SLC6A4基因多态性位点rs2020936与中国西北部人群原发性失眠关系的研究

陈文娟 谢宇平 周丽雅 王旭斌 王静 马薇 惠培林 王金凤 苏晓艳 郭斌 陈雪萍 范杰 赵媛 杨军 张尚丽 刘瑜

(1 甘肃中医药大学，兰州，730000； 2 甘肃省人民医院睡眠医学中心，兰州，730000； 3 兰州大学基础医学学院医学遗传研究所，兰州，730000)

原发性失眠(Primary Insomnia，PI)是指以睡眠障碍(难以入睡和/或维持睡眠困难或睡眠后精力未恢复)为几乎唯一的症状，每周至少出现3晚睡眠困难，时间在3个月以上，并具有临床意义的苦恼及社交、职业或其他功能的损害；排除由其他睡眠与精神/心理障碍以及躯体的疾病、乙醇或药物等导致的失眠[1]。研究证明长期失眠可引起焦虑、抑郁、记忆力下降[2]、免疫力低下，罹患心血管疾病、脑血管疾病、高血压、糖尿病、痴呆、精神疾病和骨骼肌疾病的风险增加[3]，并增加心脏病死亡率[4]。

1 材料与方法

1.1 一般资料 选取2016年1月至2019年12月甘肃省人民医院睡眠医学中心收治的原发性失眠患者78例作为观察组，另选取同期的体检中心的健康人群82例作为对照组，对受试者进行多导睡眠监测及量表评估，采用飞行质谱法对SNP位点进行基因分型，SPSS 22.0统计软件进行分析。

1.2 纳入标准 所有病例按照《美国精神障碍诊断与统计手册》第5版(DSM-5)的PI诊断标准纳入。

1.3 排除标准 1)受试者伴有严重躯体疾病患者，如高血压、心脏病、甲状腺功能异常、糖尿病等；2)有其他明确的失眠原因，如近期有重大心理应激而致失眠者；3)PSG监测结果为主观性失眠患者；4)PSG监测结果AHI>15以及不适合量表评估的低龄和高龄人群均被排除。本研究经过我院伦理委员会批准并经患者及其家属知情同意。

1.4 研究方法

1.4.1 SNP位点选择 DNA提取、SNP分型、引物合成从HapMap计划以及美国国立生物技术信息中心(NCBI)单核苷酸多态性数据库选择5-HTT基因功能性SNP：1)在非翻译区，我国人群中MAF>5%；2)在5′启动子2 kb以内，我国人群中MAF>5%。依此标准选择SLC6A4基因位点rs2020936，该位点位于5′端非翻译区。采用TIANamp Blood DNA Kit血液基因组DNA提取试剂盒(离心柱型)提取DNA。应用TYPER4.0软件获取原始数据及基因分型图，然后进行生物信息分析得到最终SNP基因分型检测数据,飞行质谱技术进行基因测序。基因分析设计软件(Assay Designer3.1)，进行引物设计合成。引物序列为F:5′-ACGTTGGATGTAAATGGTGAGCAGGGTGAG-3′；R:5′-ACGTTGGATGGGCTCAAGAATGCAAACACC-3′(北京博淼生物科技公司)。

1.4.2 量表检测、PSG监测 所有受试者都在专业医生的指导下进行了以下测试以评估其心理状态。失眠严重程度指数(Insomnia Severity Index，ISI)、匹兹堡睡眠质量指数表(Pittsburgh Sleep Quality Index，PSQI)：通过上述2个问卷量表，筛选PI组入组人群。状态-特质焦虑问卷(STAI)、Beck抑郁自评量表排除焦虑相关失眠及抑郁相关失眠，并且评估PI患者因失眠导致的焦虑及抑郁状态，记录两周睡眠日记。对所有病例进行整夜睡眠监测。记录的时间不少于7 h。

1.5 统计学方法 采用SPSS 22.0统计软件进行数据分析，采用两独立样本t检验，方差分析，卡方检验，logistic回归对数据进行统计分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Rs2020936基因型频率、等位基因频率分布 2组患者Rs2020936基因型频率、等位基因频率分布比较，差异均无统计学意义(P>0.05)；对其进行性别分组后比较，差异无统计学意义(P>0.05)。原发性失眠患者多导睡眠监测结果与rs2020936同基因型间进行统计分析发现，不同的基因型间REM(%)睡眠(P=0.006)期及睡眠效率(%)(P=0.001%)之间比较，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。logistic回归分析结果显示，SNP位点rs2020936不是中国西北部人群原发性失眠的危险因素(P=0.735)。见表2。

表1 多态性位点rs2020936基因型与相关量表和多导睡眠监测结果分布

表2 可能与原发性失眠相关因素的logistic回归分析

3 讨论

PI目前缺少诊断特异性指标，属排除性疾病，因而造成了诊断和治疗上的不确定性。

由于无创伤行中枢神经组织学及分子水平研究目前尚无有效方法，通过临床表型结合血液客观检测基因多态性的方法在提供分子机制线索中就显得尤为重要。Su S等[5]在研究SLC6A4基因如何影响抑郁症状与IL-6之间的关系时发现rs2020936与Beck抑郁量表显著相关。Ishii T等[6]发现其与COPD发病率显著相关。但本研究没有发现SLC6A4基因多态性rs2020936与原发性失眠症之间的相关性。值得注意的是，该突变与原发性失眠症患者的睡眠效率有关。因此，我们推测突变导致5-HTT蛋白异常表达，基因个体突触间隙5-HT再摄取能力降低，继而导致患者睡眠质量不佳。本研究旨在为原发性失眠的研究提供更多思路，为今后其基因诊断和药物的个体化治疗提供更多参考。