凤丹牡丹鲜花原液清除DPPH自由基功效研究

毛文岳，孙春燕，纪海鹏，郑立波，刘继国

（1.天宝牡丹生物科技有限公司，山东菏泽 274000；2.北京日化协会化妆品功效评价专业技术会，北京 100048；3.菏泽市牡丹产业发展中心，山东菏泽 274000）

2013年，凤丹牡丹（Paeonia ostii T.Hong et J.X.Zhang）花及种子油均被国家批准为新食品原料，在相关文件中又称油用牡丹；牡丹花水也被列入我国《已使用化妆品原料名称目录》[1]。目前，对牡丹花的研究主要集中在栽培育种、资源调查、品种分类及花期调控等方面，牡丹花的活性成分分析与提取及产品开发等方面的探索还较少，尚未进行规模化的综合开发利用[2]。研究表明，牡丹花含有丰富的类黄酮、精油及酚类物质等，具有较强的清除自由基的能力，可用于高端化妆品的生产原料，具有美容护肤功效[3-4]。陈佳龄等[5]采用水提法得到的牡丹花水提液，可有效清除羟自由基，对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活性均有良好的抑制作用；牡丹花水提液质量浓度为1.00 g/L时，自由基清除率达91.67%。郭香凤等人[6]的研究表明，牡丹花水提液具有显著清除氧自由基的活性。本研究测定了不同工艺制备的牡丹鲜花原液清除DPPH自由基的能力，并与玫瑰鲜花纯露进行了比较，以期为进一步高值化开发牡丹花提供参考。

1 材料与方法

1.1 样品材料

凤丹牡丹鲜花，天宝牡丹生物科技有限公司；大马士革玫瑰鲜花纯露，法国Florihana·馥家，基依国际化妆品公司。

1.2 仪器与试剂

ST360型酶标仪，上海科华生物工程股份有限公司；FA1004型电子天平，宁波华丰电子仪器厂；ZY-60HM9微波仪，广州志雅工业用微波设备有限公司；LYZ-20H1螺旋榨机，山东曲阜圣铭机械有限公司。

1,1-二苯-2-苦基肼（DPPH），纯度97%，武汉卡诺斯科技有限公司；无水乙醇，分析纯，国药集团化学试剂有限公司；维生素C，分析纯，天津大茂化学试剂厂；去离子水，天宝牡丹生物科技有限公司自制。

1.3 试验方法

1.3.1 牡丹鲜花原液制备

（1）蒸馏法：蒸馏法制备的牡丹鲜花原液Ⅰ；（2）微波联合压榨过滤法：对牡丹鲜花花瓣进行微波（频率 2 445～2 455 MHz，75～80 ℃）灭酶 5 min，处理后用螺旋榨机压榨[2-5]，过滤，所得滤液为牡丹鲜花原液Ⅱ[6]。

1.3.2 溶液配制

（1）DPPH乙醇溶液的配置：准确称取DPPH 20 mg，加入无水乙醇溶解并定容于250 mL容量瓶中，获得浓度为2.0×10-4mol/L的DPPH乙醇溶液；0～4 ℃下避光保存，现配现用，4 h内有效。

（2）测试液配制：将玫瑰鲜花纯露原液、牡丹鲜花原液Ⅰ均用去离子水稀释，得到5%、10%、15%、20%、30%、50%、75%、100%的测试液；将牡丹鲜花原液Ⅱ用去离子水稀释，得到0.5%、1.0%、3.0%、5.0%、7.0%、100%的测试液。

1.3.3 DPPH自由基清除率计算

准确量取1 mL待测液、1 mL无水乙醇分别与1 mL DPPH乙醇溶液混匀，反应30 min后，在517 nm处测吸光度值（分别记为A1、A2）；量取1 mL待测液与1 mL无水乙醇混匀，反应30 min后，在517 nm处测吸光度值（记为A3）。根据公式（1）计算待测液的DPPH清除率。

用分析天平准确称取10 mgVc，加入去离子水稀释定容至1 L，得到浓度为10 mg/L的测试液，记为阳性对照组；用去离子水作为阴性对照，记为阴性对照组。

2 结果与分析

2.1 不同浓度样品对自由基清除率的影响

如图1所示，阳性对照组（0.1%的维生素C）对DPPH自由基的清除率为91.44%；随着玫瑰鲜花纯露浓度的增大，DPPH自由基的清除率呈上升趋势，原液（浓度100%）对DPPH自由基的清除率为46.33%；测试样品玫瑰鲜花纯露在生产实践中常用浓度为5%～10%，该条件下的DPPH自由基清除率为5%～18%。

图1 不同浓度样品对自由基清除率的影响

测试样品牡丹鲜花原液Ⅰ和玫瑰鲜花纯露清除率曲线交替上升，对DPPH自由基的清除能力基本处于同一水平；测试样品牡丹鲜花原液Ⅱ的清除率曲线基本呈线性增加，曲线斜率显著大于另外两个样品，说明压榨过滤法制备的牡丹鲜花原液对DPPH自由基的清除能力明显高于测试样品玫瑰鲜花纯露和蒸馏法制备的牡丹鲜花原液Ⅰ。牡丹鲜花原液Ⅱ在生产实践常用浓度1.0%～7.0%条件下，对DPPH自由基清除率为24.87%～89.50%。

3 结论

牡丹鲜花原液对DPPH自由基具有很好的清除作用，且牡丹鲜花原液质量浓度越大，对DPPH自由基的清除作用越好；微波联合压榨过滤法制备的牡丹鲜花原液清除DPPH自由基的能力显著优于蒸馏法和对照组玫瑰鲜花纯露。在工业化常用浓度1.0%～7.0%条件下，压榨过滤法制备的牡丹鲜花原液对DPPH自由基清除率达到24.87%～89.50%。