及血型专用孵育器、离心机;不规则抗体筛选红细胞(江阴力博医药生物技术公司生产)和不规则血型抗体鉴定红细胞(上海血液生物医药公司生产);2-me(Base公司生产)。
1.3 方法
1.3.1Rh抗原表型检测
取Rh血型抗原检测卡每孔加入1%待检红细胞悬液50 μl,离心后,根据待检红细胞与检测卡RhC、c、D、E、e单克隆抗体反应格局,判读Rh血型表型结果。
1.3.2新生儿溶血病试验
直接抗人球试验(DAT):取患儿洗涤后红细胞做DAT;红细胞放散试验:洗涤后压积红细胞采用56℃热放散法,取放散液与不规则抗体筛选红细胞反应。游离试验和特异性抗体鉴定分别使用患儿血浆和放散液与不规则抗体筛选红细胞和不规则抗体鉴定谱红细胞反应,依据《全国检验操作规程》[5]判定结果以及红细胞抗体特异性。DAT或游离试验仅单项阳性,判为可疑Rh-HDN;如为2项阳性或者放散试验单项阳性判为Rh-HDN。
1.4 Rh血型抗体效价测定
取2-me裂解后患儿血浆依次倍比稀释,采用抗人球蛋白微柱凝胶卡分别加入Rh抗体对应抗原红细胞,测定其抗体效价。
2 结果
2.1 8 801例产妇 Rh血型表型分布
8 801例孕产妇中,RhD阳性为8 760例、阴性41 例。8 760例RhD阳性孕产妇Rh表型分布为:CCee>CcEe>Ccee>ccEE>ccEe>CCEe>CcEE>ccee,CCDEE未检出,CCee和CcEe为优势表型,具体见表1。41例RhD阴性孕产妇中Rh表型分布为:Ccee>ccee>CCee=ccEe>CcEe,Ccee和ccee为优势表型,见表1。
表1 Rh 血型表型分布情况 [n(%)]
2.2 Rh-HDN表型分布和血清学情况
12例Rh-HDN新生儿表型分布为:CcDee 5例(41.6%)、CcDEe 4例(33.3%)、CCDee 1例(8.3%)、ccDEE 1例(8.3%)、CcDee 1例(8.3%),见表2。通过谱细胞鉴定检出IgG抗-D 8例(66.7%),效价为32(3例)、64(3例)、128(2例),同时检出IgG抗-E 3例(25%),效价为64(2例)、512(1例),检出IgG抗-E合并抗-c 1例(8.3%),效价为32、16,D抗原以外抗体占总检出抗体33.3%(4/12),见表2。
表2 12例Rh-HDN表型及血清学结果
3 讨论
Rh血型系统是人类红细胞血型系统中除ABO血型系统以外最重要和最复杂的血型系统,其中D、C、c、E、e抗原是该系统最具有临床价值的抗原[6],随着血型检测理念的不断更新,以及D抗原逐渐纳入常规检测后,抗-D抗体导致相关免疫反应的风险逐渐降低。由于C/c、E/e抗原也具有较强免疫原性,孕妇可以因输血、妊娠等原因接受自身缺乏血型抗原的刺激,免疫应答后产生特异性同种免疫性抗体,该抗体可以通过胎盘屏障进入胎儿血液循环与红细胞抗原结合,导致溶血性免疫反应发生,有资料报道RhE/e和RhC/c相关的免疫反应分别达到14.0%和10.7%,抗D以外抗体已经成为影响临床血型血清学诊断的因素[7]。
应用Rh血型抗原检测卡(含有D,C,c,E,e抗原特异性抗体),可以获得18种Rh抗原表型。本组病例中,RhD阳性孕产妇中,E抗原阴性率为51.57%,c抗原阴性率为41.8%;RhD阴性孕产妇中E抗原阴性率为87.8%,C抗原阴性率为43.9%,东方人群中因抗原分布频率差异,抗E、抗c是最常见因妊娠和输血产生免疫性抗体[8-9]。RhD阴性孕妇ccee表型检出率达到39.1%,该表型受到不匹配抗原刺激产生免疫性抗体风险可达24.95%,发生同种免疫反应可能性较大[10-11]。Rh血型系统5个主要抗原中E、c抗原免疫原性仅次于D抗原[12],12例Rh-HDN共检出抗D、抗E、抗c 3种特异性抗体,其中抗D导致的HDN 8例(66.7%)和抗E导致HDN以及抗E合并抗c导致HDN共4例(33.3%),RhD阳性孕产妇中E、c抗原阴性率为51.57%和41.8%,RhD阴性孕产妇中E抗原阴性率达到87.8%,检出率与文献报道相似[13],E抗原母婴不合造成HDN占33.3%,抗E/c是引起D抗原以外Rh-HDN常见发生的因素。
夫妻双方Rh血型不合是导致Rh-HDN发生的主要原因,孕妇红细胞上缺乏丈夫红细胞上所含有的Rh血型抗原是该疾病发生的基础,如丈夫红细胞有相应抗原,胎儿有可能因遗传而获得相应血型抗原,刺激母体产生对应的免疫抗体,增加HDN发生的风险,通过对12例Rh-HDN患儿父母亲及新生儿表型及血清学结果分析显示,因双亲Rh血型抗原不相合,遗传父亲血型抗原的胎儿红细胞进入抗原阴性母体,免疫刺激后产生相应特异性抗体,抗体通过胎盘屏障进入胎儿血液循环,致敏胎儿红细胞,导致HDN发生,若父亲为纯合子发生几率更高,高效价免疫抗体加重患儿病情,易引发核黄疸发生。
目前,常规产前检查仅检测ABO血型和RhD抗原[14],RhD阴性孕产妇可能导致的HDN已经引起关注[15],RhD抗原以外HDN易忽视,随着国内生育政策的调整,由于妊娠次数增加或Rh其他抗原不配合输血,母亲接触胎儿Rh血型其他抗原导致的HDN几率不断提高[16-17],因此将Rh抗原分型检测纳入常规产前检查对预测该疾病的发生几率具有一定价值[18],尤其对有输血史、不明原因流产史、死胎、HDN既往史的孕产妇。为减少母婴Rh血型其他表型不合引起的同种抗体免疫,预防Rh-HDN的发生,有必要对孕妇和丈夫的Rh抗原表型检测,评估预测其发生率,对于夫妻双方Rh抗原表型不合的孕产妇,孕期连续监测不规则抗体筛查和效价,为制定科学合理预防胎儿Rh-HDN产前筛查方案提供依据。