Ras效应因子-1在上皮性卵巢肿瘤中表达水平及意义

郑 乐

中国医科大学肿瘤医院(辽宁省肿瘤医院) 妇科，辽宁 沈阳 110042

卵巢恶性肿瘤在女性生殖器官恶性肿瘤中死亡率居第1位，病因尚未明确。恶性肿瘤的发生和发展通常是一个多因素、多阶段的过程，包括原癌基因激活、肿瘤抑制基因失活等。有研究表明，Ras基因为原癌基因，其激活突变参与多种肿瘤的发生和发展过程，如膀胱尿路上皮癌[1]、胃癌[2]、肺癌[3]、肝癌[4]等。Ras效应因子-1(Ras interactor-1，RIN1)是人体内的一个特征性Ras效应因子[5]，能够直接激活ABL络氨酸激酶及RAB5家族的GTP酶[6]，还可参与表皮生长因子受体的内吞作用[7]。本研究旨在探讨RIN1在上皮性卵巢肿瘤中的表达水平及意义。现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象 收集辽宁省肿瘤医院自2017年1月至2018年12月收治的150例接受手术治疗患者的新鲜卵巢组织标本。150例患者中，正常卵巢30例(A组)，上皮性卵巢良性肿瘤30例(B组)，上皮性卵巢交界性肿瘤30例(C组)，上皮性卵巢恶性肿瘤60例(D组)。D组中，病理分期Ⅰ+Ⅱ期30例，Ⅲ+Ⅳ期30例；分化程度高-中分化30例，低分化30例。患者及其家属均签署知情同意书。本研究经医院伦理委员会批准。

1.2 仪器及试剂 RIN1、β-actin兔抗人多克隆抗体，RIN1、β-actin引物，实时定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)试剂盒，PVDF膜(北京博奥森公司)；SDS-PAGE凝胶配制试剂盒(南京凯基生公司)；电泳仪，实时定量PCR仪等。

1.3 Western Blot法检测RIN1蛋白表达水平 组织块称质量，提取组织中核蛋白并测定其含量，电泳，转膜，封闭，加一抗，孵育PVDF膜，4℃过夜，加二抗，室温振荡孵育，Western Blot试剂盒显色，凝胶成像系统分析条带灰度值并进行比较。

1.4 PCR法检测RIN1 mRNA表达水平 提取标本总RNA，采用Takata等方法进行PCR检测。RIN1上游引物为5′-GGCAGCAGAGGAGTAGCTTGA-3′，RIN1下游引物为5-GCTTGCTGGCGCTAAAAGG-3′，β-actin上游引物为5-TTAGTTGCGTTACACCCTTTC-3′，β-actin下游引物为5-ACCTTCACCGTTCCAGTTT-3′。采用2-△△Ct法分析结果，实验重复3次。

2 结果

2.1 RIN1蛋白表达水平比较 A组、B组、C组、D组RIN1蛋白相对表达量分别为(0.096 2±0.026 2)、(0.371 0±0.028 3)、(0.564 3±0.056 7)、(0.732 0±0.098 2)，两两比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。见图1。D组中，Ⅲ+Ⅳ期RIN1蛋白相对表达量高于Ⅰ+Ⅱ期[(0.813 0±0.061 5)比(0.651 0±0.047 6)]，低分化RIN1蛋白相对表达量高于高-中分化[(0.785 0±0.087 9)比(0.679 0±0.078 0)]，差异均有统计学意义(P<0.05)。

图1 Western Blot法检测RIN1蛋白表达水平

2.2 RIN1 mRNA表达水平比较 A组、B组、C组、D组RIN1 mRNA相对表达量分别为(3.890 0±0.440 5)、(5.517 0±0.281 7)、(7.593 0±0.636 8)、(9.722 0±1.177 0)，两两比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。D组中，Ⅲ+Ⅳ期RIN1 mRNA相对表达量高于Ⅰ+Ⅱ期[(10.710 0±5.248 0)比(8.733 0±0.723 7)]，低分化RIN1 mRNA相对表达量高于高-中分化[(10.450 0±0.895 9)比(8.99 0 0±0.953 9)]，差异均有统计学意义(P<0.05)。

3 讨论

恶性肿瘤的发生、发展、侵袭、转移等与原癌基因、抑癌基因的突变、失调有关。RIN1作为Ras的效应因子，在细胞中广泛存在。RIN1定位于11q13.2，主要功能结构域包括ABL结合结构域、Ras结合结构域、与空泡蛋白分选蛋白相关的鸟苷酸交换因子等[8-9]。其主要功能如下：通过与H-Ras竞争性结合，干扰其信号传导，抑制H-Ras介导的细胞转化[5]；具有Rab5a GTPase的GEF活性，通过与Rab5直接结合，泛素化Ras，介导表皮生长因子受体内陷降解，促进细胞内吞[10]。Inoue等[11]研究报道，RIN1可能通过Ras-Erk信号通路影响结肠癌的发生和发展。Wang等[3]研究表明，在非小细胞肺腺癌组织中，RIN1的表达水平与组织分化程度、肿瘤临床病理分期、淋巴结转移情况相关，高表达组患者预后更差。

本研究结果显示：上皮性卵巢恶性肿瘤的RIN1蛋白相对表达量、RIN1 mRNA相对表达量均明显高于正常卵巢组织、上皮性卵巢良性肿瘤、上皮性卵巢交界性肿瘤，且上皮性卵巢恶性肿瘤Ⅲ+Ⅳ期高于Ⅰ+Ⅱ期，低分化高于高-中分化。这提示：RIN1可促进上皮性卵巢肿瘤细胞增殖，并抑制凋亡；RIN1表达水平与肿瘤的临床病理分期、分化程度相关。

综上所述，随着上皮性卵巢肿瘤恶性程度上升，RIN1表达明显增强，RIN1在上皮性卵巢恶性肿瘤的发生和发展过程中具有重要的促进作用。RIN1可成为判断肿瘤发生、发展及预后的重要指标，后续深入研究RIN1促进上皮性卵巢恶性肿瘤发生和发展的分子生物学机制，有望为卵巢癌提供新的治疗靶点。