2020年成都市病死猪巴氏杆菌病感染情况分析

李敏，周潇潇，黄云川，林鑫，李桂黎，李原野，李俐睿

（四川省成都市动物疫病预防控制中心，四川成都 610041）

为了解猪巴氏杆菌病在当前成都地区猪群中的感染和流行情况，2020 年2～12 月，笔者从成都市三个无害化处理厂采集了1 037份病死猪的淋巴结、脾脏和肝脏混合样品，用荧光定量RT-PCR 方法检测猪巴氏杆菌病病原，现将结果报告如下：

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 样品来源 在成都市三个无害化处理厂，采集来源于成都市18 个区（市）县的病死猪样品（淋巴结、脾脏和肝脏混合样），每月采集1 次，全年共采集混合样品1 037头份。

1.1.2 主要试剂 磁珠法病毒DNA/RNA 提取试剂盒、猪巴氏杆菌病单重荧光RT-PCR 检测试剂盒，均购自北京世纪元亨生物技术有限公司。

1.2 试验方法

1.2.1 样品处理 向无菌的2 mL Lysing Matrix组织研磨管中加入1 mL PBS液，再加入适量组织混合样品，置于FastPrep-24™5G 研磨仪中研磨30 s，取出置离心机中以8 000 r/min离心1 min，取上清备用。

1.2.2 DNA抽提 采用磁珠法病毒DNA/RNA提取法使用KingFisher DUO 自动化提取仪对病毒DNA 进行提取，执行Tian_KingFisher_Duo.bdz 程序进行DNA 抽提。程序执行完毕，取出DNA，用封口膜封好并保存于-20 ℃备用。

1.2.3 荧光定量RT-PCR 反应 将试剂盒中的PCR 反应液和阴、阳性对照进行瞬时离心，备用。向PCR 反应管内依次加入猪巴氏杆菌PCR反应液20 μL、DNA 模板5 μL，配制成25 μL 反应体系，并设立阴、阳性对照。反应条件如下：37 ℃2 min，95 ℃5min；95 ℃5 s，55 ℃40 s，共40 个循环；在55 ℃延伸时收集荧光信号，报告基团为“FAM”，淬灭基团为“NONE”。

1.2.4 结果判定 若阳性对照Ct 值≤35，阴性对照Ct值＞38或无Ct值，则试验成立。如Ct值≤35并出现特定的扩增曲线，则为猪巴氏杆菌病阳性；如35＜Ct值＜38需重新提取DNA进行扩增，如仍为可疑，则判定为阳性；如Ct 值＞38 或无Ct值，判为阴性。

2 结果与分析

2020年2月至12月，共检测病死猪内脏组织混合样品1 037 份，其中猪巴氏杆菌病核酸阳性的有93份，平均阳性率达8.97%。具体检测结果见表1。

检测结果显示2020 年成都市病死猪中猪巴氏杆菌病的阳性感染率为8.97%，说明该病在成都市猪群中有存在，对成都生猪养殖造成了一定的威胁。多杀性巴氏杆菌属于猪呼吸道内的一种常见条件性致病菌［1］，该病与气候变化、饲养管理不当等应激因素紧密相关［2］。猪群饲养密度大，圈舍通风不良，卫生条件差，或发生其他传染病时，均可导致猪的免疫力下降，从而诱发猪巴氏杆菌病［3］。

3 防控建议

3.1 疫苗免疫接种 疫苗接种是预防该病的主要措施，但大多中小养殖场（户）并未进行疫苗免疫。目前市面上有多种疫苗可供选择，如弱毒疫苗、灭活疫苗、荚膜亚单位疫苗等，多以联苗为主［4］，较为常见的有猪瘟-丹毒-肺疫三联活疫苗、猪丹毒-肺疫二联活疫苗等，均有较好的免疫效果。需要注意的是，在免疫前后10 d 左右，禁止饲喂含抗生素的药物和饲料，否则会直接影响免疫效果［5］。

表12020 年成都市无害化处理厂猪巴氏杆菌病检测结果

3.2 日常管理 猪群的日常管理与该病的发生密切相关。养殖场应科学规范养殖密度，及时清运粪污，降低猪舍内有害气体的浓度，保证猪舍内的空气流通，温湿度适宜；注意饲料营养和质量，禁止饲喂发霉变质的饲料，保持饮水清洁，提高猪只免疫力；做好驱虫、防蚊、防鼠工作；养殖场尽量做到“自繁自养”，坚持“全进全出”制度，尽可能地减少猪只混合饲养。

3.3 日常监测 定期对种猪进行病原学监测，对阳性猪及时隔离、淘汰，建立无巴氏杆菌病种猪群；商品猪也应定期检测，发现阳性猪尽快隔离治疗，及时淘汰无治疗价值的病猪，其他猪只进行紧急免疫或药物治疗。进行了免疫接种的猪场应定期进行免疫抗体监测，抗体水平较低的猪应及时补免，以保证猪群的免疫质量。

3.4 治疗 选用具有抑制和杀灭巴氏杆菌的抗菌药物，并结合对症治疗。有条件的养殖场最好进行药敏试验，有针对性的用药，以免造成抗生素滥用。

3.5 消毒 猪场应制定科学合理的消毒方案，对养殖场内外环境、人员车辆、垫料、排泄物及运载工具等进行严格消毒。禁止饲养狗、猫等动物，加强灭蚊蝇和灭鼠工作，控制疫病传播。每批猪出栏后彻底清洗消毒并空栏1周以上。

3.6 无害化处理 在生产过程中出现病猪死亡的，应将死猪装入专用的防渗漏尸体袋中，按规定进行无害化处理。同时，要对病死猪的圈舍和尸体堆放点进行全面彻底地清洗消毒。■