高效液相色谱法测定棉菜籽中甲萘威残留量

◎ 刘晓燕

（北京世纪科环生态农业研究院，北京 101102）

甲萘威又名西维因，是一种氨基甲酸酯类杀虫剂，由于杀虫谱广和毒性较低，在农业上应用广泛。目前，甲萘威残留检测多采用HPLC-FLD 柱后衍生法和HPLC-PDA 法。HPLC-FLD 柱后衍生法的灵敏度较高，但前处理复杂，衍生剂稳定性较差，耗时较长，在某种程度上也提高了检测成本，不宜广泛使用。HPLCPDA 法前处理简便，准确性和重复性较好，但在检测油性产品时，加标回收的数据达不到满意的效果。为了克服现有方法的不足，建立起广泛的应用基础，本实验采取与GB/T 5009.21—2003[1]完全不同的前处理方法，样品经乙酸甲醇提取、QuECHERS 试剂净化后，测定甲萘威的含量。

1 材料与方法

1.1 材料和试剂

棉菜籽，购自超市。

乙二胺-N-丙基硅烷化硅胶（PSA）、石墨化碳黑（GCB）、丙酮等为分析纯；甲醇、乙腈为色谱纯；弗罗里硅土柱：500 mg/6 mL；C18 固相萃取柱： 500 mg/6 mL；艾杰尔ASB-C18色谱柱：250 mm×4.6 mm， 5.0 μm。

甲萘威标准品：1 000 μg·mL-1，购自农业部环境保护科研监测所。

1.2 仪器及设备

LC-20AT 高效液相色谱仪（配二极管阵列（PDA）检测器、日本岛津公司）、FA2204B 分析天平（天津天马衡基仪器有限公司）、KDC-160HR 低速离心机（安徽中科中佳科学仪器有限公司）

1.3 标准储备液配制

准确移取浓度为1 000 μg·mL-1的标准物质溶液 1.0 mL，用甲醇定容至10 mL 配制成甲萘威标准储备液100.0 mg·L-1。

1.4 样品的提取与净化

称取2 g（精确至0.01 g）棉菜籽，加入1 g 氯化钠和10 mL 1%乙酸甲醇，涡旋3 min，静置30 min，加入适量的无水MgSO4冷却后涡旋3 min，5 000 r·min-1离心5 min，取5 mL 上层转移至分散性固相萃取管 （750 mg 硫酸镁、150 mg PSA、100 mg GCB）中，充分涡旋，5 000 r·min-1离心5 min，然后取2 mL 上清液转移至玻璃离心管中，40 ℃氮气吹干，20%甲醇定容1 mL，涡旋3 min，0.22 μm 有机滤膜过滤，待测。

1.5 色谱条件

色谱柱为艾杰尔ASB-C18：250 mm×4.6 mm， 5.0 μm；流动相：甲醇+水（80+20，V/V）；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：280 nm；柱温：40 ℃；进样量：10 μL。

2 结果与分析

2.1 实验条件优化

2.1.1 提取剂的选择

对样品棉菜籽中的甲萘威分别采用了正己烷、乙腈、丙酮、1%乙酸甲醇进行提取。如表1 所示，在相同的添加水平下，用1%乙酸甲醇为提取剂时，回收率高达88.8%，且甲萘威在酸性条件下会更加的稳定，杂质较少，峰形更好，因此本文最终选用1%乙酸甲醇作为提取溶剂。在1%乙酸甲醇为提取溶剂时，不用添加有机溶剂可达到去油效果，且对甲萘威的检测结果无影响。

表1 不同提取溶剂对化合物的回收率表

2.1.2 净化方法选择

GB/T 5009.21—2003[1]中的净化方法非常繁琐，且称样量大。本方法采取1%乙酸甲醇进行提取，通过无水硫酸镁进行有效的脱水后，将得到的提取液分别移取到分散性固相萃取柱、弗罗里硅土柱和C18 固相萃取柱中。平行测定3 次得到试验结果。经试验证实，C18 固相萃取柱和弗罗里硅土柱的平均回收率为65%～70%，分散性固相萃取柱的平均回收率能达到88%～90%，因此本文选用分散性固体萃取柱。

2.1.3 分散性固相萃取柱填料的配比

根据王晓菁等的研究成果[2]，加入50 mg PSA 和150 mg 无水硫酸镁进行前处理，净化效果不理想，因此实验中增加了配比量。因填料中添加GCB、PSA 能进行有效的净化，所以填料设计分别为1 组：600 mg无水硫酸镁和100 mgPSA，填料；2 组：900 mg 无水硫酸镁、100 mg PSA 和15 mg GCB；3 组：750 mg 无水硫酸镁、150 mg PSA 和100 mg GCB。添加相同量的甲萘威标准储备液进行加标回收试验，将不同配比的填料回收率进行比较。根据比对选择3 组，其配比为750 mg 无水硫酸镁、150 mg PSA 和100 mg GCB，该配比下的填料净化回收率最高。3 种不同填料配比实验回收率结果见表2。

表2 3 种不同填料配比实验结果表

2.1.4 波长的选择

将甲萘威标准溶液在高效液相色谱（带PDA 检测器）仪上200 ～300 nm 的范围内进行扫描测定，确认在280 nm 的波长处有最高吸收峰，且杂质也最少。因此选择检测波长为280 nm。分别以甲醇和水、乙腈和水作为流动相。

2.1.5 流动相的选择

甲醇和乙腈作为流动相时分离度均可以达到甲萘威检测的基本要求。考虑到乙腈成本比甲醇要高，所以选择甲醇水作为流动相。实验证明当甲醇与水的体积比为80 ∶20 时，甲萘威峰形对称性较好，且能有效的分离杂质，所以将流动相定为甲醇∶水（80 ∶20，V/V）。

2.1.6 色谱柱的选择

色谱柱选用了艾杰尔ASB-C18 型色谱柱和岛津ODS-C18 型色谱柱进行色谱分离甲萘威，实验结果表明，两种色谱柱所分离出的目标化合物的峰形，分离度都满足要求，考虑岛津ODS-C18 型色谱柱比艾杰尔ASB-C18 型色谱柱的成本要高，所以采用艾杰尔ASB-C18 型色谱柱（250 mm×4.6 mm，5.0 μm），分离的峰形满意，保留时间为19.910 min。

2.2 线性范围

根据色谱条件对0.10 mg·L-1、1.0 mg·L-1、2.0 mg·L-1、5.0 mg·L-1和10 mg·L-1甲萘威标准工作曲线进行测定，测定结果见表3。以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标进行绘制标准曲线，得回归方程y=141 016x-8 918.3，相关系数为0.999 8。

表3 甲萘威标准曲线数据表

2.3 检出限与定量限

在上述样品处理方法及色谱条件下，以信噪比 S/N=3 计，测得甲萘威检出限为0.1 mg·kg-1；以信噪比S/N=10 计，测得甲萘威定量限为0.5 mg·kg-1。根据GB 2763—2019[3]规定油料和油脂甲萘威中的最大残留量为1 mg·kg-1，因此该方法完全满足棉菜籽中甲萘威残留量分析的要求。

2.4 加标回收率的测定

对棉菜籽的阴性样品做加标回收试验，分别称取已处理的样品2.0 g，添加0.500 mg·kg-1、1.000 mg·kg-1、 1.500 mg·kg-1的甲萘威标准工作溶液进行做加标试验，并设置空白样，平行测定6 次。结果见表4，在 0.500 mg·kg-1、1.000 mg·kg-1、1.500 mg·kg-1的3 个 不同的加标水平回收率在82.9%～91.9%，相对标准偏差（RSD）在2.17%～4.25%，说明该方法的准确度能够满足甲萘威的测定要求。

表4 加标回收率实验结果表

2.5 精密度

准确配制甲萘威标准工作溶液1.0 mg·L-1，根据上述色谱条件，进样量10 μL，平行测定7 次。甲萘威色谱峰的保留时间波动小于0.1 min，如表5 所示，峰面积相对标准偏差（RSD）小于10%，表明方法精密度良好。

表5 精密度检测结果表

3 结论

本文采用QuECHERS 前处理技术以高效液相色谱法测定棉菜籽中的甲萘威，比GB/T 5009.21—2003 的方法操作简单、准确性高、重现性好，降低了实验中的成本，提高了操作人员的实验效率。GB 2763—2019[3]对甲萘威的最大检出量为0.1 mg·kg-1，用本方法检测出的甲萘威检出限小于0.1 mg·kg-1，定量限小于0.5 mg·kg-1，因此该方法适用于在棉菜籽上的残留量的检测。