复方小儿退热栓中对乙酰氨基酚含量测定及其均匀度研究*

谢思敏，陈家仪，顾利红，栗建明

（广东省广州市药品检验所·国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室，广东 广州 510160）

复方小儿退热栓由对乙酰氨基酚、人工牛黄、南板蓝根浸膏粉制成，有解热镇痛、利咽解毒、祛痰定惊功效，临床多用于小儿发热、上呼吸道感染、支气管炎肺热咳嗽［1-4］，特别适用于小儿高热惊厥症，临床疗效明显［5-7］。其质量标准收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂（第14 册）》（WS3-B-2748-97），部分企业执行企业注册标准时采用紫外分光光度法测定对乙酰氨基酚含量，方法专属性较差，不能完全排除处方中其他成分对测定结果的干扰，具有一定局限性。王巍等［8］采用反相高效液相色谱（RPHPLC）法测定其对乙酰氨基酚的含量，但含量均匀度的控制未见报道。本研究中建立了测定复方小儿退热栓中对乙酰氨基酚含量及其均匀度的方法，现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

1260 Ⅱ型高效液相色谱仪，包括G7111A 型四元泵、G7129A 型自动进样器、G7117C 型二极管阵列检测器、OpenLab CDS 2.4 色谱工作站，均购自美国Agilent公司；XS 204 型电子天平（精度为万分之一），XP26 型电子天平（精度为百万分之一），均购自瑞士Mettler Toledo 公司；P300H 型超声波清洗机（德国Elma 公司）。

1.2 试药

对乙酰氨基酚对照品（中国食品药品检定研究院，批号为100018-201610，含量以99.9%计）；17 批市售复方小儿退热栓样品（市售品。生产企业A，批号分别为20180301，20181005，20190301，20190604；生产企业B，批号分别为B05001，B05002，B05003；生产企业C，批号分 别 为 180301，180302，180303，180401，180402，180403，180601，180602，180603，180604）；甲醇（德国Merck 公司）、冰醋酸（美国阿拉丁工业公司）均为色谱纯；其余试剂均为分析纯（广州化学试剂厂）；水为自制Milli-Q 超纯水。

1. 对乙酰氨基酚A. 对照品溶液 B. 供试品溶液 C. 阴性对照品溶液图1 高效液相色谱图1.paracetamolA. Reference solution B.Test solution C.Negative reference solutionFig.1 HPLC chromatograms

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent Zorbax SB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（20 ∶80，V／ V）；检测波长：244 nm；流速：1.0 mL／min；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。

2.2 溶液制备

对照品溶液：取对乙酰氨基酚对照品约3.0 mg，精密称定，置50 mL 容量瓶中，加20%甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液：取本品20 粒，研细，称取适量（约相当于对乙酰氨基酚150 mg），精密称定，置50 mL 容量瓶中，加甲醇约40mL，置50℃超声浴中处理（功率为380W，频率为37 kHz，下同）10 min，取出，放冷至室温，用甲醇稀释至刻度，于4 ℃下放置1.5 h，离心，上清液放置至室温，精密量取上清液2 mL，置100 mL 容量瓶中，用20%甲醇稀释至刻度，摇匀，经0.45 μm 微孔滤膜滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得。

阴性对照品溶液：按样品处方制备工艺制得不含对乙酰氨基酚的阴性样品，同供试品溶液制备方法制备，即得。

2.3 方法学考察

专属性试验：吸取2.2 项下3 种溶液各10 μL，按选定色谱条件测定，记录色谱峰。结果对乙酰氨基酚的保留时间为6.090 min，理论板数按对乙酰氨基酚峰计应不低于2 000，基线分离良好，且阴性对照无干扰。色谱图见图1。

线性关系考察：取对乙酰氨基酚对照品20.502 mg，精密称定，置100 mL 容量瓶中，加流动相溶解并定容，作为对照品贮备液。分别精密量取1，2，5，10，15，20 mL，置25 mL 容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取上述溶液各10 μL，依法进样测定，以峰面积积分值（Y）为纵坐标、进样量（X，μg）为横坐标进行线性回归，得回归方程Y＝22 588X-64.731，r＝0.999 5（n＝6）。结果表明，对乙酰氨基酚进样量在0.081 9 ～1.639 μg 范围内与峰面积积分值线性关系良好。

精密度试验：精密吸取2.2 项下对照品溶液，按选定色谱条件连续进样6 次，测定。结果对乙酰氨基酚峰面积的RSD为0.05%（n ＝6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取样品（批号为20190604）适量，依法制备供试品溶液，室温放置，分别于0，2，4，6，8，12，24 h时按拟订色谱条件进样测定。结果对乙酰氨基酚峰面积的RSD为0.08%（n ＝7），表明室温下供试品溶液在24 h 内基本稳定。

重复性试验：取样品（批号为20190604）适量，依法制备供试品溶液，平行制备6 份，按选定色谱条件进样测定。结果含量的RSD为0.67%（n ＝6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：取已知含量的样品（批号为20190604，含量为153.082mg／g）0.5g，精密称定，共9份，分别置50 mL 容量瓶中，并精密加入对乙酰氨基酚对照品溶液（质量浓度为3.004 mg／mL，溶剂为甲醇）20，25，30 mL，依法制备供试品溶液，分别精密吸取10 μL，依法进样测定，并计算回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果（n ＝9）Tab.1 Results of the recovery tests（n ＝9）

2.4 样品含量及其均匀度测定

含量测定：取17 批样品，按2.2 项下方法制备供试品溶液，照选定色谱条件测定，按外标法计算含量。取其中的6 批样品，按原标准方法，采用紫外-可见分光光度法测定样品中对乙酰氨基酚的含量，依法计算，结果见表2。

表2 复方小儿退热栓样品含量及其均匀度测定结果Tab.2 Determination of content and content uniformity of paracetamol in Compound Child Antifebrile Suppository

含量均匀度（A+2.2S）测定：取17 批样品各10 粒，分别置50 mL 容量瓶中，加甲醇40 mL，置50 ℃超声浴中超声处理10 min，取出，放冷至室温，用甲醇稀释至刻度，于4 ℃下放置1.5 h，离心，上清液放置至室温，精密量取2 mL，置100 mL 容量瓶中，用20%甲醇稀释至刻度，摇匀，经0.45 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液，即得，照选定色谱条件测定，按外标法计算含量，按2015 年版《中国药典（四部）》通则0941［9］含量均匀度检查法，计算含量均匀度（A+2.2S）。结果见表2。

3 讨论

由于本品处方中含有南板蓝根浸膏粉，供试品溶液过滤后颜色依然较深，导致紫外吸光度易出现偏差，测定值均偏高，影响测定结果的准确性，具有一定局限性。本试验中建立的对乙酰氨基酚HPLC 含量测定方法，阴性对照无干扰，方法专属性强，可用于复方小儿退热栓中对乙酰氨基酚的含量测定。

王巍等［8］报道，样品以0.01 mol／L 氢氧化钠溶液溶解提取稀释后，采用HPLC 法、以甲醇-0.05 mol／L醋酸铵溶液（10 ∶90，V／ V）为流动相测定对乙酰氨基酚的含量。预试验中考察了甲醇-0.05 mol／L 醋酸铵溶液（10 ∶90，V／ V）、甲醇-0.5%冰醋酸（20 ∶80，V／ V）和甲醇-水（20 ∶80，V／ V）作为流动相，分离效果均较好，色谱峰对称，阴性对照无干扰，故选择甲醇-水（20 ∶80，V／ V）作为流动相，方法简单，且可减少含盐流动相的使用；样品采用甲醇溶解提取后冷冻除去栓剂中的基质，起到了纯化的作用，同时避免了使用强碱溶液，减少了对色谱柱柱效的影响。

3 家药品生产企业生产的复方小儿退热栓有每粒0.7 g 和1.0 g 两种规格，但对乙酰氨基酚含量均为150 mg，小于每个单剂质量的25%，且本品属儿科用药，建议检查含量均匀度［9］，从制剂学角度加强对药物的质量控制。