老年胃癌患者血清转化生长因子-β1、核转录因子-κB、热休克蛋白60水平与幽门螺旋杆菌感染的相关性研究

李延卿，张 岱，张旭冉，顾亚娇，任伟宏

(1.河南中医药大学第一附属医院检验科，河南郑州 450000；2.河南中医药大学第一附属医院脾胃肝胆科，河南郑州 450000)

胃癌多见于老年群体，其发生、发展是多因素、多步骤、多阶段和多基因改变的过程，幽门螺旋杆菌感染(helicobacter pylori，Hp)感染参与胃癌的发生、发展[1-2]。胃癌并发Hp感染会增加治疗难度，给患者预后带来严重不利影响[3]。因此，抗Hp治疗越来越受临床重视。新近研究发现，转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)在恶性肿瘤的发生、发展中扮演重要角色，其表达增加可促进肿瘤的发生和进展[4]。核转录因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)所调控的基因在肿瘤发生、发展中均有参与，也会促进肿瘤细胞转移[5]。此外，有学者发现，随着Hp感染的加重，热休克蛋白60(heat shock protein 60，HSP60)表达水平明显升高[6]。鉴于此，本研究首次综合分析老年胃癌患者TGF-β1、NF-κB、HSP60水平与Hp感染的相关性，旨在为胃癌的临床治疗提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2017年2月至2019年8月我院92例老年胃癌患者作为研究对象，其中男58例，女34例；年龄60～83(71.57±5.71)岁；肿瘤直径2～9(5.42±1.70)cm；分化程度：高分化10例，中分化25例，低分化57例；浸润深度：黏膜下层33例，浆膜层59例；TNM分期：Ⅰ期9例，Ⅱ期28例，Ⅲ期30例，Ⅳ期25例；有淋巴结转移者70例，无淋巴结转移者22例；Hp感染患者77例，未感染患者15例。分化程度、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移判定均参照相关临床标准[7]进行。Hp感染根据13C检测结果判定[8]。

1.2 选例标准纳入标准：符合胃癌诊断标准[9]，经病理诊断确诊；首次确诊；自主行为能力良好；无沟通交流障碍；年龄≥60岁。排除标准：合并其他原发性恶性肿瘤者；伴有其他严重消化系统疾病者；严重心脑血管疾病患者；肺、肝、肾功能严重障碍者；血液系统疾病患者；检测前行放、化疗治疗者。

1.3 方法实验室指标检测方法：入组当天采集所有患者外周静脉血标本5 mL，以3 500 r/min转速离心处理5 min后取血清，置于-70 ℃冷冻室内待检。由专业检测人员采用上海永创医疗器械有限公司的酶标仪[批准文号：沪食药监械(准)字2013第2400984号]，以酶联免疫吸附试验检测血清TGF-β1、NF-κB、HSP60水平，试剂盒购自深圳市亚辉龙生物科技有限公司[批准文号：粤食药监械(准)字2009第2400353号]，检测操作均严格按照试剂盒说明书进行。

Hp感染程度评估方法：根据Hp的半定量分析法进行评估，采集胃黏膜组织标本，采用质量分数4%中性甲醛固定液固定，室温下静置6 h后常规行石蜡包埋、切片(厚度3 μm)，采用树胶封固后进行染色处理，采用400倍高倍镜观察Hp感染程度。无：组织切片染色后未见Hp；Ⅰ级：可见少量Hp，Hp分布<标本全长的1/3；Ⅱ级：Hp分布在标本全长的1/3～2/3之间；Ⅲ级：Hp分布>标本全长的2/3[10]。

2 结果

2.1 不同临床病理特征患者血清TGF-β1、NF-κB、HSP60水平比较老年胃癌患者血清TGF-β1、NF-κB、HSP60水平与肿瘤直径、分化程度、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05)。见表1。

表1 不同临床病理特征患者血清TGF-β1、NF-κB、HSP60水平比较

2.2 不同感染程度Hp感染患者与未感染患者血清TGF-β1、NF-κB、HSP60水平比较不同Hp感染程度患者血清TGF-β1、NF-κB、HSP60水平均高于未感染患者(P均<0.05)，且随Hp感染程度的增加，血清TGF-β1、NF-κB、HSP60水平也随之升高。见表2。

表2 不同感染程度Hp感染与未感染患者血清TGF-β1、NF-κB、HSP60水平比较

2.3 血清TGF-β1、NF-κB、HSP60与老年胃癌患者Hp感染的关系Logistic回归分析发现，随着血清TGF-β1、NF-κB、HSP60水平升高，老年胃癌患者Hp感染风险逐渐升高(P均<0.05)。见表3。

表3 血清TGF-β1、NF-κB、HSP60与老年胃癌患者Hp感染的关系

2.4 血清TGF-β1、NF-κB、HSP60对老年胃癌患者Hp感染的预测价值绘制TGF-β1、NF-κB、HSP60预测老年胃癌患者Hp感染的ROC曲线显示，TGF-β1预测的曲线下面积(area under the curve，AUC)为0.805，95%CI为0.709～0.880，截断值>24.22 ng/mL，对应预测敏感性、特异性分别为67.53%、86.67%；NF-κB预测的AUC为0.761，95%CI为0.661～0.844，截断值>31.46 u/L，对应预测敏感性、特异性分别为59.74%、93.33%；HSP60预测的AUC为0.816，95%CI为0.722～0.890，截断值>108.5 pg/mL，对应预测敏感性、特异性分别为85.71%、73.33%；各指标联合预测的AUC为0.870，95%CI为0.784～0.931，最佳预测敏感性、特异性分别为71.43%、86.67%。见图1、2。

图1 各指标单一指标预测价值

图2 各指标联合指标预测价值

3 讨论

胃癌是我国发病率最高的恶性肿瘤之一，且随着我国人口老龄化加剧，老年胃癌患者人数逐渐增加[11-12]。由于胃癌尚无特异性诊断与治疗措施，寻找与胃癌密切相关的因子，对胃癌的早期诊治、改善治疗效果至关重要。

本研究发现，TGF-β1老年胃癌患者血清TGF-β1水平与肿瘤直径、分化程度、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移存在正相关关系，推测血清TGF-β1水平升高可促进胃癌的发生、发展。李苁[13]研究发现，胃癌患者血清中TGF-β1的表达明显高于正常人。马可等[14]文献报道，胃癌患者肿瘤组织及外周血中TGF-β1水平均显著高于健康群体，且与患者TNM分期、分化程度及有无淋巴结转移存在一定关系。TGF-β1是TGF-β 4个亚型中含量最高的一种，在恶性肿瘤发生、发展过程中，TGF-β1起着“双刃剑”作用，在肿瘤发生早期主要发挥抑制肿瘤细胞增殖的作用，但当肿瘤病灶形成后，其表达增加可促进肿瘤细胞的增殖、浸润和转移[15]。相关研究[16]指出，胃癌患者Hp感染与TGF-β1具有相关性，可能通过TGF-β1而作用于TGF-β/Smads信号通路参与胃癌的发生、发展。本研究还发现老年胃癌患者血清NF-κB、HSP60水平与肿瘤直径、分化程度、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移呈正相关，提示血清NF-κB、HSP60也可能参与胃癌的发生、发展。NF-κB信号通路是调控炎症反应的重要信号通路，NF-κB可与免疫球蛋白κ轻链基因增强子κB序列特异性结合，也能对转录活性核蛋白因子进行调节，其调控的基因在肿瘤发生、发展中均有参与，也会促进肿瘤细胞转移[17-18]。此外，Hp感染后，会损伤内皮细胞，诱发恶性肿瘤发生，而NF-κB参与内皮细胞损伤，Hp感染可通过NF-κB信号通路影响细胞的基因转录、信号传导，最终导致胃癌发生[19]。HSP60是HSP家族主要成员，具有促进慢性炎症、恶性肿瘤发生、发展的作用[20]。Hp感染可刺激HSP60合成、释放，HSP60表达增加可刺激机体炎症反应、肿瘤细胞活性增强，最终促进胃癌的形成过程[21]。HSP60在浅表性胃炎、消化性溃疡、萎缩性胃炎、不典型增生、胃癌组织中的表达阳性率呈逐渐增高趋势，HSP60过度表达参与胃癌的整个形成过程[22]。因此，NF-κB、HSP60水平升高与胃癌患者临床病理特征关系密切。

本研究通过Logistic回归分析及相关性分析发现，血清TGF-β1、NF-κB、HSP60水平升高与老年胃癌患者Hp感染的发生密切，提示血清TGF-β1、NF-κB、HSP60的过度表达均与老年胃癌患者Hp感染发生密切相关。可能是Hp感染引起胃部炎性反应及抑癌基因失活，导致各指标表达水平增加。因此我们推测可通过血清TGF-β1、NF-κB、HSP60水平预测老年胃癌患者Hp感染发生风险，目前临床鲜有此方面研究，我们首次通过ROC曲线分析发现，血清TGF-β1、NF-κB、HSP60在预测老年胃癌患者Hp感染中均具有一定价值，尤其是各指标联合能有效改善预测效能，可提高预测老年胃癌患者Hp感染的准确性，有助于治疗工作的开展。

综上所述，老年胃癌患者血清TGF-β1、NF-κB、HSP60表达水平与患者肿瘤分期、淋巴结转移等临床病理特征关系密切，且随着血清TGF-β1、NF-κB、HSP60水平升高，老年胃癌患者Hp感染风险逐渐升高，检测各指标水平有助于预测Hp感染风险，从而指导医生对Hp感染进行预防和治疗，具有较高临床应用价值。本研究创新之处在于明确了老年胃癌患者TGF-β1、NF-κB、HSP60表达与Hp感染的相关性，推测通过对Hp感染患者TGF-β1、NF-κB、HSP60表达进行调控可能是胃癌防治新方向，有待未来研究中进一步深入探讨。