钙结合蛋白S100P在非肌层浸润性膀胱癌组织中的表达及临床意义〔1〕

田鑫，赵辉，王志强，李扬，朱朝阳*

(1.河南大学淮河医院，河南 开封 475000；2.河南大学药学院，河南 开封 475004)

膀胱癌是泌尿系统常见的恶性肿瘤之一，其中非肌层浸润性膀胱癌(NMIBC)约占膀胱癌初发患者的70%[1]。经尿道膀胱肿瘤切除术(TURBT)是治疗NMIBC的首选治疗方式，但术后复发率、进展率较高[2]。因此，探索新的预后标志物和有效的基因治疗靶点已成为目前研究的热点。S100蛋白家族是一类钙结合蛋白，在细胞分化、细胞周期活动及细胞外基质分泌等过程中发挥重要作用，并与肿瘤的浸润和转移有关[3]。近年研究表明[4-5]，S100P在多种恶性肿瘤中异常表达，与肿瘤的发生、发展及预后密切相关。本研究旨在探讨S100P与NMIBC患者临床病理特征及预后的关系，为NMIBC的临床诊治提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2015年6月—2016年6月收治的NMIBC患者42 例，并经TURBT术获得癌组织。纳入标准：原发性NMIBC(术后病理学确诊)且接受TURBT术及术后膀胱灌注治疗；无淋巴结受侵及远处转移；临床随访资料完整。排除标准：肌层浸润性膀胱癌患者(肿瘤分期≥T2)；术前接受过放化疗者；合并心力衰竭、慢性阻塞性肺病、肝功能不全、肾衰竭者；有肿瘤病史或自身免疫性病史。同期的16 例膀胱囊肿患者行开放性手术时取的正常膀胱组织作为对照组。本研究通过医院伦理委员会批准，患者或家属均对本研究知情同意。

1.2 方法

统计患者临床资料：包括年龄、性别、吸烟史、肿瘤数量、肿瘤大小、肿瘤分期、肿瘤分级等一般资料。

统计患者术后并发症、术后导管留置时间及住院时间等术后短期恢复指标。

Western Blot检测蛋白的表达：取组织研磨成匀浆，采用蛋白提取试剂盒提取总蛋白，并用二喹啉甲酸法测定蛋白浓度。取40 μg蛋白样品在聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳分离，然后将蛋白转移到聚偏二氟乙烯膜上，并在含有5%脱脂乳的磷酸缓冲液中封闭1 h。加入一抗：S100P抗体(1∶100)和β-actin抗体(1∶2 000)，4 ℃孵育过夜，然后加入辣根过氧化物酶标记的IgG(1∶1 000)二抗，室温下孵育1 h。洗膜后采用电化学发光剂显色，曝光，使用凝胶图像分析系统(Bio-RAD)进行灰度分析。目的蛋白表达水平用相对灰度值表示，并将相对灰度值>0.1定义为阳性表达，由此将NMIBC患者分为S100P(+)组和S100P(-)组。

1.3 术后随访

采用电话及门诊定期复查等方式对患者进行随访。术后1 年内每3 个月随访1 次，1 年后每6 个月随访1 次，如出现复发或转移则改为3 个月随访1 次，随访截止至2019年6月。复查内容包括尿常规、CT及膀胱镜检测等，依据检查结果判断是否复发。

1.4 统计学方法

2 结 果

2.1 S100P蛋白在NMIBC癌组织中的表达

Western Blot检测S100P蛋白的表达(见图1)，结果显示，NMIBC患者癌组织中S100P蛋白的表达水平为0.44±0.11，明显高于正常膀胱组织的0.07±0.02(P<0.05)；NMIBC患者中S100P的阳性表达率为79%(33/42)，对照组的阳性表达率为6.25%(1/16)，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。

图1 癌组织及正常膀胱组织的S100P表达

2.2 S100P蛋白与临床资料的关系

根据S100P是否为阳性表达将患者分为S100P(+)组和S100P(-)组。两组患者年龄、性别、吸烟史、肿瘤数量及肿瘤大小比较，差异无统计学意义(P>0.05)；两组患者的肿瘤分期和肿瘤分级比较，差异有统计学意义(P<0.05)(见表1)。

2.3 S100P蛋白与NMIBC患者术后短期恢复的关系

S100P(+)组患者术后并发症发生率和住院时间均明显高于S100P(-)组(P<0.05)，而两组患者的术后导管留置时间比较，差异无统计学意义(P>0.05)(见表2)。

2.4 S100P蛋白与NMIBC患者无复发生存率的关系

S100P(+)组和S100P(-)组患者的1 年无复发生存率比较，差异无统计学意义(P>0.05)，但S100P(+)组的3 年无复发生存率明显低于S100P(-)组，差异有统计学意义(P<0.05)(见表3)。

表1 S100P(+)组和S100P(-)组患者临床资料比较 例(%)

表3 S100P(+)组和S100P(-)组患者术后无复发生存率比较 例(%)

3 讨 论

S100家族是多功能信号蛋白家族，可介导钙离子依赖的信号传导途径，参与调控细胞生长、分化及维持胞内外钙离子平衡等多种生物学过程[6]。有研究报道多个S100家族成员在肿瘤组织中异常表达[7-8]。S100P是S100蛋白超家族成员之一，可通过与钙周期结合蛋白(CaeyBP/SIP)、埃兹蛋白(Ezrin)、晚期糖基化终末产物(RAGE)、S100P结合蛋白(S100PBPR)等靶蛋白结合，参与细胞信号转导过程，从而介导肿瘤的生长、增殖、浸润和转移等病理过程[9-10]。有证据显示，S100P在多种恶性肿瘤组织中异常表达，与肿瘤发生发展密切相关[11-12]。Wang等[13]研究发现，前列腺癌组织中S100P阳性率明显低于良性前列腺增生和正常组织，其表达水平与TNM分期及远处转移密切相关。麦聪等[14]研究表明，S100P在胃腺癌组织中的阳性表达下调，与肿瘤大小、分化程度、TNM分期、淋巴结转移和浸润深度有关。而田鑫等[15]研究发现，沉默S100P后膀胱癌细胞的增殖抑制率和凋亡率明显升高，说明S100P与膀胱癌细胞的增殖、凋亡有关。本研究结果发现，NMIBC癌组织中S100P蛋白的表达明显高于正常膀胱组织，且NMIBC患者中S100P表达阳性率明显高于对照组，同时随着肿瘤分期及肿瘤分级的增加，S100P的阳性表达率明显升高，表明S100P的高表达可能激活NMIBC组织中的某些肿瘤相关因子或相关信号通路，进而参与NMIBC的发生与发展，推测S100P可能是NMIBC的潜在标志物，可作为NMIBC基因治疗的一个候选基因。此外，近年研究表明[16]，S100P与多种恶性肿瘤的预后有关。Ge等[17]研究发现，胃癌组织中S100P的表达明显高于正常对照组；S100P在胃癌高表达与TNM分期及预后相关，且S100P高表达患者的5 年生存率明显低于低表达患者。Wang等[18]研究表明，上皮性卵巢癌标本中S100P表达明显高于输卵管组织和正常卵巢组织，且是总体生存期和无进展生存期的独立预后因素。本研究表明，S100P表达与术后并发症发生率、住院时间及3 年无复发生存率有关，提示S100P与NMIBC患者预后有关，但S100P是否是NMIBC患者预后的独立影响因素有待进一步的探讨。

综上所述，S100P在NMIBC癌组织中高表达，与肿瘤分期及肿瘤分级密切相关，且与术后短期恢复及3 年无复发生存率有关，推测其可作为NMIBC的临床诊断和预后评估指标。但是本研究的样本较少，且为单中心临床研究，可能导致研究结果存在偏倚，后续还需扩大样本量进行多中心深入研究。